實驗室標準方法驗證分析

郭彥秀

（晉中市水文水資源勘測站，山西 晉中 030600）

1 檢測方法評價

隨著科技的發展，水質監測實驗室儀器設備越來越完善，利用大型儀器實現水質項目檢測，需選擇適用的現行有效的標準方法。在首次使用標準方法時，僅僅驗證測試操作正確與否，是相對片面的，要先對此標準進行方法驗證，以確定檢測機構是否有能力，按此標準開展檢測工作。

方法驗證是評定檢測機構是否有能力，在滿足方法要求的情況下，開展檢測活動的過程。首次使用標準方法前，檢測機構應驗證其在現有實驗室條件（人員、設施設備、環境等)下，用該方法是否能獲得令人滿意的結果；當檢測標準發生變更，變更內容涉及方法原理、環境設施、儀器設備、適用范圍、操作方法時，需重新進行方法驗證，證明其使用新標準的能力。

標準方法驗證需對照標準進行，當標準內容對技術指標要求不明確時，要從人、機、料、法、環、測六方面做好驗證工作，才能使標準方法都能滿足要求。

2 方法驗證步驟

方法驗證的實施，需對照標準，根據本實驗室現有情況，從人、機、料、法、環、測六個方面逐一進行驗證。

2.1 人員驗證

人員指完成整個實驗過程所涉及的全部人員，一般指檢測人員，涉及到樣品采集時，也包括采樣人員、抽樣人員、收樣人員及樣品管理員等與化學檢測相關的人員。人員方面應從數量、資質等方面進行驗證。

在人員數量方面，同一檢測項目至少應有兩名上崗的檢測人員，即確保雙人上崗。

在人員資質方面，檢測機構應驗證檢測人員是否具有本領域工作經歷，是否熟悉和掌握此標準方法、儀器的操作、維護保養及期間核查，并培訓上崗，是否被授權儀器操作并對其進行能力確認等。采樣人員及其他相關人員，應驗證其是否理解標準條款，是否對其進行能力確認并滿足要求。所有人員的能力測試均可通過人員監督、比對等方式進行。

2.2 儀器設備驗證

檢驗檢測所需儀器設備，包括檢測儀器、玻璃器皿及為確保滿足檢測環境條件而配備的監控設備。

檢測機構應驗證相關儀器設備是否滿足方法要求，如判定儀器參數和性能等是否符合要求，儀器設備是否可溯源（是否檢定或校準并確認合格）等。以色譜儀器為例，除確認儀器參數外，還應確認色譜柱是否符合要求。

2.3 檢測耗材驗證

檢測耗材包括檢測所需樣品、試劑和標準物質（樣品）。機構應驗證檢測樣品的制備儲存是否滿足方法要求，管理是否科學；試劑純度是否符合要求，是否驗收合格；標準物質（樣品）是否可溯源。

2.4 標準方法驗證

機構應定期對所用標準方法進行查新，確保其為最新有效版本，即驗證方法的有效性。實驗室應對所選標準進行受控管理；標準如果足夠詳細，則可直接使用；若其內容對檢測要求不夠明確時，檢測機構應制定相對應的作業指導書[1]。

2.5 環境驗證

實驗室環境條件，包括測試條件和樣品、試劑的儲存條件。機構應驗證實驗室環境條件（如溫濕度等），是否能滿足方法要求；實驗室對環境條件的控制是否有效等。

實驗室環境條件對檢驗檢測結果有影響時，機構應配置相應的監控設備來監控環境條件，并做好監控記錄[2]。

2.6 技術指標測試驗證

當標準方法有明確技術指標要求時，按方法內容要求逐一進行驗證；技術指標要求不明確的，做常用參數的驗證，驗證結果滿足一般要求即可。

2.6.1 測試參數的選擇

通過比較《檢測和核準實驗室能力認可準則在化學檢測領域的應用說明》（CNAS-CL01-A002：2020）《環境監測分析方法標準制修訂技術導則》（HJ168-2010）[3]、《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T27417-2017）[4]等中對方法性能參數的說明，發現檢出限、精密度、準確度是必不可少的參數。

方法驗證參數涉及檢出限、精密度、準確度及標準規定的其它參數，如測定下限、線性范圍等。

2.6.2 常用參數測試驗證過程

（1）線性范圍（標準曲線）的驗證

若方法對標準曲線制作有要求，按要求的濃度進行測定；若沒有明確要求，可自行確定曲線濃度點，至少需要6個（包括零點），確保被測濃度在標準曲線線性范圍內。

方法對線性回歸方程的相關系數有要求的，測試結果應滿足其要求。方法沒有要求的，定性或半定量方法需滿足：R≥0.98（R為曲線線性相關系數），定量方法則要滿足：R≥0.99[5]。

（2）檢出限的驗證

目前常用的方法檢出限測定法是低濃度加標法，即使用空白添加標準物質作為樣品，按樣品分析的全部步驟，平行測定7次以上，計算檢出限。檢出限的計算公式：

式中：MDL——方法檢出限；

n——樣品的平行測定次數；

t——自由度為n-1，置信度為99%時的t值，詳見表1；

表1 t值表

S——n次平行測定的標準偏差。

（3）精密度的驗證

精密度的確定，可采用標準樣品或實際樣品進行測定，一般用高、中、低三種不同濃度的標準樣品，或1到3個同類型樣品，分別平行測定6次以上，計算其相對標準偏差，與方法要求進行對比，判定驗證結果。

（4）準確度的驗證

方法準確度的確定，可直接用有證標物進行測定，也可通過對實際樣品進行加標測定，具體按方法要求進行，方法無明確要求的，可以選擇至少其中一種方法進行驗證，若水利方法中無加標量及加標回收率范圍要求的，參照水環境監測規范的相關要求。

若利用有證標準物質確定準確度，需對1～3個不同濃度的有證標準物質分別平行測定6次以上，計算相對誤差。若利用實際樣品加標確定準確度，需選擇至少3個加標濃度，分別平行測定6次以上，計算加標回收率。

用以上測定結果對比方法要求，確定是否滿足要求。

3 方法驗證案例

如實驗室新配備離子色譜儀一臺，在經過方法選擇及標準查新后，決定選用《水質無機陰離子（F-、Cl-、NO2-、Br-、NO3-、PO43-、SO32-、SO42-）的測定 離子色譜法》（HJ84-2016）現行有效的方法，用作氟離子的檢測，在使用之前，需先做方法驗證，方法驗證內容見表2。

表2 氟離子檢測HJ84-2016標準方法驗證內容

4 總結

當檢測人員對照標準，完成人、機、料、法、環、測六個方面的驗證后，可將驗證結果進行匯總，生成標準方法驗證表，驗證表是整個驗證過程及結果最直觀的反饋，內容需包括驗證項目、使用的標準方法、方法有效性、適用范圍、方法要求、結果的符合性確認信息、驗證結論及上級審核意見等信息。

方法驗證的過程和結果應形成報告，并能提供驗證過程的相關原始記錄及溯源文件，保證方法驗證過程可追溯。