膠質瘤相關癌基因蛋白-1在管腔型乳腺癌組織中表達及其與預后的關系

劉磊，楊長俊

乳腺癌是威脅女性生命健康的常見惡性腫瘤，臨床上一般根據雌激素受體（estorgen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人類表皮生長因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）表達情況對乳腺癌進行分類，包括管腔（Luminal）型、HER-2過表達型及基底樣（Basal-like）型。其中Luminal型又可分為Luminal A型和Luminal B型，預后相對較好，但遠處轉移、局部復發仍然存在。Hedgehog信號通路可參與胚胎生長分化、器官形成、組織修復等生理過程，并與腫瘤發生密切相關。膠質瘤相關癌基因蛋白-1（glioma oncogene protein 1，Gli1）是作為Hedgehog信號通路中的下游轉錄因子，能反映Hedgehog信號通路活化狀態及靶基因轉錄情況。國外有研究顯示，Gli1陽性表達與Luminal A型乳腺癌病人的臨床預后較差有關，但國內尚無相關研究報道。鑒于此，本研究旨在分析Gli1蛋白在Luminal型乳腺癌組織中表達情況及其與預后的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取信陽市中心醫院2012年7月至2014年7月收治的68例Luminal型乳腺癌病人臨床資料進行回顧性分析。納入標準：（1）原發性乳腺癌；（2）術后病理檢查為Luminal型乳腺癌；（3）術前未采取任何治療；（4）無卵巢癌或乳腺癌史。排除標準：（1）術前有遠處轉移者；（2）男性乳腺癌；（3）隨訪資料不完整者。入組病人年齡范圍23～84歲，年齡（57.21±10.38）歲，Luminal A型28例，Luminal B型40例。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 主要試劑

鼠抗人Gli1單克隆抗體購自上海群己生物科技有限公司；SP免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司；DAB顯色試劑盒購自丹麥Dako公司。

1.3 免疫組化及判定方法

采用免疫組化SP法檢測Gli1蛋白表達情況。根據SP試劑盒說明書步驟進行操作。結果判定：采用半定量法評估陽性細胞數及染色強度，陽性細胞數≤25%記1分，25%～50%記2分，51%～75%記3分，≥75%為4分；無染色記作0分，染色強記作3分。免疫反應評分（immunoreactivity score，IRS）=陽性細胞數評分×染色強度評分。IRS評分為0～6分記為Gli1蛋白低表達，IRS評分＞6分記為Gli1蛋白高表達。

PR、ER、HER-2檢測方法及陽性判定方法同文獻。

1.4 統計學方法

采用SPSS 20.0軟件進行統計學分析，采用GraphPad Prism 6軟件進行圖片制作。計數數據用例（%）表示，組間比較行

χ

檢驗或校正

χ

檢驗。生存分析采用Kaplan Merier分析，組間比較采用Log-rank檢驗；采用Cox比例風險回歸模型分析病人預后相關影響因素，變量篩選采用條件向前法，選入

P

≤0.05，剔除

P

＞0.10變量，檢驗水準α=0.05，均為雙側檢驗。

2 結果

2.1 Gli1蛋白在乳腺癌組織及癌旁組織中表達情況分析

Gli1蛋白主要表達于細胞核和細胞漿中，以細胞核或細胞質染成黃棕色或黃褐色均勻顆粒狀為陽性。乳腺癌組織Gli1高表達率45.59%（31/68）高于癌旁組織Gli1高表達率13.33%（4/30），

χ

值=9.433，

P

=0.002，差異有統計學意義。

2.2 Gli1蛋白與Luminal型乳腺癌病理特征關系

Gli1蛋白高表達與Luminal型乳腺癌淋巴結轉移密切相關（

P

＜0.05），見表1。

表1 Gli1蛋白與Luminal型乳腺癌病理特征關系

2.3 Gli1表達與Luminal型乳腺癌預后關系

所有病例均獲得隨訪，隨訪截止時間為2018年7月，隨訪時間范圍為6～60個月，中位隨訪時間為38個月；Gli1高表達5年復發人數為10人，無復發生存率為67.74%（21/31），Gli1低表達5年復發人數為4人，無復發生存率為89.19%（33/37），組間差異有統計學意義（

P

＜0.05），見圖1。

圖1 膠質瘤相關癌基因蛋白-1（Gli1）表達情況與Luminal型乳腺癌無復發生存分析

2.4 影響Luminal型乳腺癌預后的COX回歸分析

經COX單因素和多因素分析顯示，淋巴結轉移、Gli1高表達是影響Luminal型乳腺癌無復發生存時間的獨立危險因素（

P

＜0.05），見表2。

表2 影響Luminal型乳腺癌預后的COX回歸分析

3 討論

乳腺癌發病原因復雜，可能與環境因素、遺傳因素、雌激素長期刺激等有關，發病機制尚未明確。有研究顯示，Hedgehog信號通路活化可能是引起乳腺癌發生的機制之一，在乳腺癌組織中發現Hedgehog信號通路相關分子的異常表達。Hedge-hog信號通路在胚胎細胞生長分化過程中起到調控作用，當該通路失活時，相關蛋白異常表達，從而引起腫瘤發生發展。Hedgehog信號通路主要包括Hh信號分子、信號分子受體Patched1（Ptc1）、GPCR類膜蛋白Smoothened（Smo）及轉錄因子Gli，Hedgehog蛋白通過與Ptc1結合，釋放Smo蛋白，抑制Gli蛋白水解，未水解的Gli蛋白進入細胞核，促進原癌基因、細胞周期蛋白等靶基因轉錄，同時Gli蛋白還可進一步促進Hedgehog蛋白轉錄，具有正反饋調節作用，不斷激活Hedgehog信號通路，使腫瘤惡化。由此可見，Gli蛋白是Hedgehog信號通路中直接作用于靶基因，反應Hedgehog信號通路活化情況的關鍵蛋白。

Neelakantan等研究發現，在人類乳腺癌中，上皮細胞-間充質轉化與激活的Hedgehog信號通路密切相關，且Gli抑制劑能對上皮細胞-間充質轉化誘導的Gli激活起作用，引起腫瘤發生。孟尚文、鄭建云研究顯示，Gli1蛋白陽性表達是影響乳腺癌淋巴結轉移的獨立危險因素，可作為淋巴結轉移的參考指標。但目前關于Gli1蛋白表達與Luminal型乳腺癌關系研究較少，本研究結果顯示，Luminal型乳腺癌組織中，Gli1蛋白高表達率明顯高于癌旁組織，且與淋巴結轉移密切相關，伴有淋巴結轉移者Gli1蛋白高表達率明顯較高。對Gli1蛋白表達與Luminal型乳腺癌病人預后情況分析發現，Gli1蛋白高表達者5年無復發生存率明顯低于Gli1蛋白低表達者，并且是影響Luminal型乳腺癌預后的獨立危險因素，提示Gli1蛋白高表達預示著Luminal型乳腺癌早期轉移復發。

Gli1誘導腫瘤發生的機制可能如下：（1）Gli1可直接誘導Bcl-2表達，抑制癌細胞凋亡；（2）Gli1可促進細胞周期蛋白表達，調控細胞周期，促進癌細胞增殖；（3）Gli1可直接促進上皮細胞-間充質轉化發生，增強癌細胞侵襲能力。丁斌等研究發現環杷明作為Hedgehog信號通路抑制劑，處理人乳腺癌細胞MDA-MB-231后，Gli1蛋白和Bcl-2蛋白表達量明顯降低，癌細胞增殖受到抑制，凋亡率升高，認為Gli1可能成為乳腺癌治療的潛在靶點。Oladapo等采用不同Gli拮抗劑處理乳腺癌細胞，結果發現Gli拮抗劑均顯著下調了細胞周期素Cyclin D、Cyclin E等細胞周期相關蛋白，降低了癌細胞生長速度，認為Gli1的激活在促進細胞增殖、運動、腫瘤生長中起到重要作用，而Gli1拮抗劑可將此過程逆轉。

綜上所述，Luminal型乳腺癌組織中Gli1表達上調，高表達Gli1與Luminal型乳腺癌淋巴結轉移相關，且是Luminal型乳腺癌復發轉移的獨立危險因素，對預后具有一定評估價值，同時也可成為臨床治療乳腺癌的潛在靶點。