實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法在流感病毒檢測(cè)中的比較

胡華婷

摘要：目的：探討實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法在流感病毒檢測(cè)中的比較。方法：選取我院302例流感病毒樣本，在24h內(nèi)對(duì)標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)，對(duì)于無(wú)法在24h內(nèi)檢驗(yàn)者放置在-70°C環(huán)境中保存。對(duì)所有標(biāo)本實(shí)施實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法。結(jié)果：細(xì)胞培養(yǎng)法陽(yáng)性標(biāo)本94例，陽(yáng)性率為31.13%，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法陽(yáng)性標(biāo)本132例，陽(yáng)性率為43.71%;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法A型H1亞型陽(yáng)性率3.31%，A型H3亞型陽(yáng)性率22.19%，B型陽(yáng)性率17.88%，細(xì)胞培養(yǎng)法A型H1亞型陽(yáng)性率0.99%，A型H3亞型陽(yáng)性率7.28%，B型陽(yáng)性率6.62%，互比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以細(xì)胞培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法：靈敏度97.34%，特異性82.05%。結(jié)論：實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法在流感病毒檢測(cè)均有一定價(jià)值，實(shí)時(shí)熒光定量PCR可提高陽(yáng)性檢出率，靈敏度更高，適宜在流感疫情、臨床診治等方面應(yīng)用，細(xì)胞培養(yǎng)法可取得病毒毒株，適宜研究抗原性、耐藥性及基因特性等方面應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：流感病毒;細(xì)胞培養(yǎng)法;實(shí)時(shí)熒光定量PCR;檢測(cè)價(jià)值;

[Abstract] Objective： To explore the comparison of real-time fluorescence quantitative PCR and cell culture in the detection of influenza virus. Methods： 302 samples of influenza virus in our hospital were selected and sent to the laboratory for testing within 24 hours. Those who could not be tested within 24 hours were stored at - 70 ° C. Real time fluorescence quantitative PCR and cell culture were performed on all samples. Results： there were 94 positive specimens by cell culture， the positive rate was 31.13%， and 132 positive specimens by real-time fluorescence quantitative PCR， the positive rate was 43.71%; The positive rates of type a H1， type a H3 and type B by real-time fluorescence quantitative PCR were 3.31%， 22.19% and 17.88%， 0.99%， 7.28% and 6.62% respectively （P < 0.05）. Taking cell culture method as the gold standard， real-time fluorescence quantitative PCR showed a sensitivity of 97.34% and a specificity of 82.05%. Conclusion： real time fluorescence quantitative PCR and cell culture method have certain value in the detection of influenza virus. Real time fluorescence quantitative PCR can improve the positive detection rate and has higher sensitivity. It is suitable for the application in influenza epidemic situation， clinical diagnosis and treatment. Cell culture method can obtain virus strains and is suitable for the study of antigenicity， drug resistance and gene characteristics.

[Key words] influenza virus; Cell culture method; Real time fluorescence quantitative PCR; Detection value;

流感病毒可引發(fā)流行性感冒，是一種急性呼吸道傳染性疾病，可導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)高熱、疼痛等不適癥狀，由于疾病具有傳染性，對(duì)流感病毒進(jìn)行檢測(cè)非常重要，從而控制流感病毒，確保患者機(jī)體處于健康狀態(tài)，避免流感大面積擴(kuò)散 [1-2]。臨床中，針對(duì)流感病毒檢測(cè)方案較多，實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法有著較高的應(yīng)用率[3]。因此，本文就分析實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)流感病毒檢測(cè)價(jià)值，具體報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1 一般資料

選取2020-7至2021-7我院302例流感病毒樣本，在24h內(nèi)對(duì)標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)，對(duì)于無(wú)法在24h內(nèi)檢驗(yàn)者放置在-70°C環(huán)境中保存。

1.2 方法

對(duì)所有標(biāo)本實(shí)施實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法，檢測(cè)期間應(yīng)用生物安全柜、高速離心機(jī)、全自動(dòng)實(shí)施應(yīng)該定量PCR儀、漩渦振蕩器、全自動(dòng)核酸提取儀、核酸提取試劑盒、無(wú)核酸離心管及培養(yǎng)液等。

提取核酸：應(yīng)用全自動(dòng)核酸提取儀，根據(jù)說(shuō)明與配套試劑盒進(jìn)行具體操作。

反應(yīng)體系與條件：應(yīng)用甲型/乙型流感病毒核酸RNA檢測(cè)試劑盒，反應(yīng)體系包含反轉(zhuǎn)錄酶、反應(yīng)液，反應(yīng)體系的配套情況根據(jù)試劑盒說(shuō)明為參考依據(jù)。反應(yīng)調(diào)整為：在50°C下進(jìn)行30min，根據(jù)此順序開(kāi)展1個(gè)循環(huán)，在95°C下進(jìn)行5min，以此為循環(huán)，在95°C下進(jìn)行10s，再在55°C環(huán)境下進(jìn)行40s，根據(jù)此循環(huán)順序開(kāi)展45次，最后為熒光收集，在55°C環(huán)境下實(shí)施熒光檢測(cè)。

病毒細(xì)胞分離鑒定：以《流行性感染診斷方案》對(duì)流感病毒實(shí)施鑒定與分離操作，將10000U/ml雙抗置入樣本病毒采樣液，對(duì)細(xì)胞病毒變化多加觀察，根據(jù)紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)檢測(cè)病毒培養(yǎng)液，紅細(xì)胞凝凝集試驗(yàn)滴度為1：16，通過(guò)紅細(xì)胞凝集抑制劑試驗(yàn)對(duì)亞型標(biāo)準(zhǔn)血清實(shí)施檢測(cè)與鑒定。

1.3 觀察指標(biāo)

分析不同檢測(cè)方法對(duì)流感病毒陽(yáng)性結(jié)果檢測(cè)情況，并分析不同檢測(cè)方法的靈敏度與特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s 表示，組間比較采用 t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用X2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方法對(duì)流感病毒陽(yáng)性結(jié)果的比較

細(xì)胞培養(yǎng)法陽(yáng)性標(biāo)本94例，陽(yáng)性率為31.13%，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法陽(yáng)性標(biāo)本132例，陽(yáng)性率為43.71%;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法A型H1亞型陽(yáng)性率3.31%，A型H3亞型陽(yáng)性率22.19%，B型陽(yáng)性率17.88%，細(xì)胞培養(yǎng)法A型H1亞型陽(yáng)性率0.99%，A型H3亞型陽(yáng)性率7.28%，B型陽(yáng)性率6.62%，互比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體見(jiàn)表1

2.2 不同檢測(cè)方法靈敏度與特異性的比較

以細(xì)胞培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法：靈敏度97.34%，特異性82.05%。

3 討論

流感病毒是呼吸道感染的病原體之一，可引發(fā)流感等急性呼吸道疾病，癥狀表現(xiàn)主要為頭暈、頭痛、寒戰(zhàn)、畏寒、發(fā)熱、乏力及關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，盡早對(duì)流感病毒進(jìn)行檢測(cè)，利于臨床開(kāi)展相關(guān)治療，進(jìn)而保證預(yù)后[4]。

針對(duì)流感病毒檢測(cè)方法較多，比如分離培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法，細(xì)胞培養(yǎng)法為檢測(cè)流感病毒的金標(biāo)準(zhǔn)，也是檢測(cè)流感病毒的主要手段之一，但檢測(cè)耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR可精確、準(zhǔn)確的檢測(cè)流感病毒，是一種可行性較高的診斷防范，具有靈敏度高、檢測(cè)速度快等優(yōu)勢(shì)性[5]。通過(guò)本次研究所得結(jié)果可充分表明實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)優(yōu)勢(shì)性，其檢測(cè)陽(yáng)性率高于細(xì)胞培養(yǎng)法多與PCR法檢測(cè)標(biāo)本的病毒核酸，無(wú)論是病毒降解物還是病毒，檢出病毒RNA。

綜上所述，實(shí)時(shí)熒光定量PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法在流感病毒檢測(cè)均有一定價(jià)值，實(shí)時(shí)熒光定量PCR可提高陽(yáng)性檢出率，靈敏度更高，適宜在流感疫情、臨床診治等方面應(yīng)用，細(xì)胞培養(yǎng)法可取得病毒毒株，適宜研究抗原性、耐藥性及基因特性等方面應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]王穎. 流感病毒檢測(cè)中細(xì)胞培養(yǎng)法與實(shí)時(shí)熒光定量PCR法效果比較[J]. 醫(yī)學(xué)信息，2021，34（09）：179-181.

[2]羅周正，張麗艷，李賀，杜波. 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)及細(xì)胞培養(yǎng)法在流感病毒檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 中國(guó)醫(yī)藥指南，2020，18（26）：47-48.

[3]羅周正，張麗艷，李賀，杜波. 探討實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀用于流感病毒檢測(cè)的效果分析[J]. 中國(guó)醫(yī)藥指南，2020，18（16）：96-97.

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[5]史志坤. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀用于流感病毒檢測(cè)的效果分析探討[J]. 中國(guó)醫(yī)療器械信息，2018，24（21）：129-130.