男性不育患者精子DNA碎片率與年齡及精液質(zhì)量的相關(guān)性分析

孫叢萌

（梅州市婦女兒童醫(yī)院，廣東 梅州 514021）

0 引言

隨著男性年齡的顯著增長，會顯著提高后代發(fā)生染色體出現(xiàn)缺陷的可能性。研究顯示男性年齡的增長與自然流產(chǎn)之間也存在著密切的聯(lián)系，但臨床男性年齡對生育產(chǎn)生的影響機制還不夠明確。此外，隨著男性年齡的顯著增長，也會提高男性精子DNA碎片率進而影響男性的生育能力[1-2]。本研究中采用精子染色質(zhì)擴散法檢測精液中的精子DNA碎片率，探討精子DNA碎片率與男性年齡以及精液質(zhì)量之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取435例于2017年1月1日至2019年6月30日在梅州市婦女兒童醫(yī)院輔助生殖接受夫精人工授精（AIH）的男性不育患者作為研究對象，年齡21~49歲，平均（32.32±5.54）歲，所有患者禁欲2~7 d，手淫法收集完整精液標本，37℃完全液化后待檢。

1.2 方法

（1）精液質(zhì)量分析：精子濃度及精子前向運動精子數(shù)（PR）采用以色列的MAKLER精子計數(shù)板手工法進行精子計數(shù)。精子形態(tài)學分析洗滌精子，將0.5 mL精液加10 mL生理鹽水中稀釋，800 g離心10 min，使用拉薄技術(shù)，將5~10 uL精子混懸液均勻涂在載玻片上。采用巴氏染色法進行精子形態(tài)學的分類，通過光學顯微鏡觀察精子包括頭、頸、中段、主段和末段，每張涂片至少評估200個精子。

（2）精子DNA碎片檢測：精子DNA碎片檢測采用深圳博銳德生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒的檢測方法，嚴格按照試劑說明書進行操作。

（3）按照精子DNA碎片率正常參考值（≤25%）進行對比分析：對精子DNA碎片率>25%為高度碎片化，≤25%中度碎片化，≤15%為正常進行劃分；按年齡組將435例患者劃分為≤30歲，>30-≤40歲及>40歲，進行相關(guān)性分析。

1.3 統(tǒng)計學分析。采用SPSS 20.0軟件對比較數(shù)據(jù)實施統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料表示方式為[n（%）]，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 DNA碎片率與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析。對比其精子濃度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），PR、正常精子形態(tài)率、TZI對比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

表1 DNA碎片率與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析（±s）

表1 DNA碎片率與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析（±s）

≤25 345 74.26±57.02 48.62±15.20 3.56±2.63 1.35±0.16>25 90 68.13±61.65 34.20±14.93 2.29±2.29 1.47±0.21 t - 0.8929 8.0442 4.1851 5.9126 P - >0.05 <0.05 <0.05 <0.05

2.2 不同年齡組精子DNA碎片率結(jié)果對比分析。>40歲年齡組患者精子碎片率顯著上升，其他兩個年齡組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。精子DNA碎片率與男性不育患者年齡呈正相關(guān)，見表2。

表2 不同年齡組DNA碎片率結(jié)果對比分析（±s）

表2 不同年齡組DNA碎片率結(jié)果對比分析（±s）

年齡組 ≤30歲（n=198） ＞30~≤40歲（n=192） >40歲（n=45）DNA碎片率（%） 17.45±10.52 17.61±12.70 24.70±16.25

2.3 圓細胞>1.0×106/mL精子DNA碎片與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析。圓細胞>1.0×106/mL的精子DNA碎片率明顯上升（P<0.05）；兩組精子濃度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），PR、精子正常形態(tài)率、TZI顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），見表3。

表3 圓細胞＞1.0×106/mL精子DNA碎片與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析（±s）

表3 圓細胞＞1.0×106/mL精子DNA碎片與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析（±s）

組別 例數(shù) DNA碎片率（%） 濃度×106/mL PR（%） 正常形態(tài)率（%） TZI>1.0×106/mL 96 20.24±12.74 70.81±49.59 40.49±14.81 2.68±2.26 1.42±0.17<1.0×106/mL 339 17.71±12.21 73.61±60.21 47.1±16.32 3.47±2.68 1.36±0.17 t-1.7750 0.4172 3.5731 2.6345 3.0528 P->0.05 >0.05 <0.05 <0.05 <0.05

2.4 碎片率分組與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析。三組的精子濃度對比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；PR、正常形態(tài)率TZI對比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表4。

表4 碎片率分組與精液質(zhì)量結(jié)果對比分析

2.5 碎片率分組與精液參數(shù)的相關(guān)性分析。精子DNA碎片率與男性不育患者精子濃度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），與前向運動精子百分率、精子正常形態(tài)率、TZI呈顯著性負相關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），見表5。

表5 碎片率分組與精液參數(shù)的相關(guān)性

3 討論

我國不孕不育癥的發(fā)病率約12.5%，且發(fā)病率呈逐年上升，男性不育是由精子和精漿的質(zhì)量決定的，精子的質(zhì)量影響了受精能力，在不育癥患者中，精子濃度、活力和形態(tài)的分析是評價精子質(zhì)量的診斷依據(jù)，而這些精子質(zhì)量的傳統(tǒng)指標只能評價部分功能[3-4]。精子DNA碎片率被認為是一個新的評價精子質(zhì)量和預測男性生育能力的指標，精子DNA碎片率程度反映精子遺傳物質(zhì)的完整性，精子DNA碎片增加會造成不育和反復流產(chǎn)[5-6]。

本研究發(fā)現(xiàn)隨著精子DNA碎片率上升，精子濃度有下降趨向，但差異無統(tǒng)計學意義，PR、精子形態(tài)學、TZI呈顯著性負相關(guān)。通過3個不同年齡段的精子DNA碎片率分析，>40歲年齡組精子DNA碎片率明顯高于其他年齡組，可能與男性年齡增長、自由基增加造成染色質(zhì)異常、睪丸生精過程DNA 修復能力降低有關(guān)。本研究認為精液圓細胞增多，可能與精子質(zhì)量下降呈正相關(guān)。因此，精子DNA碎片率檢測作為精液常規(guī)分析的重要補充，能夠更全面地評估男性精液質(zhì)量水平。

綜上所述，精子DNA碎片率與男性不育患者年齡呈正相關(guān)，與精子濃度無顯著性差異，與前向運動精子百分率 、精子正常形態(tài)率、TZI呈顯著性負相關(guān)。精子DNA碎片率可以獨立作為精子質(zhì)量評價指標.也可以結(jié)合其他精子質(zhì)量作為評價指標，為評估男性不育癥提供更全面的實驗室數(shù)據(jù)。