影響獼猴桃花粉活力的因素探討*

陳厚錫，楊技超，王勝艷，潘麗珊，羅 充，李葦潔

（1 貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng)550025）（2 貴州省山地資源研究所）

獼猴桃為獼猴桃科（Actinidiaceae）獼猴桃屬（Actinidia）多年生雌雄異株落葉藤本果樹[1-2]，自然條件下主要靠風(fēng)媒和蟲媒進(jìn)行授粉[3]，若受天氣等因素影響，自然授粉效果并不理想[4]，需進(jìn)行人工輔助授粉。研究表明，花粉活力可影響授粉成效[5]，高倍體雄株授粉可提高雌株坐果率[6]。前人對(duì)獼猴桃花粉活力的影響因素已有研究，結(jié)果顯示，不同干燥方法[2]、貯藏溫度[7]、花粉來(lái)源[8]皆能影響獼猴桃花粉活力；常溫密閉條件下獼猴桃花粉存活時(shí)間最多不超過(guò)15 d[2,7]。實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，獼猴桃花粉在常溫密閉條件下最長(zhǎng)可存活超過(guò)30 d，加之有關(guān)脫藥時(shí)間及電熱毯干燥取粉（貴州省果農(nóng)常用）對(duì)獼猴桃花粉活力的影響罕有報(bào)道。鑒于此，本研究以貴州省16個(gè)獼猴桃主要授粉雄株為試材，研究不同脫藥時(shí)間、烘干方式及貯藏方法對(duì)獼猴桃花粉活力的影響，以期為科學(xué)制備和保存花粉提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

于貴州省水城區(qū)獼猴桃產(chǎn)學(xué)研基地（海拔1 200 m）選擇3個(gè)常用授粉雄株品種‘陶木里’‘和雄1號(hào)’‘紅陽(yáng)’雄株，及5個(gè)雄株株系貴山M1、貴山M36、貴山M37、貴山M38、貴山M39；于貴州省修文縣谷堡鎮(zhèn)烏栗村（海拔1 150 m）選擇8個(gè)常用授粉雄株株系GX1、GX4、GX5、GX7、GX9、GX10、GX11、GX12。其中，‘和雄1號(hào)’‘紅陽(yáng)’雄株、貴山M37屬于中華獼猴桃，其余品種（株系）屬于美味獼猴桃。

1.2 研究方法

1.2.1 倍性檢測(cè)

用流式細(xì)胞儀（Partec CyFlow Space）檢測(cè)染色體倍性（試劑盒：Partec CyStain UV Precise P），在橫軸接近100、200、300呈現(xiàn)主峰則倍性分別為二倍體、四倍體、六倍體。

1.2.2 脫藥時(shí)間

在大花蕾期采集無(wú)病害花蕾，分別于采后0～1、24～25、48～49、72～73 h 進(jìn)行人工剝離脫藥，花藥置于硫酸紙面，并用恒溫干燥箱于28℃下烘干，探究不同脫藥時(shí)間對(duì)獼猴桃花粉活力的影響。

1.2.3 干燥方式

將0～1 h 脫藥所得花藥置于硫酸紙面，分別通過(guò)恒溫干燥箱烘干（28℃，耗時(shí)8 h）、電熱毯干燥（高精度智能溫控器控制溫度在27～28℃，耗時(shí)10 h）、室內(nèi)自然陰干（23～28℃，耗時(shí)12 h）方式進(jìn)行干燥取粉，待花藥完全干燥后結(jié)束烘干，探究不同干燥方式對(duì)獼猴桃花粉活力的影響。

1.2.4 貯藏方法

用恒溫干燥箱將0～1 h 脫藥所得花粉烘干，裝入離心管，通過(guò)常溫敞口、常溫密閉（常溫貯藏溫度為23～28℃）、0～4 ℃低溫密閉、-20 ℃低溫密閉、-80℃超低溫密閉進(jìn)行貯藏，探究不同貯藏方法對(duì)獼猴桃花粉活力的影響。

1.3 花粉活力的測(cè)定

花粉活力的測(cè)定采用花粉萌發(fā)測(cè)定法：以花粉萌發(fā)率作為花粉活力探究的指標(biāo)，配制12%蔗糖＋0.01%硼酸培養(yǎng)液＋0.5%瓊脂，用毛筆蘸取少量花粉粒抖落在有培養(yǎng)液的載玻片上，放在25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h，后置于光學(xué)顯微鏡下觀察，花粉萌發(fā)即有活力。3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)觀察5個(gè)視野，每個(gè)視野至少觀察100 粒花粉。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，采用SPSS 22進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 染色體倍性

經(jīng)測(cè)定，‘紅陽(yáng)’雄株、貴山M37為二倍體，‘和雄1號(hào)’、貴山M39、GX4 為四倍體，其余品種（株系）皆為六倍體（圖1）。

圖1 不同品種（株系）獼猴桃雄株染色體倍性流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同脫藥時(shí)間對(duì)獼猴桃花粉活力的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（表1），不同脫藥時(shí)間所得獼猴桃花粉活力差異極顯著（P＜0.01）。采后0～1 h脫藥所得的花粉活力最高，不同品種（株系）均在79.30%以上，其中‘和雄1號(hào)’花粉活力最高，可達(dá)95.30%。隨著脫藥時(shí)間的推遲，花粉活力明顯降低，采后72～73 h脫藥所得的花粉活力為7.70%～24.23%。

表1 不同脫藥時(shí)間對(duì)獼猴桃花粉活力的影響

2.3 不同干燥方式對(duì)獼猴桃花粉活力的影響

不同干燥取粉方法制取所得獼猴桃花粉活力不同，由表2可知，恒溫干燥箱烘干、電熱毯干燥、室內(nèi)自然陰干所得的花粉活力最高分別為95.30%、89.67%、93.13%，最低分別為79.30%、74.50%、62.23%；除GX4、GX9 外，同一品種（株系）采用恒溫干燥箱烘干所得的花粉活力均高于電熱毯干燥和室內(nèi)自然陰干所得，部分品種（株系）的花粉活力表現(xiàn)為電熱毯干燥＞室內(nèi)自然陰干。

表2 不同干燥方式對(duì)獼猴桃花粉活力的影響

2.4 不同貯藏方法對(duì)獼猴桃花粉活力的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，常溫條件下，貯藏初始階段1～5 d內(nèi)，花粉活力皆大幅度下降，敞口存放時(shí)花粉存活時(shí)間不超過(guò)15 d，密閉貯藏可延長(zhǎng)獼猴桃花粉存活時(shí)間，最長(zhǎng)可達(dá)33 d。與常溫條件下貯藏相比，0～4 ℃密閉保鮮條件下花粉活力隨時(shí)間推移下降速度減緩，貯藏30 d 時(shí)，活力還保持在25.2%～44.7%；-20 ℃貯藏花粉失活速度較0～4℃貯藏更小，貯藏30 d時(shí)，活力還保持在49.7%～68.5%，適合短期貯藏。-80℃超低溫密閉保存可大幅度延長(zhǎng)獼猴桃花粉存活時(shí)間，貯藏1年后，活力保持在32.3%～70.1%，也可滿足授粉要求，可用于次年授粉，對(duì)生產(chǎn)上解決花期不遇問(wèn)題有重要意義。

3 討論

研究表明，獼猴桃花期短、花粉活力受溫度影響較大，若花期遇低溫多雨，花粉傳播受阻[9]，進(jìn)而造成獼猴桃錯(cuò)過(guò)最佳授粉時(shí)期，目前獼猴桃授粉作業(yè)主要依賴人工[10]。花粉活力是影響果樹坐果率和產(chǎn)量的重要因素[11]，因此，選擇合適的脫藥時(shí)間、優(yōu)良的花粉烘干方式及貯藏方法顯得尤為重要。

李志[6]認(rèn)為高倍體雄株授粉可提高獼猴桃的坐果率與果實(shí)品質(zhì)，本研究發(fā)現(xiàn)‘陶木里’、貴山M1、貴山M36、貴山M38、GX1、GX5、GX7、GX9、GX10、GX11、GX12 為六倍體。本研究發(fā)現(xiàn)，采集大花蕾后，脫藥時(shí)間越早，花粉活力越高，此結(jié)論與程新輝等[12]一致。李鵬[13]認(rèn)為，干燥速度越快，花粉越能保持較高的活力，此結(jié)論與姚春潮等[2]研究結(jié)果一致。楊紅等[14]認(rèn)為，不同地區(qū)環(huán)境條件不同，陰干所得花粉活力不同，本研究顯示，除GX4、GX9外，同一品種（株系）采用恒溫干燥箱烘干所得花粉活力相對(duì)較高。陳永安等[7]認(rèn)為常溫密閉條件下獼猴桃花粉最長(zhǎng)維持9 d的活力，姚春潮等[2]認(rèn)為常溫密閉條件下獼猴桃花粉最長(zhǎng)貯藏15 d 即失去活力，本研究發(fā)現(xiàn)，常溫密閉條件下獼猴桃花粉活力最長(zhǎng)可維持33 d，可能因?yàn)榛ǚ刍盍κ茏陨磉z傳因素的影響[15]。楊技超等[16]認(rèn)為獼猴桃花粉在-80℃超低溫條件下貯藏1年后仍可滿足授粉要求，與本研究結(jié)果一致。張洪偉等[17]認(rèn)為低溫貯藏能延緩花粉失活，此結(jié)論與尉倩等[18]研究結(jié)果一致，本研究發(fā)現(xiàn)密閉貯藏和低溫貯藏能延長(zhǎng)花粉存活時(shí)間。

4 結(jié)論

獼猴桃授粉時(shí)，可選擇‘陶木里’、貴山M1、貴山M36、貴山M38、GX1、GX5、GX7、GX9、GX10、GX11、GX12 等六倍體雄株進(jìn)行授粉。脫藥時(shí)間、干燥方式及貯藏方法均對(duì)獼猴桃花粉活力有影響，采集大花蕾后，脫藥時(shí)間越早，越能保持較高的花粉活力，因此花蕾應(yīng)盡早脫藥。應(yīng)盡量選擇恒溫干燥箱進(jìn)行花粉干燥。獼猴桃花粉應(yīng)該在密閉低溫條件下貯藏，不建議在常溫條件下貯藏花粉，短期貯藏可在-20℃條件下進(jìn)行，如需長(zhǎng)期貯藏花粉，應(yīng)選擇-80℃超低溫密閉貯藏。

本試驗(yàn)僅1年數(shù)據(jù)，有關(guān)獼猴桃花粉在-80 ℃貯藏下的存活時(shí)間、不同脫藥方式對(duì)獼猴桃花粉活力的影響及如何高效開(kāi)展人工輔助授粉等還需進(jìn)一步深入研究。