三陰乳腺癌中EGFR及VEGFR的表達及與病理特征的相關性分析

戴 翔 李 冰 云洪巖 張 雄 陳鳳蘭 裴德恩

廣東省佛山市禪城區中心醫院病理科，廣東佛山 528031

乳腺癌是臨床常見的一類女性惡性腫瘤，具有高度異質性，三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是指孕激素受體、雌激素受體與人表皮生長因子受體均呈陰性表達的疾病，占所有乳腺癌類型的10%～20%[1-2]。TNBC 多發于絕經前女性，具有強侵襲性、轉移性，常用靶向藥物、抑制雌孕激素的內分泌治療均難以起到較好的效果，而全身化療雖然能起到一定效果，但治療過程中容易出現復發、轉移，因此TNBC 患者預后通常較差，研究其分子生物學特征對于其治療方案的選擇、預后的改善具有重要意義[3-5]。本研究回顧性分析TNBC 患者的臨床病理資料，分析表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）、血管內皮生長因子受體（vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR）的表達情況，并分析其與TNBC 臨床病理特征的關系，有助于評估TNBC 患者的病情及預后情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2018年3月—2020年3月在佛山市禪城區中心醫院行手術治療的200 例乳腺癌患者作為研究對象，所有患者均已經孕激素受體、雌激素受體與人表皮生長因子受體檢查，其中TNBC 患者100例，非TNBC 患者100 例，患者均為女性。納入標準：①均經手術治療并經病理確診為乳腺癌[6]；②術前均未進行放化療及免疫治療；③均留存有手術切除腫瘤組織的石蠟標本；④臨床病理資料完整。排除標準：①合并其他部位原發腫瘤者；②患有心、肝、腎等重要器質性疾病者。本研究已經醫院醫學倫理委員會審核批準。TNBC 組中，年齡32～78 歲，平均（58.04±19.95）歲；病程3～5年，平均（3.26±1.12）年。非TNBC 組中，年齡31～75 歲，平均（57.75±16.34）歲；病程3～5年，平均（2.94±1.36）年。兩組患者的一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

收集所有患者的臨床病理資料，包括年齡（＜50歲和≥50 歲）、絕經狀況（是否絕經）、腫物直徑（≤2 cm和＞2 cm）、臨床分期（Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅵ期）、病理分型（浸潤性導管癌和非浸潤性導管癌）、組織學分級（Ⅰ～Ⅱ級和Ⅲ級）、淋巴結轉移情況（有無淋巴結轉移）等，收集術后病理組織檢測EGFR 與VEGFR 表達情況，分析其表達差異及其與TNBC 臨床病理特征之間的關系。

1.3 檢測方法

采用免疫組化法檢測EGFR 與VEGFR 在TNBC患者中的表達，試劑盒購自丹麥Dako 公司，按照試劑盒說明書操作。免疫組化法步驟：①對所有患者乳腺癌組織分別進行標示、編號；②將乳腺癌組織蠟樣塊進行連續切片處理，切片厚度4 μm；③應用二甲苯浸泡3 次進行脫蠟處理，浸泡完畢后，再分別用95%、85%和65%的酒精沖洗二甲苯；④應用高壓鍋緩慢加熱加壓，修復組織抗原，冷卻后，應用PBS 溶液沖洗3 次，每次3 min；⑤應用3%過氧化氫溶液滅活內源性過氧化物酶并洗脫后，再于切片上加入B7-H6分子兔抗人單克隆抗體，洗脫，進行DAB 染色；⑥蒸餾水洗脫后，應用蘇木素進行復染；⑦無水酒精脫水，晾干后封片處理，鏡檢。EGFR 以細胞膜出現棕黃色顆粒為陽性，VEGFR 以細胞膜與細胞質出現棕黃色顆粒為陽性，每張切片由兩名高年資病理科醫生采用雙盲法觀察，按陽性細胞占比劃分蛋白表達強度，0%～10%為“-”，11%～25%為“+”，26%～50%為“++”，＞50%為“+++”[7]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示；計數資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Spearman秩相關檢驗進行關系分析。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TNBC 患者的臨床病理情況

年齡：＜50 歲69 例（69.00%），≥50 歲31 例（31.00%）；絕經狀況：是38 例（38.00%），否62 例（62.00%）；腫物直徑：≤2 cm 37 例（37.00%），＞2 cm 63 例（63.00%）；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期58 例（58.00%），Ⅲ～Ⅵ期42 例（42.00%）；病理分型：浸潤性導管癌71 例（71.00%），非浸潤性導管癌29 例（29.00%）；組織學分級：Ⅰ～Ⅱ級43 例（43.00%），Ⅲ級57 例（57.00%）；淋巴結轉移情況：有64 例（64.00%），無36 例（36.00%）。

2.2 TNBC 組與非TNBC 組患者EGFR 及VEGFR的表達情況

TNBC 組患者EGFR、VEGFR 陽性表達率均高于非TNBC 組，差異有統計學意義（P＜0.05）（表1）。TNBC患者中，EGFR 免疫組化染色結果中發現EGFR 陽性細胞的細胞膜出現棕黃色顆粒（圖1，封四），VEGFR陽性細胞以細胞膜與細胞質出現棕黃色顆粒。

表1 TNBC 組與非TNBC 組患者EGFR 及VEGFR 陽性表達率的比較[n（%）]

圖1 TNBC患者中EGFR免疫組化染色結果（100×）

2.3 TNBC 患者EGFR 及VEGFR 表達與臨床病理特征的關系

TNBC 患者EGFR 的表達與淋巴結轉移相關（P＜0.05），與年齡、絕經狀況、腫物直徑、臨床分期、病理分型、組織學分級無關（P＞0.05）；VEGFR 的表達與臨床分期、組織學分級及淋巴結轉移均相關（P＜0.05），與年齡、絕經狀況、腫物直徑、病理分型無關（P＞0.05）（表2）。

表2 TNBC 患者EGFR 及VEGFR 表達與臨床病理特征的關系[n（%）]

2.4 TNBC 患者EGFR 與VEGFR 表達的關系

Spearman相關性分析顯示：TNBC 患者EGFR與VEGFR 的表達之間存在正相關關系（r=0.306，P＜0.05）。

3 討論

近年來關于TNBC 的分子治療靶點成為了研究熱點。EGFR、VEGFR 均為近年被廣泛研究的腫瘤相關調控分子。EGFR 是EGFR 家族的成員之一，廣泛分布在上皮細胞、成纖維細胞等細胞表面，可以激活下游的信號傳導通路，促進細胞增殖分化與腫瘤形成[8]。VEGFR 是一種典型的跨膜蛋白，可誘導內皮細胞增殖與遷移，調控血管、淋巴管內皮細胞的新生，對于胚胎發育、腫瘤細胞增殖遷移起著重要調節作用[9]。多項研究提示，EGFR、VEGFR 在TNBC 進展中也發揮了一定作用[10-11]。

本研究分別對100 例TNBC 與100 例非TNBC患者進行EGFR 與VEGFR 蛋白表達檢測，結果顯示，TNBC 較非TNBC 患者表現出EGFR 與VEGFR 的高表達。既往研究[12-13]表明，TNBC 癌細胞過表達EGFR，為51.0%～53.7%，而非TNBC 中EGFR 表達為10%～31%。本研究中TNBC 患者EGFR 陽性表達率為52.00%，而非TNBC 患者為21.00%，與上述研究的表達趨勢基本一致。有研究指出，VEGFR 在TNBC 中的表達率為80%，而在非TNBC 患者中為51%[7]。而本研究中TNBC 患者VEGFR 陽性表達率為71.00%，非TNBC 中VEGFR 陽性率表達為56.00%，基本與該研究報道接近。

本研究進一步分析TNBC 患者EGFR 與VEGFR表達與臨床病理特征的關系，結果顯示，TNBC 患者EGFR 的表達與淋巴結轉移相關，而VEGFR 的表達與臨床分期、組織學分級及淋巴結轉移均相關（P＜0.05）。既往研究表明，EGFR 在癌癥進展中發揮促進血管生成、促進癌細胞轉移、增強癌細胞黏附功能與抑制凋亡等作用[14]。其在淋巴結轉移患者中呈現更高表達，表明其與癌細胞的遷移存在密切聯系。居紅格等[15]的研究通過比較TNBC 和非TNBC 各30 例患者的臨床病理資料，發現EGFR 與淋巴結轉移、遠處轉移存在顯著的相關性。胡波等[16]采用免疫組化檢測了57 例浸潤性導管腺癌患者中相關分子表達，發現EGFR 在TNBC 患者中表達明顯上調，與這類型腫瘤的高侵襲性一致。VEGFR 廣泛表達于早期胚胎血管內皮細胞上，但在胚胎發育后期與正常成體中僅特異性地在淋巴管內皮細胞上表達，此外也少量表達于正常乳腺組織的毛細血管、內分泌器官中，在同其配體VEGF-C 與VEGF-D 特異性結合后，能促進癌細胞的淋巴管遷移[17-18]。本研究結果還顯示，TNBC 患者EGFR與VEGFR 的表達之間存在正相關關系（P＜0.05），表明其表達具有協同性，共同在TNBC 的進展中發揮調控作用。EGFR 在TNBC 中的報道較多，而目前VEGFR 的相關報道多見于肺腺癌中，在乳腺癌中仍較少見[19-20]。

綜上所述，TNBC 患者EGFR 及VEGFR 存在高表達，且其表達與病理特征之間存在相關，對于評價TNBC 的病情及預后有一定的意義。由于本研究時間較短，未對乳腺癌患者進行隨訪，因此EGFR、VEGFR的表達與預后的關系還未探討，日后將可能在臨床實驗中增加隨訪內容進行深入探討。