血清炎癥因子在類風濕關節(jié)炎進展中的價值

任云麗 張小麗

(南通市第一人民醫(yī)院風濕免疫科，江蘇 南通 226001)

類風濕關節(jié)炎是一種異質性和全身性的自身免疫性疾病，主要病理特征為滑膜細胞炎癥，由大量的炎癥細胞如淋巴細胞和巨噬細胞浸潤，滑膜增生增厚，新生血管形成，滑膜液分泌過多造成〔1～3〕。與早期類風濕關節(jié)炎患者相比，晚期類風濕關節(jié)炎患者會從一些緩慢進行性的消長癥狀到伴有結節(jié)階段，再到甚至全身炎癥的嚴重破壞性的階段，導致晚期類風濕關節(jié)炎患者的預期壽命顯著降低。而且，由于晚期類風濕關節(jié)炎患者的免疫系統(tǒng)長期處于獲得性缺陷，非特異性抵抗力顯著下降，導致晚期類風濕關節(jié)炎患者感染、患心血管疾病和腎臟疾病的概率也顯著增高，也成為提升晚期類風濕關節(jié)炎患者死亡率的主要原因之一〔4，5〕。女性發(fā)病率高達男性的2～3倍，且女性在絕經前后類風濕關節(jié)炎病情活動度也存在明顯變化〔6〕。此外，類風濕關節(jié)炎還是一種具有大量遺傳成分的多基因疾病，遺傳力大約為60%。白細胞介素(IL)-2、腫瘤壞死因子(TNF)-α等是參與類風濕關節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中的重要的血清炎癥因子。IL-2是一種活化并維持T細胞分化和增殖的炎癥因子，IL-2在類風濕關節(jié)炎患者中起到調節(jié)機體免疫的作用，當血清中IL-2的分泌量增多時，發(fā)生一系列與類風濕關節(jié)炎有關的炎癥反應，進一步造成免疫調節(jié)功能發(fā)生紊亂〔7〕。TNF-α的主要功能是作用于巨噬細胞，其吞噬作用會得到增強，還可進一步促進產生其他的炎癥細胞因子。TNF-α還可誘導成纖維樣滑膜細胞(FLS)的增殖，導致血管翳的形成．同時還可以上調膠原酶和基質金屬蛋白酶的表達水平，導致軟骨損傷的發(fā)生〔8，9〕。本研究旨在對早期和晚期類風濕關節(jié)炎患者血清中炎癥因子IL-2 、TNF-α的水平及與疾病進展相關性進行分析。

1 資料與方法

1.1對象與分組 招募2019年1月至2020年1月在南通市第一人民醫(yī)院治療的類風濕關節(jié)炎早期患者與晚期患者，各40例，年齡60～75歲。根據(jù)2010年美國風濕病學會/歐洲抗風濕病聯(lián)盟(ACR/EULAR)的類風濕關節(jié)炎分類標準選取病例，并且滿足以下條件：患者28個關節(jié)的疾病活動度評分(DAS28)>2.6分；排除有冠心病、高血壓、血栓病史及腫瘤、感染、近期手術外傷史。本研究中，根據(jù)類風濕關節(jié)炎X線分期，X線1期和2期判定為早期類風濕關節(jié)炎(早期組)，X線3期和4期判定為晚期類風濕關節(jié)炎(晚期組)。早期組男22例，女18例，平均年齡(63.14±2.18)歲，晚期組男23例，女17例，平均年齡(63.25±2.26)歲，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2炎癥因子的檢測 空腹下采集患者靜脈血，4℃至自然凝固，3 000 r/min 離心5 min，分離上層血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(購自中國上海酶聯(lián)生物科技有限公司的試劑盒)及 MultiskanTMFC酶標儀(美國Thermo公司)檢測血清中IL-2、TNF-α水平，每個樣本做3個復孔，并計算平均值。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS26.0 及 GraphPad Prism6.0 軟件，計量資料進行正態(tài)性檢驗及方差齊性檢驗后使用獨立樣本t檢驗比較兩組間差異，方差不齊時使用t′檢驗比較兩組間差異，采用二分類Logistic回歸對候選診斷標志物構建回歸模型及綜合評分。

通過受試者工作特征(ROC)曲線進行診斷效能的分析。使用STRING11.0進行蛋白相互作用網絡分析。

2 結 果

2.1早、晚期類風濕關節(jié)炎患者血清炎癥因子分泌水平比較 與早期組相比，晚期組血清中炎癥因子IL-2〔(38.94±5.3)ng/L vs (60.19±8.54)ng/L〕與TNF-α水平〔(21.15±2.09)ng/L vs (29.55±3.14)ng/L〕均顯著增高(P<0.001)。

2.2早、晚期類風濕關節(jié)炎患者血清炎癥因子主成分分析 早期組和晚期組呈分散分布，無顯著交叉。IL-2和TNF-α血清水平可以區(qū)分早期和晚期類風濕關節(jié)炎。見圖1。

圖1 基于血清IL-2和TNF-α水平早、晚期類風濕關節(jié)炎主成分分析

2.3IL-2和TNF-α診斷早、晚期類風濕關節(jié)炎的效能評價 由圖2可知，IL-2和TNF-α診斷早、晚期類風濕關節(jié)炎ROC曲線下的面積分別為0.674和0.949(P<0.001)，診斷效能較好，可較好地作為早、晚期類風濕關節(jié)炎患者診斷依據(jù)。

圖2 IL-2和TNF-α診斷早期和晚期類風濕關節(jié)炎ROC曲線

2.4血清炎癥因子IL-2和TNF-α的蛋白質相互作用網絡分析 由圖3可知，IL-2和TNF-α主要與 Rbck1、環(huán)指蛋白(Rnf)31、Shaprin、Otulin、蛋白激酶(Ripk)1、核因子-κB基本調節(jié)劑(Ikbkg)、TAB2之間存在一定的互作用關系。

圖3 蛋白質相互作用網絡

3 討 論

類風濕關節(jié)炎的發(fā)病機制非常復雜，晚期類風濕關節(jié)炎患者還會遭受進行性殘疾和主要的系統(tǒng)性并發(fā)癥，甚至死亡的發(fā)展階段。常見表現(xiàn)包括滑膜組織炎癥和增生、自身抗體產生、軟骨和骨破壞，并伴有包括肺部和心血管并發(fā)癥在內的系統(tǒng)性特征。目前臨床主要采用類風濕因子(RF)、瓜氨酸相關自身抗體系統(tǒng)中的抗抗角質蛋白抗體(AKA)抗體和抗抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體用于對類風濕關節(jié)炎的診斷，但仍存在一定的限制，如不易檢出早、晚類風濕關節(jié)炎患者的差異等，易錯過最佳診治時間。

IL-2對于調節(jié)性T細胞(Treg)的功能、擴展和存活至關重要，體內Tregs和效應T細胞(Teffs)之間的功能平衡對維持免疫穩(wěn)態(tài)至關重要，有報道顯示Tregs彌漫性存在于增生的滑膜襯里和上皮組織中，它們的數(shù)量隨著炎癥惡化而增加〔10～12〕。

TNF-α對類風濕關節(jié)炎的刺激和關節(jié)損傷起控制作用，是重要的促炎因子〔13～15〕。TNF-α及其受體廣泛分布于類風濕關節(jié)炎患者的血清和滑膜液中，TNF-α可抑制炎癥信號通路中的重要蛋白，表現(xiàn)為促進炎癥反應，并且臨床也在應用TNF-α抑制劑治療類風濕關節(jié)炎〔16，17〕。本研究結果表明，IL-2和TNF-α可以區(qū)分早期和晚期類風濕關節(jié)炎，表征疾病進展風險。

后續(xù)本文還對IL-2和TNF-α進行了蛋白質相互作用網絡分析，結果顯示，IL-2和TNF-α主要與TRAF、TAB、MAPK蛋白家族具有一定相關性，可通過不同途徑有效的影響類風濕關節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展。有研究表明TRAF可激活TNF受體、TRAF6還可調節(jié)IL-1、CD40和LPS信號轉導，引起炎癥因子的合成和釋放，從而可能導致全身性炎癥反應發(fā)生〔18〕。有研究發(fā)現(xiàn)TAB2-TAK1能夠相結合，能調控免疫系統(tǒng)重要NF-κB信號通路〔19，20〕。IL-2和TNF-α可能與MAPK信號通路的級聯(lián)的激活相關，激活后可介導了多種炎癥反應的發(fā)展。

綜上，血清炎癥因子IL-2與TNF-α可有效作為診斷早、晚期類風濕關節(jié)炎患者的指標，具有較高的診斷效能，對評估類風濕關節(jié)炎患者的發(fā)展階段、治療及預后效果具有重要臨床意義。