宮頸鱗狀上皮內病變不同分級患者EGFR、p16蛋白、Ki67抗原表達水平及其臨床意義

陸紅梅，陳劍，荀生麗

1.揚州市婦幼保健院病理科，江蘇揚州225002；2.揚州市婦幼保健院檢驗科，江蘇揚州225002；3.揚州市婦幼保健院婦產科，江蘇揚州225002

隨著近年來宮頸癌的相關臨床研究不斷深入，已經發現宮頸癌是一個從感染人乳頭狀瘤病毒到宮頸上皮內病變直到演變為原發性宮頸癌發病的一個連續發展的過程[1-2]。其中宮頸鱗狀上皮內的正常結構改變與細胞的異型增生為低級、高級別宮頸上皮內病變的主要特征，也是出現宮頸鱗狀上皮的癌前的一種特異性病變。有少數文獻指出，通過給予適當的治療能夠有效抑制低級別宮頸皮內病變（LSIL）的進展且有較高的消退率，而對于高級別宮頸上皮內病變（HSIL）患者而言很難通過臨床治療達到使其發生出現逆轉的情況，因此高級別宮頸上皮內病變發展為宮頸癌的可能性較大[3]。臨床準確的對宮頸上皮內病變分級進行診斷，對于改善患者的預后有著較為重要的意義。故選擇2016年1月—2019年12月在該院首次進行宮頸活檢手術的石蠟包埋組織240例，研究EGFR、p16蛋白、Ki67抗原表達水平臨床意義及與不同病理類型宮頸組織的相關性。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇該院首次進行宮頸活檢手術的石蠟包埋組織，參照宮頸上皮內病變WHO分級標準（2014年）作為宮頸腫瘤組織學分類標準。所選患者經倫理委員會通過，且患者或家屬知情并同意。排除標準：①有放化療史的患者；②有免疫治療史的患者；③有子宮疾病史的患者。其中宮頸鱗狀上皮化生、HSIL、LSIL各80例。80例宮頸鱗狀上皮化生患者，年齡24~70歲，平均（41.97±7.21）歲；80例LSIL患者，年齡27~68歲，平均（36.27±6.45）歲；80例HSIL患者，年齡26~69歲，平均（42.04±7.26）歲。3組一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

選擇福爾馬林對標本進行固定，脫水后用石蠟進行包埋，切片機將標本切片到4μm，SP法進行免疫組化染色，選擇鼠抗人EGFR單克隆抗體對EGFR進行標記，選擇鼠抗人p16單克隆抗體進行p1標記，選擇鼠抗人Ki67抗原單克隆抗體進行Ki67抗原標記。選擇福州邁新生物公司的試劑盒，陽性對照為已知陽性切片，選擇磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗為陰性對照。

1.3 觀察指標

EGFR在細胞漿或細胞膜中進行定位，p16在細胞核和/或胞漿定位，Ki67抗原在細胞核中定位，光鏡下觀察到棕黃色則為陽性細胞,陽性細胞數<5%或無陽性細胞為陰性。陽性細胞數≥5%屬于陽性，同時將陽性組織分為3個等級：5%~25%為(+)；25%~50%為(++)；>50%為(+++)。

1.4 統計方法

采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗或F檢驗；計數資料采用[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗，選擇Pearson相關分析方法對EGFR、Ki67抗原和p16蛋白在不同病理類型宮頸組織之間表達的相關性進行分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各級患者EGFR、Ki67抗原和p16蛋白的表達

各級患者EGFR、Ki67抗原和p16蛋白表達差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 各級患者EGFR、Ki67抗原和p16蛋白的表達

2.2 LSIL和HSIL組中EGFR、Ki67抗原和P16蛋白的陽性分布

HSIL中EGFR、Ki67抗原、p16蛋白的陽性分布與LSIL患者差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 LSIL和HSIL組中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白的陽性分布（例）

2 .3 EGFR、Ki67抗原和p16蛋白在3組中表達的相關性

鱗狀上皮化生與LSIL中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白比較，均無明顯相關性（r=0.14、0.29、0.20，P＞0.05）；鱗狀上皮化生與HSIL中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白比較，均無明顯相關性（r=0.11、0.17、0.15，P＞0.05）；但LSIL與HSIL中EGFR、Ki67抗原和p16蛋白比較，均呈正相關（r=0.38、0.40、0.43，P<0.05）。

3 討論

宮頸癌發病的主要致病因素之一是感染人乳頭狀瘤病毒[4-5]。人乳頭狀瘤病毒的E6、E7基因可能會對宿主的基因組進行整合，導致P53、Rb等蛋白出現表達異常的情況，進而引發Ki67抗原、p16蛋白的表達出現異常[6]。有研究指出，p16基因通過突變與缺失來參與腫瘤的形成，能直接參與調控細胞周期,對細胞的分裂與增殖有負調節作用，p16基因的失活可能會導致惡性增殖的發生[7-8]。Ki67抗原屬于一種核增殖的抗體，多在除GO期以外細胞周期的細胞中進行表達，能作為標記細胞增物，可用于鑒別反應性增生病變與腫瘤。EGFR與受體結合能夠加速細胞的增殖分化，增加細胞的惡性轉化，這與腫瘤的組織學分型有著較為密切的聯系，已在臨床診斷乳腺癌、胃癌中被廣泛應用[9-10]。

該次研究顯示，各級病變中Ki67、p16和EGFR表達存在明顯差異，鱗狀上皮化生患者陽性率最低，HSIL患者最高，達96.25%、97.50%、73.75%，靳情等[11]等對120例各級宮頸病變研究也發現，HSIL患者中Ki67、p16表達高于LSIL、正常患者，達93.3%、91.7%，與該研究發現基本一致。提示Ki67抗原、p16蛋白、EGFR的表達與宮頸癌的病變程度有著較為密切的聯系，陽性數隨病情的發展而隨之增加。相關性分析結果顯示，在HSIL和LSIL患者中ECFR、Ki67抗原和p16蛋白比較，均呈正相關。同時陽性細胞分布規律發現，LSIL中Ki67、p16和EGFR主要分布于基底層，HSIL中則主要分布在上皮下2/3層以上且呈現彌漫性分布。石克等[12]在122例HSIL和LSIL患者研究中也發現，LSIL陽性細胞主要于宮頸鱗狀上皮的下1/3著色，HSIL于上皮中下2/3層或全層，與該文結果相似。由此提示，HSIL和LSIL患者Ki67、p16和EGFR陽性細胞具有明顯分布差異。

綜上所述，免疫組化SP法對ECFR、Ki67抗原和p16蛋白進行標記能夠作為SIL分級的依據,結合LSIL和HSIL的分布特征，能夠有效提高診斷的準確率。