抑癌基因ST5對(duì)乳腺癌的作用及其分子機(jī)制

陳東漢，曾玉英，陳 帥，趙 燦，黃 璐，鄭小剛，李明莉，張志明，尤 俊，3

（1. 廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廈門 361003；2. 福建省寧德市閩東醫(yī)院放射治療科，寧德 352000；3. 福建醫(yī)科大學(xué)附屬廈門第一醫(yī)院，廈門 361003）

乳腺癌具有明顯的病理及分子特征異質(zhì)性，基因表觀遺傳在其中可能起重要作用［1］。利用甲基化芯片比較正常乳腺及乳腺癌組織，發(fā)現(xiàn)后者存在大量表觀基因改變［2］，提示表觀遺傳學(xué)事件在乳腺癌中可能具有重要作用。研究證實(shí)，基因啟動(dòng)子甲基化可通過影響細(xì)胞周期（如CCND2、CKN2A）、DNA修復(fù)（如BRCA1、GSTP1）、凋亡（如BCL2、DAPK）、侵襲和轉(zhuǎn)移（如RASSF1A、RARβ、TWITE、HIN1）、轉(zhuǎn)錄調(diào)控（如HOXA 5）、細(xì)胞粘附（如CDH1）以及激素介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)（如ERα、ERβ）等機(jī)制影響乳腺癌發(fā)生發(fā)展［3］。

ST5發(fā)現(xiàn)于篩選的HeLa細(xì)胞癌基因cDNA文庫，是Hela/成纖維細(xì)胞雜交系統(tǒng)中差異表達(dá)的調(diào)控基因［4］。ST5又稱為DENND2B，基因位于11號(hào)染色體短臂15.4位置，序列全長(zhǎng)為217601bp，其中包含38個(gè)外顯子。ST5開放閱讀框片段長(zhǎng)3414bp，可編碼1137個(gè)氨基酸。ST5基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄形成三種大小不同的mRNA，分別編碼分子量為126、82和70 kDa的蛋白亞型P126、P82和P70。已發(fā)現(xiàn)P126在MCF10A細(xì)胞上與Rab13結(jié)合，促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞遷移及其致瘤表型［5-6］。ST5可抑制宮頸癌，但其在乳腺癌中的作用仍未知。本研究旨在通過探究ST5在乳腺癌中的作用及其潛在分子機(jī)理，為后續(xù)開發(fā)靶向藥物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料菌株E.coli DH5α和質(zhì)粒PCDNA3.1、PCDNA3.1-ST5（ST5）以及人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、MDA-MB-231、BT-549、MDA-MB-468為本課題組持有。人乳腺癌組織樣本由我院乳腺外科提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)用含10%胎牛血清的DMEM高糖完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，內(nèi)含100 U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素。置于37℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。……