小鼠痔瘡模型構建方法比較及其中藥治療效果評價

郭露寒 涂蓮茜 胡航軍 金衛華

摘要：比較了冰醋酸和巴豆油兩種試劑用于小鼠痔瘡模型構建的效果，用地龍商路藥膏對痔瘡模型小鼠進行治療。結果顯示使用99%濃度冰醋酸建立小鼠痔瘡模型，效果差異不大;商陸與地龍質量比為4： 1時，治療痔瘡模型小鼠效果最佳。

關鍵詞：小鼠痔瘡模型;商陸;地龍

痔瘡動物模型的構建方法中，醋酸法、巴豆油法、細菌法等，其中因醋酸法、巴豆油法操作簡單，被廣泛使用[1]。地龍在民間應用于治療痔瘡具有特效[2]，商陸別名“見腫消”，其性寒，味苦，有毒;有治毒瘡、通二便、消水腫的功效[3]。在此，對不同的小鼠痔瘡模型構建方法進行了比較，同時，采用商路和地龍熬制的藥膏對痔瘡模型小鼠進行了治療效果評估，目的是為痔瘡模型小鼠的構建和治療藥物開發提供一定的實驗依據。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SPF級昆明鼠，體重30g（±5）;華中農業大學提供，生產許可證號：SCXK（鄂）2015-0019。

1.1.2 實驗藥材 商陸、地龍。

1.2 實驗儀器和試劑

1.2.1 實驗儀器 粉碎機;電熱鼓風干燥箱;電子天平;旋轉蒸發器;集熱式恒溫加熱磁力攪拌器;體視鏡;循環水式多用真空泵;高速冷凍離心機;恒溫水浴鍋。

1.2.2 實驗試劑 HAc、鹽酸、無水乙醚、無水乙醇、十八醇、單硬脂酸甘油酯、液體石蠟、三乙醇胺、白凡士林、甘油、SDS、NaCl;巴豆油;馬應龍麝香痔瘡膏。

1.3 實驗方法

1.3.1 使用冰醋酸建小鼠痔瘡模型

體重規格30g（±5）的小白鼠，分4組（10只/組），分別用99%、75%、50%、25%濃度冰醋酸浸潤直徑為0.5cm的圓形濾紙片，貼于小鼠肛周，30秒后重復用藥一次，以生理鹽水作空白對照，48h后進行建模效果評價。

1.3.2 使用巴豆油建小鼠痔瘡模型

10mL巴豆油加無水乙醚90mL，攪拌均勻后，用棉簽蘸取，插入小鼠肛門約20mm處，保持30s，同時慢速捻轉5圈，建立小鼠肛門巴豆油腫脹模型。以生理鹽水作空白對照，6小時后檢查建模效果。

1.3.3 建模效果評價方法

以上述方式建模6組小鼠，將小鼠頸椎脫臼處死，切下其肛門直腸1.5cm左右，將所切部分稱濕重后，在烘干16h稱干重，計算小鼠肛門炎癥程度，其中干濕重均取平均值。

1.3.4 地龍商陸軟膏的制備

將商陸和地龍烘干至恒重后粉碎，稱取15g于燒杯中混合均勻，其中商陸與地龍的質量比分別為1：4、4：1、3：2、2：3、1：1，用85%的乙醇300mL加熱冷凝回流2h，抽濾濾液并減壓蒸餾濃縮至浸膏狀。用十八醇1.0g、單硬脂酸甘油酯0.5g、液體石蠟1.0g、三乙醇胺0.22g、白凡士林1.0g、SDS 0.2g、甘油1.0g、蒸餾水5.0g，加熱攪拌成藥膏基質，每克基質中分別加入0.0g、0.1g、0.5g、1.0g地龍商陸浸膏，研磨均勻后即得地龍商陸軟膏。

1.3.5痔瘡模型小鼠的治療

隨機選取以上由99%冰醋酸方法構建的小鼠痔瘡模型，分為8組（10只/組），其中5組用含不同質量比的商陸、地龍制成的軟膏進行肛周涂抹給藥，商陸與地龍的質量比為1：4的為治療組1，4：1的為治療組2，3：2為治療組3，2：3為治療組4，1：1為治療組5，以未加浸膏的軟膏基質作空白組，馬應龍痔瘡膏給藥組為陽性對照組，不給任何藥物治療組為模型組，1次給藥0.5g，1天2次，連續給藥7天后第8天觀察藥效。

1.3.6 痔瘡模型小鼠治療效果評價標準參考文獻：[4]。

2 結果

2.1 不同方法建模后炎癥程度結果

巴豆油和冰醋酸造模后，小鼠肛周炎癥明顯加重，計算結果顯示巴豆油和99%冰醋酸的促炎作用差異不大，但從干濕重數據上看，醋酸的促炎效果略強，隨著醋酸濃度下降，炎癥程度也相應下降。

2.2 地龍商陸軟膏對痔瘡小鼠的治療效果

1：1、3：2和4：1的痔瘡藥膏均有助于小鼠肛周潰爛愈合，商陸與地龍的質量比為4：1時效果最好，按該比例配制的痔瘡軟膏使肛周潰瘍第Ⅲ等級的小鼠痔瘡模型均愈合至Ⅱ等級，Ⅱ等級和Ⅰ等級的小鼠痔瘡模型基本治愈。

3結論

高濃度冰醋酸和巴豆油建模效果區別不大，可以根據實際情況采用不同建模方法。

商陸與地龍合用，當商陸的使用質量大于地龍時，能有效消除痔瘡模型小鼠的潰瘍和紅腫，具有良好的應用開發價值。

參考文獻：

[1]馬宗國，江南，余夢瑤，等. 痔瘡動物模型的研究進展[J]. 中國實驗動物學報，2010，18（5）：446-450.

[2]梁韶明，周春艷. 蛐蟮治療痔瘡72例[J]. 中國民間療法，2006，14（12）：63.

[3]國家藥典委員會 . 中國藥典 [M]. 一部 .2015.

[4]韓向暉，陸金根，曹永清，等.復黃片防治痔瘡的藥效學研究[J]. 上海中醫藥大學學報，2008，22（5）：59-62.

基金項目：武漢東湖學院2019年度“東湖未來之星”大學生科研基金項目;武漢東湖學院2019年校級大學生創新創業訓練計劃項目（xc2019079）.

作者簡介：金衛華（1976-），男，講師，碩士，研究方向：生物制藥。

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