鹽酸丙美卡因滴眼液有關物質檢測和含量檢測方法研究

文強 徐小彬

摘要：目的：研究確認鹽酸丙美卡因滴眼液有關物質檢測和含量檢測方法的可行性。方法：采用高效液相色譜法，對鹽酸丙美卡因滴眼液有關物質和含量的檢查方法進行研究。結果：通過系統適用性試驗、回收率試驗、精密度試驗，確定了鹽酸丙美卡因滴眼液有關物質和含量各項檢測條件的合理性。結論：可采用高效液相色譜法進行本品鹽酸丙美卡因的有關物質和含量檢測。

關鍵詞： 鹽酸丙美卡因滴眼液 ?有關物質 含量 ?高效液相色譜法

[Abstract] Objective： To confirm the feasibility of the detection of related substance and its content in proparacaine hydrochloride eye drops.Methods： To study the detection of related substance and its content in proparacaine hydrochloride eye drops through high performance liquid chromatography （HPLC）. Results： It is determined that the detection method for related substance and its content in proparacaine hydrochloride eye drops is appropriate by the system suitability test， recovery and precision test. Conclusion： HPLC can be used to detect the related substance and its content in proparacaine hydrochloride eye drops.

[Key words] Key words： proparacaine hydrochloride eye drops， related substance， content， High performance liquid chromatography （HPLC）

【中圖分類號】R97 ? ? ? ? ? ? 【文獻標識碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2021）07-063-02

鹽酸丙美卡因滴眼液有關物質和含量檢測方法的可行性，將直接影響到產品上市后的有效性、安全性和質量穩定性。故本次采用高效液相色譜法，通過系統適用性試驗、回收率試驗、精密度試驗，確定了鹽酸丙美卡因滴眼液有關物質和含量各項檢測條件的合理性。從而確認鹽酸丙美卡因的有關物質和含量檢測檢測方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10ATVP泵，島津SPD-10AVP檢測器，TL-9900色譜數據工作站，MS205DU電子天平

1.2 試藥

磷酸二氫鉀（分析純，北京益利精細化學品公司），庚烷磺酸鈉（色譜純 進口），三乙胺（色譜純 進口），甲醇（色譜純，北京益利精細化學品公司）

2.有關物質檢測方法研究

采用高效液相色譜法，對本品有關物質的檢查方法進行研究，照中國藥典2015年版四部0512[1]。

2.1色譜條件

色譜柱：Inertsil Ph-3苯基柱，250mm×4.6mm，5m

參照英國藥典鹽酸丙美卡因質量標準 [2]，有關物質檢查色譜條件以磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸二氫鉀、0.02mol/L庚烷磺酸鈉，三乙胺調pH值至5.2）-甲醇（38：62） 為流動相。

檢測波長232nm。

以上述色譜條件進行系統適用性試驗。

2.2系統適用性試驗

取5份鹽酸丙美卡因滴眼液，每份2ml（約相當于鹽酸丙美卡因10mg），置10ml試管中，分別加1.0mol/L鹽酸1ml，1.0mol/L氫氧化鈉溶液1ml，30%雙氧水1ml，放置3天，另兩份分別在105℃恒溫箱和4500lx±500lx強光下放置3天，取上述樣品及未破壞樣品，加甲醇制成1mg/ml的溶液（酸堿破壞的樣品分別用1.0mol/L氫氧化鈉溶液和1.0mol/L鹽酸調至中性后配制），搖勻，濾過。

另取相當于鹽酸丙美卡因10mg的空白輔料，置于10ml試管中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得空白輔料測試液。

取上述溶液各10l，分別注入液相色譜儀，結果見表1。

結論：在上述色譜條件下，各降解產物均能與鹽酸丙美卡因主峰分離，符合系統適用性試驗要求。

2.3測定法

取最低裝量檢查項下內容物適量（約相當于鹽酸丙美卡因10mg），置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1ml，置100ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對照溶液。精密量取對照溶液10l注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%-20%。再精密量取對照溶液和供試品溶液各10l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3.5倍。扣除空白輔料峰，供試品溶液的色譜圖中如顯雜質峰，單個雜質峰面積不得大于對照溶液峰面積的1.0倍（1.0%），各雜質峰面積總和不得大于對照溶液的峰面積1.5倍（1.5%）。

2.4有關物質測定

取本品，照有關物質測定法項下的方法測定，結果見表2。

結論：放大三批樣品單一雜質均小于1.0%，有關物質均小于1.5%

有關物質方法學研究結果表明：用高效液相色譜法測定本品的有關物質，其方法準確度高、適應性強，可采用高效液相色譜法進行本品鹽酸丙美卡因的有關物質檢測。

3.含量檢測方法研究

選用準確性好，專屬性強，靈敏度高的HPLC法，對鹽酸丙美卡因滴眼液的含量進行了測定。

3.1色譜條件及方法

以苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑：以磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸二氫鉀、0.02mol/L庚烷磺酸鈉，三乙胺調pH值至5.2）-甲醇（38：62） 為流動相。檢測波長270nm。理論板數按鹽酸丙美卡因峰計算應不低于3000。

取樣品適量，用水稀釋成20g/ml的溶液，作為供試品溶液，另取鹽酸丙美卡因對照品適量同法配制，作為對照溶液。取上述溶液各20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

3.2 方法的建立

3.2.1檢測波長的確定和輔料干擾性試驗 ?鹽酸丙美卡因以水為溶劑，在232nm、268nm、310nm處均有較強的吸收，均能作為含量測定的檢測波長，考慮到采用高效液相色譜法測定含量，選擇高波長可以減少干擾，另參照英國藥典標準鹽酸丙美卡因滴眼液（愛爾凱因）X20070130質量標準，選擇270nm為含量測定的檢測波長。經考察在此波長處輔料不干擾主峰的檢測。

3.2.2 含量測定線性范圍 ?取鹽酸丙美卡因約20mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液，精密量取母液1ml，分別置于10ml、25ml、50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，另分別精密量取母液2ml、5ml、溶液分別置于10ml量瓶中，用水稀釋至刻度，取上述溶液及母液作為供試品溶液。取上述溶液各20l，注入液相色譜儀，記錄峰面積，結果見表3。

結論：以峰面積對濃度計算，線性方程為：A=122.9C+214.4相關系數r=0.9999，鹽酸丙美卡因在4.08g/ml～204.00g/ml范圍內，呈線性關系。

3.2.3鹽酸丙美卡因含量測定的回收率試驗 ?取鹽酸丙美卡因對照品16mg、20mg、24mg，精密稱定，分置100ml容量瓶中，加水適量使溶解，按處方比例加入空白輔料，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml容量瓶中，用水稀釋至刻度作為供試品溶液，三種濃度各平行配制三份。另精密稱取鹽酸丙美卡因對照品適量，用水配制成20g/ml的溶液作為對照溶液，取上述溶液各20l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。結果見表4。

結論：用高效液相色譜法測定鹽酸丙美卡因的含量，準確度高。

3.2.4精密度試驗 ?取含量測定項下溶液，照含量測定方法平行測定6份，結果見表5。

結論：6份樣品的相對標準偏差小于2%，說明該法精密度好。

3.2.5鹽酸丙美卡因溶液的穩定性 ?取精密度試驗項下的溶液1份，于8小時內測定5次。結果見表6。

結論：鹽酸丙美卡因滴眼液中鹽酸丙美卡因8小時內穩定。

3.2.6含量測定 ?按以上方法測定三批放大樣品的含量，結果見表7。

結論：本品三批放大樣品的含量均在95.0%～110.0%的范圍內。

含量方法學研究結果表明：用高效液相色譜法測定本品的含量，其方法準確度高、重現性好，在4.08g/ml～204.00g/ml濃度范圍內，濃度與峰面積線性良好，測定波長處空白輔料對主藥的檢測無干擾，溶液8小時內穩定性良好，可采用高效液相色譜法進行本品鹽酸丙美卡因的含量檢測。

參考文獻：

[1] 蔡紅 浩云濤 薛軍等 高效液相色譜法 中國藥典四部[M]. 15版.北京：中國醫藥科技出版社， 2015：59-61

[2] 英國藥典委員會 鹽酸丙美卡因 英國藥典第二卷[M]. 07版.倫敦：文具辦公室， 2007：1743-1744