山羊痘病毒屬病毒檢測技術分析

邵坤

摘要：近年來，我國畜牧業高速發展，逐漸呈現出規模化的養殖方式，在提高了養殖效率的同時，也增加了病毒傳播的概率，山羊痘病毒屬病毒在畜牧業中是一種比較常見的病毒，包括山羊痘病毒、綿羊痘病毒等，會嚴重影響牲畜的正常發育，造成巨大的經濟損失，本文對山羊痘病毒屬病毒的檢測技術做出了討論。

關鍵詞：山羊痘病毒屬病毒;病毒檢測

山羊痘病毒屬病毒傳播速度快，傳播范圍廣，死亡率高，是動物痘病毒中最危險的一種，最早于13世紀英國被發現，被美國疫情控制中心劃歸為危險病毒，在中國、瑞典等地也有人感染羊痘病毒的情況，羊痘病毒屬病毒的防治關乎著公共衛生安全，因此對山羊痘病毒屬病毒檢測技術進行深入分析具有重要意義。

1? 山羊痘病毒屬病毒簡述及特點

山羊痘病毒屬病毒屬于痘病毒科脊椎動物痘病毒亞科病毒，主要包括山羊痘病毒、綿羊痘病毒、牛結節疹病毒等，對牛、羊等養殖業危害嚴重，甚至有感染人的現象，被世界衛生組織列為A類病毒，具有非常強大的傳播性和危害性，13世紀在英國被首次發現，感染山羊痘病毒屬病毒的牲畜發病率達到了70%左右，其中死亡率在20%到80%之間，羔羊的死亡率甚至可以達到100%，世界各國均有相關案例出現，目前在非洲、中東等地較為流行。感染了山羊痘病毒、綿羊痘病毒、牛結節疹病毒等的動物，會出現身體發熱，皮膚、粘膜、器官表面出現丘疹或結節的現象，嚴重時會發生皮膚水腫、身體消瘦、毛色暗淡枯黃、淋巴結腫大、乳量下降，甚至是死亡等情況，這種病毒一旦爆發將會給地區的養殖業帶來巨大危害，嚴重損害養殖主的經濟利益，甚至危害生命安全。我國將山羊痘、綿羊痘等疾病列為了一級動物疾病，對其高度關注，因此對山羊痘病毒屬病毒的檢測技術進行深入分析與研究意義重大。

2? 山羊痘病毒屬病毒檢測技術

2.1? 病原學檢測

病原學檢測是一種常見的山羊痘病毒屬病毒檢測方法，是一種將病毒分離出來的檢查技術，需要采集染病動物皮膚和粘膜上的痘疹、痘斑，當染病動物進入發熱期需要采集其血液、淋巴結細胞和肺部病變組織。分離出的山羊痘病毒一般要以原代或次代的羔羊睪丸細胞進行培養，除此之外，羔羊腎細胞和牛犢睪丸細胞也具有同樣的敏感性。在病羊皮膚丘疹、膿皰組織的分離觀察中，可以發現病毒在植入羔羊睪丸細胞后第二天，大部分細胞開始變圓、變細，細胞漿內有可疑顆粒出現，并產生空泡，感染的單層細胞會在五天內死亡。當取內蒙古病羊的皮膚痘疹和水皰當做試驗樣本時，分別接種于BHK-21傳代細胞和SPF雞胚細胞中時，發現了明顯的區別，BHK-21傳代細胞出現了明顯的病變，并于24h后開始收縮、聚集，48h后出現空泡現象，72h內全部死亡[1]。接種同種病毒的SPF雞胚細胞在120h后仍然存活，將其解刨后發現雞胚胚體出血，囊毛增厚，接種部位有明顯的痘斑。以不同地區的病羊病毒作為實驗樣本，可以發現不同的現象，或者接種于經過不同處理方式的原代綿羊睪丸細胞，也能得到一定的規律，這種監測方法較為緩慢，但是準確性很高，能觀察病毒的變化規律和生長方式，多用于病原研究工作中。

2.2? 染色電鏡觀察

對山羊痘病毒屬病毒也可以使用染色電鏡觀察方法進行檢測，采集山羊痘疫區的病羊病料，通過雞胚細胞和BHG-21傳代細胞培養，然后將培養所得的胚胎切片，用硝酸鉛和醋酸鉛進行染色，使用專門的病毒電鏡進行觀察。經由電鏡觀察可知，山羊痘病毒屬病毒在早期的時候呈現卵圓形，大小在250nm到350nm之間，薄膜存在不完整的現象，薄膜內電子密度較高的物質占比較大，電子密度中等的物質則分布在電子密度較高物質的邊緣。山羊痘病毒屬病毒在中期的形狀、大小與早期類似，但是電子密度高的物質減少，病毒粒子直徑較小。成熟期的山羊痘病毒屬病毒中的病毒粒子致密，電子密度分布極不均勻，中央有啞鈴形的核酸芯髓。

2.3? 血清學檢測

血清學檢測是通過血清對山羊痘病毒屬病毒進行檢測，針對具體病毒種類的不同，有很多種檢測方法，包括病毒中和試驗、免疫瓊脂擴散試驗，酶聯免疫吸附試驗、熒光抗體試驗等。病毒中和試驗是檢測特異性較強的羊痘病毒的血清檢測方法，被感染動物只能產生低水平或中水平的抗體。免疫瓊脂擴散試驗是將病毒在BHK-21傳代細胞中培養，然后重復凍融三次，與山羊痘標準血清做瓊脂擴散試驗，會發現染病細胞將出現白色沉淀線。熒光抗體試驗使用異硫氰酸熒光標記山羊痘病抗體，并以山羊痘熒光抗體檢驗病羊的皮膚痘疹切片，會出現黃綠色熒光，此熒光能被山羊痘標準陽性血清特異性抑制，可以較為準確的檢測出山羊痘病毒屬病毒。血凝試驗也利用山羊痘病毒抗原有較強的特異性和敏感性，不會與其他病毒的抗原發生交叉反應的特點，進行檢測，是一種靈活、快速的檢測方法。

3? 結語

山羊痘病毒屬病毒傳播速度快，適應力強，致死率高，是最危險的幾種痘類病毒之一，一旦爆發將會給地區畜牧業造成嚴重的危害，因此對山羊痘病毒屬病毒的檢測方法進行研究具有重要意義，其中病原學檢測、染色電鏡觀察、血清學檢測都是較為常見的檢查方法，應該不斷加以深入研究和完善。

參考文獻

[1] 徐瀅，張琪，付明哲，等.山羊痘病毒LAMP檢測方法的建立[J].動物醫學進展，2020，41（3）：12-16.