缺血性腦卒中神經功能缺損與血小板內皮聚集受體1和前列腺素內過氧化物合酶1基因多態性的關聯分析

吳慧，繆陽，陳迎平，祁峰，卞海林

近年來，隨著經濟的發展和生活方式的改變， 腦卒中發病率呈現出上升趨勢，且已成為我國的頭號死因，其中缺血性腦卒中占我國腦卒中的69.6%～70.8%。腦血管狹窄或粥樣硬化等原因可導致缺血性腦卒中病人出現不同程度的神經功能缺損。阿司匹林具有抗血小板聚集的作用，在缺血性腦卒中的預防和治療中發揮著舉足重輕的作用。研究顯示，阿司匹林能夠有效減輕卒中的初始嚴重程度并改善出院時的預后。然而，約有5%～65%病人可發生不同程度的阿司匹林抵抗，導致阿司匹林療效降低，在應用阿司匹林進行二級預防的病人中，兩年后血管事件復發的風險可高達18%。阿司匹林抵抗的影響因素眾多，其中相關基因多態性被認為是導致這一現象的重要原因，如環氧合酶（COX-1/COX-2）基因的多態性、血小板糖蛋白Ⅰa/Ⅱa受體（GPⅠa/Ⅱa）基因多態性、血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）基因多態性、二磷酸腺苷（ADP）受體P2Y1、P2Y12基因多態性等。因此，本研究考察阿司匹林抵抗相關基因血小板內皮聚集受體1（PEAR1）和前列腺素內過氧化物合酶1（PTGS1）多態性與缺血性腦卒中神經功能缺損之間是否存在關聯，以期為臨床抗血小板治療方案制定與調整提供參考，減少缺血性腦卒中發生及復發的風險，并在一定程度上預測缺血性腦卒中的神經功能缺損。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年10月至2019年12月鹽城市第一人民醫院收治的缺血性腦卒中病人的臨床資料，按照納入標準和排除標準，入組病人147例。納入標準：①入組病例經影像學檢查（CT或MR）確診為缺血性腦卒中；②血小板計數100×10/L～400×10/L之間。排除標準：①短暫性腦缺血發作；②對阿司匹林過敏；③凝血功能異常；④近期手術者；⑤惡性腫瘤或血液系統疾??；⑥嚴重肝腎功能不全病人。入組病人入院時采用美國國立衛生研究院卒中量表（NIHSS）評分進行病人神經功能缺損程度的評定。根據病人的NIHSS評分分為輕癥組和中重癥組；輕癥組病人65例，NIHSS評分0～4分，中重癥組病人82例，NIHSS評分5～40分，兩組病人基線情況差異無統計學意義（

P

＞0.05），具有可比性，詳見表1。病人或其近親屬對本研究知情同意，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 儀器與試劑

儀器：全自動醫用PCR分析系統（型號SLAN-96S，上海宏石醫療科技有限公司）。試劑：測序反應通用試劑盒—阿司匹林用藥相關基因檢測（西安天隆科技有限公司）。

1.3 基因檢測方法

采集兩組病人外周靜脈血2～3 mL，置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，應用實時熒光定量PCR檢測系統進行檢測。將待測樣本渦旋混勻后，取10 μL加入通用稀釋液中。取2 μL稀釋好的待測樣本、陽性質控品、陰性質控品，分別加入反應管中，37℃溫浴3 min后立即6 000 rpm離心40 s，再次渦旋混勻后6 000 rpm離心5 s，并移至檢測區進行檢測。

2 結果

2.1 病人一般資料

納入研究147例，輕癥組65例，中重癥組82例，兩組性別、體質量指數（BMI）、是否飲酒、高血壓患病率差異無統計學意義（

P

＞0.05），提示性別、BMI、是否飲酒、有無高血壓等不影響缺血性腦卒中神經功能缺損的嚴重程度；兩組年齡、吸煙史、糖尿病患病率差異有統計學意義（

P

＜0.05），提示病人年齡、吸煙、糖尿病對缺血性腦卒中神經功能缺損的嚴重程度存在影響。見表1。

表1 缺血性腦卒中147例一般資料

2.2 兩組病人檢驗指標比較

通過對兩組病人的相關檢驗指標進行比較發現，兩組病人總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血小板計數、同型半胱氨酸等指標差異無統計學意義（

P

＞0.05），而空腹血糖、D-二聚體等指標差異有統計學意義（

P

＜0.05），提示空腹血糖、D-二聚體等指標可影響缺血性腦卒中神經功能缺損的嚴重程度，詳見表2。

表2 缺血性腦卒中147例檢驗指標

2.3 阿司匹林抵抗相關基因位點多態性分布及Hardy-Weinberg平衡檢驗

147例病人中，PEAR1（G＞A）基因野生型（GG）58例，突變雜合型（GA）71例，突變純合型（AA）18例，PEAR1 A等位基因頻率為36.39%。PTGS1（A＞G）基因野生型（AA）57例，突變雜合型（AG）74例，突變純合型（GG）16例，PTGS1 G等位基因頻率為36.05%，PEAR1（G＞A）和PTGS1（A＞G）等位基因頻率符合Hardy-Weinberg平衡，提示所選樣本具有群體代表性，詳見表3。

表3 缺血性腦卒中147例阿司匹林抵抗相關基因位點多態性分布及Hardy-Weinberg平衡檢驗

2.4 兩組病人PEAR1、PTGS1基因多態性比較

中重癥組PEAR1基因突變率高于輕癥組（

P

＜0.05），PEAR1基因攜帶A等位基因頻率分別為28.46%、42.68%，差異有統計學意義（

P

＜0.05），提示PEAR1基因攜帶A等位基因可影響缺血性腦卒中神經缺損的嚴重程度。兩組的PTGS1基因攜帶A等位基因頻率差異無統計學意義（

P

＞0.05）。見表4。

表4 缺血性腦卒中147例PEAR1、PTGS1基因多態性比較/例（%）

2.5 logistic回歸分析

將上述研究中差異有統計學意義的影響因素，如年齡、吸煙、糖尿病、空腹血糖、D-二聚體、PEAR1基因A等位基因納入logistic回歸方程。通過多因素分析發現，年齡、吸煙、空腹血糖、PEAR1基因攜帶A等位基因是缺血性腦卒中神經缺損的嚴重程度的危險因素，詳見表5。上述研究結果提示，缺血性腦卒中神經缺損的嚴重程度與PEAR1基因攜帶A等位基因存在相關性。

表5 缺血性腦卒中147例神經缺損嚴重程度的多因素回歸分析

3 討論

阿司匹林廣泛用于心腦血管疾病的一級預防和二級預防，在各國指南中均占據著重要地位。阿司匹林是缺血性腦卒中的二級預防的基石用藥，它能夠有效降低高危病人發生缺血性腦卒中事件的風險和缺血性腦卒中病人再發卒中事件的風險。然而，有一部分病人存在阿司匹林抵抗，致使阿司匹林的效應減弱。研究顯示，阿司匹林抵抗病人發生缺血性腦卒中的死亡率、腦血管事件再發風險均高于阿司匹林敏感病人。Oh等研究發現，阿司匹林抵抗與缺血性腦卒中嚴重程度及梗死體積相關。導致阿司匹林抵抗的影響因素眾多，如病人依從性、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病、基因多態性、藥物相互作用等，其中基因多態性是一項重要因素。目前，研究較多的基因包括環氧合酶-1（COX-1）、環氧合酶-2（COX-2）、血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）、血小板糖蛋白Ⅰa/Ⅱa（GPⅠa/Ⅱa）膠原受體、P2Y1和P2Y12基因多態性等。本研究中考察PEAR1、PTGS1基因多態性與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度之間是否存在關聯。

既往研究顯示，PEAR1基因多態性與阿司匹林抵抗存在相關性，Würtz等研究發現，PEAR1基因攜帶A等位基因的病人血小板聚集能力下降、血小板活化增加，發生心血管終點事件的風險更高。Xu等研究發現，在中國人群中PEAR1基因多態性可增加心血管不良事件的發生風險。有研究顯示，PEAR1基因攜帶A等位基因與缺血性腦卒中病人阿司匹林抵抗密切相關。Zhao等研究發現，在中國人群中PEAR1基因多態性與缺血性腦卒中復發獨立相關。研究顯示，中國人群中PEAR1基因A等位基因突變頻率為0.376，本研究中，PEAR1基因A等位基因突變頻率為0.364，與既往研究結論一致。本研究發現，兩組病人PEAR1基因型分布差異存在統計學意義（

P

＜0.05），且PEAR1基因攜帶A等位基因與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關（

P

＜0.05）。這可能與A等位基因致血小板活化增強有關；此外，PEAR1多表達于內皮，其基因多態性影響內皮功能相關。有研究認為PTGS1基因多態性與阿司匹林抵抗相關，但尚存在爭議。本研究中未發現PTGS1基因多態性與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關（

P

＞0.05）。本研究中，單因素分析發現年齡、吸煙、糖尿病、空腹血糖、D-二聚體、PEAR1基因A等位基因與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關。經logistic回歸分析后，年齡、吸煙、空腹血糖、PEAR1基因攜帶A等位基因為缺血性腦卒中神經功能缺損的危險因素（

P

＜0.05），而糖尿病、D-二聚體則被排除。研究表明，年齡是缺血性腦卒中不良預后的危險因素。隨著病人年齡增長，生理功能減退，多合并高血壓、糖尿病等基礎疾病，動脈粥樣硬化發生率高均可增加缺血性腦卒中神經功能缺損的風險。無論有無糖尿病史，高血糖在缺血性腦卒中病人中均較常見。高血糖可導致血管內皮功能損傷，加重缺血后的腦組織損傷，致使缺血性腦卒中梗死體積較大和神經功能缺損。糖尿病、D-二聚體等因素被排除可能與本研究樣本量偏少有關。

綜上，本研究提示PEAR1基因攜帶A等位基因與缺血性腦卒中神經功能缺損嚴重程度相關。本研究的局限性在于樣本量有限，尚需大樣本多中心研究進一步證實。