熒光染色（一步法）在皮膚性病常見疾病直接鏡檢中的應用效果分析

馬元龍，陳 旭，張金鎖，李 浩，高 娃，于希軍

（1.內蒙古醫科大學附屬醫院皮膚性病科，內蒙古 呼和浩特 010050；2.內蒙古醫科大學中醫學院）

我科真菌室常規的檢測疾病有手、足、體、股癬，甲真菌病，花斑癬，馬拉色菌毛囊炎，傳染性軟疣，痤瘡，疥瘡，念珠菌性龜頭炎，念珠菌性陰道炎，口腔念珠菌病。臨床醫生需要一種準確率高而且快速有效的檢驗手段來幫助臨床診療。20%KOH濕片法存在主觀性強、干擾因素比較多、容易漏檢、誤檢的情況；熒光染色法背景清晰，菌絲、孢子、毛囊螨（卵、幼蟲、若蟲、成蟲）、軟疣小體、疥螨（成蟲、幼蟲、若蟲、卵、卵殼、疥糞）藍白色熒光，并對兩種檢驗方法進行比較，現將結果總結報告如下：

1 資料及方法

1.1 一般資料

研究資料均來自皮膚性病科門診，收集時間為2018-06~2020-07。高度疑似真菌感染的患者有手癬316例，足癬366例，甲真菌病288例，體癬216例，頭癬166例，股癬184例，花斑癬124例，馬拉色菌毛囊炎164例，念珠菌性龜頭炎126例，念珠菌性陰道炎166例，口腔念珠菌病118例，痤瘡292例，傳染性軟疣120例，疥瘡156例，所有疾病患者取材同樣皮損的標本均一式兩份。

1.2 方法

（1）取材：用75%的酒精常規消毒需要取材的部位，手、足、體、股、花斑癬用鈍刀刮取或用無齒鑷子夾取邊緣新鮮的皮屑，頭癬用無齒鑷子夾取帶菌鞘的斷發及鱗屑；甲真菌病用鈍刀刮取或者用無齒鑷子夾取甲床下的碎屑；馬拉色菌毛囊炎用無齒鑷子夾取前胸及后背部毛囊性丘疹、膿丘皰疹種的一種皮損，痤瘡用無齒鑷子夾取丘疹、膿皰、白頭、黑頭粉刺中的一種皮損；疥瘡如發現隧道夾取或刮取隧道，無隧道刮取手縫處水皰，夾取身體部位的丘疹；傳染性軟疣夾取半球形丘疹。念珠菌性龜頭炎刮取龜頭及冠狀溝處的分泌物及紅色丘疹；口腔及陰道念珠菌用棉簽取其分泌物做檢查。所有同樣皮損的標本一式兩份；（2）染色：20%KOH濕片法：一份標本滴加一滴KOH溶液，蓋上蓋玻片，在酒精燈上稍微加熱一下，然后在普通光學顯微鏡下鏡檢，記錄鏡檢結果；熒光染色法：一份標本滴加一滴熒光染色液（江蘇萊芙時代生物科技有限公司生產）。染色5min，蓋上蓋玻片，吸取多余的染液置于熒光顯微鏡下觀察，以發現菌絲、孢子、毛囊螨（卵、幼蟲、若蟲、成蟲的其中之一）、疥螨（卵、幼蟲、若蟲、成蟲、卵殼、疥糞的其中之一）、軟疣小體為陽性。

1.3 統計學處理

應用SPSS 26.0軟件對數據進行統計學處理，兩種方法數據均采用χ2檢驗分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

11種真菌感染性疾病以及痤瘡、傳染性軟疣、疥瘡用熒光染色法于KOH濕片法檢出真菌毛囊螨、疥螨、軟疣小體陽性率的比較（見表1、2）。

表1 11種真菌感染性疾病在兩種檢測方法中真菌陽性率的比較

11種真菌感染性疾病在熒光染色法及KOH濕片法中真菌檢出陽性率進行比較，每一種病熒光染色法真菌檢出陽性率明顯高于KOH濕片法，特別是甲真菌病、馬拉色菌毛囊炎用熒光染色法檢出的陽性率明顯高于KOH濕片法（χ2=18.205，P＜0.05；χ2=112.021，P＜0.05）有顯著性差異（見表1）。

毛囊螨、馬拉色菌、疥螨用熒光染色法及KOH濕片法檢出陽性率比較。熒光染色法明顯高于KOH濕 片 法（χ2=19.360，P＜0.05；χ2=38.835，P＜0.05；χ2=10.386，P＜0.05）；只有軟疣小體用熒光染色法及KOH濕片法檢出陽性率無明顯的差異（χ2=0.091，P＞0.05），痤瘡檢出的馬拉色菌包括線狀菌絲團及群集性孢子（見表2）。

表2 痤瘡、傳染性軟疣、疥瘡患者中兩種檢測方法中陽性率的比較

3 討論

KOH濕片法是皮膚科真菌檢查使用的一種最古老、最初始的直接鏡檢法，操作容易、方法簡單，只需要一臺普通顯微鏡即可。這種檢測方法缺點明顯，如背景較為混亂，陽性率低，特別在真菌檢驗的標本上[1～6]，而且孢子類結構容易和脂滴、氣泡混淆，導致誤診[6]。熒光染色法中具有特殊的熒光素，可以特異性結合真菌細胞壁上的幾丁質，且具有較高的親和力，只要十幾秒的時間可完成反應，因此檢測靈敏度高，反應也較快[7]。從我們對2228例高度疑似淺部真菌病用熒光染色法及KOH濕片法結果的比較看，熒光染色法真菌檢出的陽性率明顯高于KOH濕片法，特別是熒光染色法更易辨認孢子，在疑難標本中提高了馬拉色菌毛囊炎、痤瘡內的馬拉色菌、念珠菌性甲真菌病的檢測。從我們用熒光染色法對164例馬拉色菌毛囊炎及292例痤瘡內馬拉色菌檢出的陽性率看，熒光染色法檢出的陽性例數分別為145例占88.41%；156例占53.42%，而KOH濕片法檢出的陽性例數為51例占31.09%；82例占28.08，二者有顯著性差異。288例甲真菌病熒光染色法檢出真菌的陽性例數為200例，占75.71%；KOH濕片法檢出的陽性例數為138例占47.91%，兩種檢測方法檢出真菌的陽性率有顯著性差異，我們還對292例痤瘡，156例疥瘡用熒光染色法及KOH濕片法檢出毛囊螨、疥螨的陽性率看，熒光染色法明顯高于KOH濕片法。熒光染色法更易發現毛囊螨的卵及疥螨的卵殼、疥糞等。毛囊螨的卵在熒光染色法下可見呈蘑菇狀，自前端向后逐漸增寬至卵體中部最寬，呈現亮藍白色熒光，疥糞在熒光染色法下發藍綠色熒光，呈長圓形而稍扁。疥螨的卵殼在寄生蟲雜志已有報告，發現4種卵殼，其中有一種卵殼形態特殊，如同沿卵的長軸2/3處用刀子切開一樣可見卵殼的裂縫，裂縫出形成“V”字開口[8]。用熒光染色法檢出的卵殼更清晰、更明亮、更能觀察卵殼的形態。所以，熒光染色法與KOH法比較，初學者易于掌握，能快速出報告，準確率高，值得皮膚科直接鏡檢檢查中推廣使用。