永州野生茶資源分布及其親緣關系分析

盧作斌 沈程文 楊旭初 何哲 唐六合 朱青輝 程艷紅

摘要：江華苦茶是湖南省珍貴的地方茶樹種質資源之一。近年來，對永州野生茶樹資源的調查主要圍繞江華瑤族自治縣的多個鄉鎮，對其他縣區涉及很少。從永州地理及自然環境特點上看，適合野生茶的生長區域應更為廣闊。因此，對其具體分布情況和種群特征作進一步研究十分必要。對永州3條山系分布的原始型茶樹資源進行采樣比對分析，所調查區域的野生茶資源表型特性為小喬木、中葉類種，水浸出物含量32.8%～35.4%，茶多酚含量21.27%～23.55%。分子標記結果顯示永州區域內野生茶樹間關聯度較大，均可與江華苦茶聚為一類，且具有良好的發酵茶加工特性。

關鍵詞：永州野生茶;江華苦茶;茶樹資源;聚類分析;主導品種

Distribution of Wild Tea Resources in

Yongzhou and Analysis of Its Relationship

LU Zuobin1， SHEN Chengwen2， YANG Xuchu1，3， HE Zhe1，3， TANG Liuhe1，3， ZHU Qinghui1，3， CHENG Yanhong1，3

1. Futian Tea House， Yongzhou 425000， China; 2. Hunan Agricultural University， Changsha 410128， China;

3. Yongzhou Tea Research Institute， Yongzhou 425000， China

Abstract： Jianghua bitter tea is one of the precious local tea germplasm resources in Hunan province. In recent years，the investigation of wild tea tree resources in Yongzhou has mainly focused on villages and towns in Jianghua Yao?Autonomous County， and has rarely? involved few other counties and districts. According to the characteristics of?Yongzhou geography and natural environment， the growing area suitable for wild tea should be more extensive.?Therefore， it is necessary to further study its specific distribution and population characteristics. The results show thatthe phenotypic characteristics of wild tea resources were small trees and mid-leaf species， and the biochemical?characteristics were as follows： water extract ranged from 32.8% to 35.4%， tea polyphenol ranged from 21.27% to?23.55%. The results of molecular markers showed that the relationship between wild tea trees in Yongzhou area arehighly correlated and they could be clustered with Jianghua bitter tea. They had good processing characteristics.?Therefore， Jianghua bitter tea， as a unique local tea resource in Yongzhou， has the advantage of becoming the dominantcultivar in local tea industry. While the dominant product of Yongzhou tea can be classified into black tea or other?fermented tea.

Keywords： wild tea resources in Yongzhou， Jianghua bitter tea， tea resources， cluster analysis， dominant cultivars

永州位于湖南省南部，區域內主要山脈有越城嶺—四明山系、都龐嶺—陽明山系、萌渚嶺—九嶷山系，海拔400 m以上的山嶺面積1.2萬km2，占總面積的50%。永州屬亞熱帶大陸性季風濕潤氣候，四季分明，平均氣溫17.6 ℃，平均降雨量1 200～1 900 mm，山區多于平崗區[1]，地理與氣候條件適合茶樹生長。

江華苦茶的研究源于20世紀60年代，已經在茶樹群體歸類、生化成分及適制性等方面有較全面的研究。陳亮等[2]從形態學特征將江華苦茶歸屬阿薩姆茶類;李丹等[3]從形態學、解剖學、細胞學、酶學、化學以及分子生物學方面研究江華苦茶種質資源的親緣關系，認為江華苦茶屬過渡類型茶樹，且親緣關系更接近于原始型;劉寶祥等[4]對江華苦茶的生化成分、適制性和適應性等研究表明，江華苦茶的茶多酚及其兒茶素類物質含量較高，制紅茶品質優良;李賽君等[5]從江華苦茶群體資源中選育出優質高咖啡堿紅茶新品種瀟湘紅21-1。劉寶祥等[4]發現江華苦茶原始群落主要分布在江華瑤族自治縣的大圩、碼市、二岔河、具江、湘江、河路口等鄉鎮。永州其他縣區同樣廣泛分布著野生茶資源，其生物學特征及群體歸類如何少有研究報道，且從永州地理及自然環境特點上看，適合野生茶的生長區域應更為廣闊。因此，對永州野生茶樹的具體分布情況和種群特征作進一步調查研究十分必要。

一、材料與方法

1. 調研方法

對永州3條山系內分布的原始型茶樹資源進行調研，并對野生茶資源集中分布區域的茶樹資源進行采樣分析。

調研方法依據中華人民共和國農業行業標準《農業野生植物調查技術規范》（NY/T 1669—2008），按4個步驟進行。第一步，文獻調研：綜合收集各種文獻資料，整理分析調查對象的分布、數量等歷史載錄情況，為走訪調查制定大致的行程路線。第二步，走訪調查：結合文獻資料收集數據，經初步篩查后，在調查區域內，通過走訪咨詢經驗豐富的群眾、技術人員、有關專家和農戶等，了解當地野生茶資源種類、分布、種群數量等相關信息。第三步，野外調查，收集樣本：按設計的調查路線，進行實地踏查。對現場感觀有一定特質的群體，采集標本作進一步鑒定。拍攝相關影像資料和GPS定位，完整載錄分布點數等數據信息。第四步，檢驗、檢測：對野外采集的茶標本進行形態學、化學、分子識別檢測，為確定茶樹種群及其相似性分析提供依據。

2. 生化成分分析

對收集到的野生茶樹鮮葉及利用其加工而成的紅茶樣品進行生化成分檢測，檢測指標為水浸出物、茶多酚、游離氨基酸和咖啡堿，檢測方法參考國家標準。

3. 簡單重復序列（SSR）分析

DNA提取使用Ezup柱式植物組織基因組DNA抽屜試劑盒，編號B518261，生工生物（上海）工程股份有限公司生產。

簡單重復序列分析具體步驟如下：取96孔板使用記號筆分別標明板名，制作SSR檢測表，并生成上機表。使用連續加樣器，吸取990 μL HIDI和10 μL LIZ500混合物，加入到96孔板，每孔10 μL。將96孔板置于平板離心機中，12 000 r/min離心15 s。對照檢測表，在96孔板對應的孔中加入1 μL樣品。將96孔板再次離心后置于PCR儀，引物信息和PCR反應條件分別如表1、表2。反應結束后立即將96孔板置于冰水混合物上急速冷卻后使用Genemapper軟件進行SSR分析。

二、結果與分析

1. 野生茶樹主要分布區

調查結果顯示，永州野生茶樹資源主要分布在寧遠、藍山等8個縣（區），各縣（區）具體分布地點如表3。因東安縣川巖、大盛等地野生茶分布面積不大，調查中僅對寧遠棉花坪排山坳村等7個縣（區）的8個野生茶資源集中分布地實地采樣進一步分析，具體采樣地點見表4。

2. 形態學特征

從調查結果看，野生茶樹大多分布在山谷沿岸山坡上，以間伐性林地、竹地為密集區，植株基本處于林木冠層之下。分布區域海拔在400～1 500 m之間，以海拔400～1 000 m區域為主。

各采集點野生茶樹植株形態特征如表5。因湖南省茶葉研究所在20世紀70年代就對江華縣的野生茶形態學、生理等方面做了較系統成熟的研究，本次江華采集的樣品只做SSR分析，形態、生理方面的數據參考前人的研究結果[3-4，6-8]。野生茶樹的植株為小喬木、中葉類種，樹高一般在5 m以下，主干直徑3～25 cm，3～4個一級分枝，葉片長9～14 cm、葉寬3～5 cm，葉片大多橢圓形、葉尖漸尖，葉脈9～12對。

3. 生化成分

各取樣茶樹秋季對夾葉的生化成分含量見表6。江華苦茶適制紅茶，成品茶以春茶為主，因此，取各采集點茶樹春季一芽二葉制成紅茶后檢測生化成分含量，檢測結果見表7。

4. SSR檢測結果

在道縣清塘鎮小塘村等6個野生茶密集分布區，每個區采集3個鮮葉樣品，對這18個樣品（表8）作SSR檢測及相似性歸集。

DNA分子圖譜（圖1）顯示，6個野生茶樣品的DNA表觀圖譜很相似。進一步做聚類相似性歸集，UPGMA聚類樹（圖2）顯示，各資源之間相似系數在0.45～0.65之間，符合江華苦茶群體各單株間存在較高的遺傳多樣性（相似系數0.44～0.84），各茶樹資源之間相似系數在0.45～0.65之間。18個野生茶樹資源總共可分為3大類，江華苦茶8號和道縣1號樣品分別聚為一類，江華苦茶9號與零陵10～12號、金洞13～15號和雙牌16～18號樣品聚為一類，江華苦茶7號與道縣2～3號和雙牌4～6號樣品聚為一類。在聚類結果中，不同類群的單株間也存在較為明顯的表型差異[9]，除道縣1號樣品外，其他永州野生茶資源都與江華苦茶群體親緣關系較近。

三、小結與討論

本研究對永州3條山系內分布的原始型茶樹資源進行調研，并對野生茶資源典型代表區域的茶樹資源進行采樣分析。植株形態特征及現場考察發現，所有永州野生茶資源均符合小喬木主要形態學特征。從采樣地點的地理信息和植株分布零散、無規律、密度稀少的特征看，所采樣本屬于地方原始種，不是人工種植品種。至于植株形態的一級分枝部位有較大差異的原因，可能在于采集點雙牌單江的茶樹資源因低部位分枝被截斷，在主干1 m處有明顯疤痕，所以現有分枝部位上移;金洞、道縣、寧遠的茶樹資源均存在被低位砍伐重生跡象，但主干分明;陽明山的茶樹資源地處高海拔，植株有明顯主干，但樹冠高度及寬幅受每年積雪覆蓋難以擴張。

江華苦茶作為湖南省4個地域特色茶樹品種之一，其茶多酚及兒茶素類物質含量較高，是適制紅茶的特異種質資源，制作的紅茶品質優良，香氣獨特，花蜜香濃郁，湯色紅濃，滋味濃醇，收斂性強，葉底紅亮[10-12]，本研究采用功夫紅茶加工工藝也得到了優質的野生紅茶產品。生化成分檢測結果顯示，來自不同縣（區）的茶樹資源其水浸出物、茶多酚、氨基酸、咖啡堿含量與江華苦茶樣品含量無明顯差異。

綜上所述，永州區域內分布的原始型茶樹資源可與江華苦茶原始型群體種聚為一類，親緣關系近。

參考文獻

[1] 李俊江， 鄭經緯. 永州年鑒[M]. 北京： 方志出版社， 2019： 52-53.

[2] 陳亮， 虞富蓮， 童啟慶. 關于茶組植物分類與演化的討論[J]. 茶葉科學， 2000， 20（2）： 89-94.

[3] 李丹， 羅軍武. 江華苦茶種質資源的親緣關系及在茶樹進化中的地位研究進展[J]. 湖南農業科學， 2011（1）： 10-12.

[4] 劉寶詳， 彭繼光， 劉湘鳴. 江華苦茶資源的發掘利用研究[J]. 茶葉通訊， 1981（6）： 24-27.

[5] 李賽君， 段繼華， 黃飛毅， 等. 優質高咖啡堿紅茶新品種——瀟湘紅21-1選育研究報告[J]. 茶葉通訊， 2018， 45（2）： 8-13.

[6] 劉振， 趙洋， 楊培迪， 等. 湖南省茶樹種質資源現狀及研究進展[J]. 茶葉通訊， 2011， 38（3）： 7-10， 18.

[7] 黎娜， 黃懷生， 鐘興剛， 等. 湖南地方特色茶樹資源江華苦茶研究進展[J]. 茶葉通訊， 2018， 45（3）： 3-7.

[8] 劉寶詳， 龍翔， 彭繼光， 等. 江華苦茶性狀分離與良種選育階段總結[C]. 長沙： 湖南省茶葉研究所， 1987： 42-46.

[9] 李丹. 江華苦茶種質資源的評價[D]. 長沙： 湖南農業大學， 2012.

[10] 陳國本， 唐明德. 江華苦茶主要化學成分含量的研究[J]. 茶葉通訊， 1987（1）： 23-29.

[11] 張貽禮. 湖南省茶樹品種資源簡介[J]. 作物品種資源， 1984（3）： 43.

[12] 楊宇宙. 紅茶飲料液態發酵關鍵化學成分及其調控研究[D]. 北京： 中國農業科學院， 2011.