新型冠狀病毒實驗室檢測質量管理研究

王迪

摘要 隨著疫情在全世界范圍內的傳播，新冠病毒的檢測對實驗室的環境、實驗室人員的能力都需要較高的要求。而實驗室作為新冠病毒感染標本最集中的區域，其特殊的操作流程需要綜合考慮生物安全性，同時保證實驗室的檢測質量與報告的及時性。

關鍵詞 新冠病毒;質量控制;生物安全

2019新型冠狀病毒（2019-nCoV/SARS-CoV-2，以下簡稱新冠病毒）屬于冠狀病毒科，β冠狀病毒屬，是一種單股正鏈RNA病毒。SARS-CoV-2對紫外線和熱敏感，在56℃加熱30分鐘即可失活，對乙醚、75%乙醇、氯、過氧乙酸和氯仿等脂溶性消毒劑敏感，但氯己定不能有效滅活病毒（1）。國家衛健委15日發布《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》，其中明確，新型冠狀病毒核酸檢測陽性為確診的首要標準（2）。由于新冠病毒為新發病毒，人群普遍易感，在核酸檢測過程中的各個環節中存在較多需要注意的問題。本人圍繞目前新冠病毒核酸檢測中的關鍵環節、生物安全、月度質控等進行實驗室評述。

1.新冠病毒核酸檢測方法及注意事項

1.1新型冠狀病毒感染的基因組是單股正鏈RNA，進行擴增時需要將RNA轉變成DNA，然后進行DNA 的擴增，即為RT-PCR，目前實時熒光RT-PCR是新冠病毒檢測使用最為普遍的方法。根據新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南（第六版）核酸檢測方法主要針對新型冠狀病毒基因組中開放讀碼框1ab和核殼蛋白N（3）。

1.2 實驗室新冠病毒核酸檢測可為新冠的診斷提供直接證據，更加需要嚴格要求，規范操作，注意實驗過程中的操作細節。從試劑的準備來說，從冰箱冷凍取出的試劑一定要混勻離心，如果試劑融化后沒有混勻，這時候取出的試劑不是均一的，會影響后面的擴增。用于新冠檢測的標本應盡快進行檢測，24小時內能檢測的標本可置于4℃保存，24小時內無法檢測的標本則應置于-70℃或以下保存（4）。

1.3 現核酸提取使用較多的方法為磁珠分離法盒離心柱分離法。本實驗室采用磁珠分離法提取核酸。核酸提取是檢測結果精密度的保證，提取使用的標本量和檢測過程應按照試劑說明書進行，因為這些因素都可能對核酸的提取成功與否產生影響。同時在提取儀器使用過程中應嚴格按照要求進行設備的清潔與維護，避免造成批次內和批次間的污染，并在提取過程中采用3個空白對照隨機放于樣本中參與提取過程以監控可能發生的環境污染。每次實驗后用75%的酒精濕巾擦拭提取儀的工作臺面，嚴禁用酒精擦拭機器的有機玻璃部分。

1.4 根據試劑說明書設置核酸擴增的實驗程序，確保時間、溫度、循環數等設置正確。定量PCR預混液跟核酸提取物一定要混勻，盡量避免發生光學混勻的現象，還有上機的反應體系里盡量不要有大的氣泡，有氣泡容易形成折射干擾熒光采集，可以采用八連管和96孔板離心機離心去除氣泡，最后，在加完試劑上機前，一定要檢查是否已經密封完全，防止試劑的蒸發，導致實驗室核酸的污染與實驗的失敗。

2.新型冠狀病毒實驗室的生物安全

2021年4月15日。中華人民共和國生物安全法正式生效。

隨著病毒檢測工作量與日俱增，實驗室是感染性標本最集中的區域，其操作環境具有一定的生物危害性，加強和普及生物安全只是對每一位實驗員都至關重要，進一步規范生物安全的管理，保障實驗室工作的正常進行。根據目前掌握的新冠病毒的生物學特點、流行病學特征、致病性、臨床表現等信息，該病原體暫按病原微生物危害程度分類中第二類病原微生物進行管理。

隨著對新冠病毒研究的深入，合理正確使用PPE可以減少實驗人員過度防護中帶來的不適和恐懼的心理，應該把更多的關注點放在實驗人員操作的合理性和規范化程度，以及對生物安全柜、核酸提取儀等實驗儀器的正確規范的使用來保證實驗室的生物安全性。

3.質量控制

實驗室工作質量的保證應覆蓋整個核酸檢測的流程的各個環節，室內質量控制和室間質量控制都是質量保證的重要部分。為了監測新冠核酸擴增檢測的分析中環節，即核酸的提取、擴增和產物檢測，實驗室應采取質量控制方法和步驟，為了監測更大范圍的實驗活動如結果分析和解釋，并客觀比較本實驗室檢測結果與其他實驗室的差異性，實驗室則需常態化參加室間質量評價/能力驗證（5）。

本實驗室采用室內質控品和日常臨床標本同時檢測的方法來判定批次檢測標本的檢測結果是否在控。每批檢測設立1份弱陽性質控品（第三方質控品），1份空白對照品（生理鹽水），1份陰性對照，弱陽性質控品與空白對照品放于樣本中間參與提取過程。弱陽性質控定為陽性，兩個陰性質控全部測定為陰性，視為在控，反之則為失控，應立即分析原因，必要時重新檢測樣品（6）。除此之外，也要考慮實驗室管理的多種要素，人員操作規范、機器日常維護和保養、標本的質量、使用耗材和試劑等都有可能出現問題，要全方位考慮失控原因。

4.結論

核酸檢測結果是確診新冠病毒的金標準，從事核酸檢測的實驗室必須有嚴格的實驗室管理體系，實驗室的質量保證要覆蓋到整個檢測的流程，從而保證實驗室檢測結果的準確性和及時性。

隨著國家研究團隊對新冠的深入研究，更靈敏的核酸檢測方法如數字PCR也開始應用于新冠病毒的核酸檢測，同時探索更加高效的實驗室診斷方法，有望在新冠病毒的實驗室檢測方面大大提高檢測效率，降低實驗室的時間成本與耗材成本。

參考文獻

[1]國家衛生健康委和中醫藥局 《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版修訂版）

[2]國家衛生健康委和中醫藥局 《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版修訂版）》

[3][4]新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南（第六版）

[5]國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制綜合組.關于進一步做好疫情期間新冠病毒檢測有關工作的通知.聯防聯控機制綜發（2020）152號

[6]中華人民共和國衛生健康委員會.國家衛生健康委辦公廳關于醫療機構開展新型冠狀病毒核酸檢測有關要求的通知.國衛辦醫函{2020}53號

（常州市武進區疾病預防控制中心 江蘇常州 213100）