清解顆粒制備工藝、質量標準及抗病毒的研究

摘 要：清解顆粒是由生石膏670g、金銀花500g、黃芪380g、桔梗365g、黃芩335g、板藍根320g、梔子310g、連翹300g、大青葉280g、甘草270g、生姜125g、蒲公英100g、杜仲（炮制、適量）、茯苓（適量）、桑白皮（少許）等十八味中藥制成，具有清熱解毒、補脾益氣、祛痰止咳、利水消腫、斂瘡生肌、安胎的功效。本方劑是在《中華人民共和國藥典》（2020年版）一部成方制劑和單味制劑“清熱解毒口服液”“清熱解毒片”基礎上，并結合民間驗方配伍而成。經可重復性試驗驗證：本新藥制劑——清解顆粒具有顯著的抗病毒作用、安全可靠性高、尚無明顯毒副作用、生產工藝便捷、儲存攜帶方便等優勢。

關鍵詞：新藥研發;清解顆粒;藥理活性;質量標準;抗病毒

一、緒論

通過本項課題研發制備的新藥制劑——清解顆粒是根據《中華人民共和國藥典》（2020年版）一部成方制劑和單味制劑“清熱解毒口服液”“清熱解毒片”基礎上，并結合民間驗方配伍而成，有效地節省了研發投入成本和研發周期，拓寬了新型中藥制劑研發的路徑，對發展、傳承和創新中醫藥事業具有里程碑作用。

二、處方中各主要藥物及關鍵輔料的研究概況

石膏（CaSO4·2H2O）經炮制后所得溶液具有明顯的解熱作用，且對正常體溫無降溫作用，試驗過程中發現，在用藥55～90mins時，對試驗用小白鼠、家兔和禽類（蛋雞、肉食鴨）體溫下降顯著、呼吸減緩至正常水平，有效提高了動物體內代謝酶的活性和免疫活性。

金銀花學名忍冬（拉丁文Lonicera japonica Thunb.）屬多年生半常綠纏繞灌木。它在中國大部分地區多有分布，日本和朝鮮亦有出產，最早在《名醫別錄》中記載，并被列為上品。其性寒，味甘，入肺、心、胃經，其主要含有綠原酸、木犀草素苷等化學成分，對上呼吸道感染致病病毒和細菌等有較強的抑制力，且具有抗炎、解熱、增強免疫力等作用。

黃芪為多年生草本豆科植物蒙古黃芪的根，始載于《神農本草經》作“黃耆”演變而來。其含多種黃酮類化學成分，黃芪多糖類物質是一種干擾素誘導劑，對結核菌感染有明顯對抗作用，其抗病毒機理：通過激發巨噬細胞和T細胞的功能，促使E環形成細胞數分裂增加，促生細胞因子，誘生白細胞介素，進而使內源性干擾素在動物體內產生，最終起到抗病毒的作用。

β—環糊精包合技術是利用β—環糊精自身特有的管狀結構及疏水性空腔包合藥物有效成分，同時具有延長藥物保質期、提高藥物溶解度、調節釋藥速度、規避部分不良氣味、減少刺激性和部分毒副作用等。

三、清解顆粒常規項（粒度、總灰分等）及溶化性研究

分別通過烘干法、甲苯法、減壓干燥法和氣相色譜法對本生產工藝所制備的連續三批次清解顆粒進行水分測定，通過以上方法測定的水分含量如下表：

在相對密閉的環境下貯存24個月后，本中藥顆粒制劑按照水分測定法（通則0832）測定，測得其水分含量4.9%，遠低于8.0%的國家藥典標準。在80℃下通過減壓干燥至恒重，測得其減失重量為1.53%，低于國家藥典規定的2.0%。

隨機抽取供試品10g，常溫條件下（溫度25℃，濕度45%）加入200ml22℃溫水，勻速攪拌邊觀察邊記錄，攪拌至210s時，完全溶解，溶液呈鉻黃色;當室溫為4℃時，隨機抽取供試品10g，加入200ml4℃水，均速攪拌180s靜置，當280s時，完全溶解，溶液仍呈鉻黃色。將以上溶液分別靜置6H、12H、24H、48H、72H后觀察，12H時溶液有輕微渾濁但無明顯析出物，過濾后所得粉末沉淀5.7mg，總灰分11.4μg。采用蒸發皿蒸發、濃縮過程中，有少許晶體粉末析出。

四、制劑分劑量的研究

（一）試驗材料及分析

1.試驗動物

（1）清潔級昆明小鼠，雄性，體重20g～22g，共50只。由山東大學趵突泉校區動物實驗中心提供和飼養。

（2）清潔級Wistar大鼠，雄性，體重190g～210g，共50只。由山東大學趵突泉校區動物實驗中心提供和飼養。

在常溫下飼養15d后，將以上試驗動物按10只每組分組，依次分為空白組、常規組、清熱解毒口服液組、清熱解毒片組和清解顆粒組進行試驗。

2.喂食及給藥方法

采用定時定量投食法進行飼養，給藥前12h進行病毒感染，每天一次灌胃法連續給藥，且給藥劑量相同，灌藥周期10d，每12小時檢測其排便、體重等數值，每天進行X線檢查，期末進行解剖化驗分析。其中常規組采用灌入阿司匹林溶液、空白組采用灌入生理鹽水。

試驗第3d率先出現自身免疫組別（清解顆粒組）

在《藥典》成方制劑、單味制劑、民間驗方基礎上配伍而成，根據藥效學試驗結果得出，通過以上清解顆粒工藝流程制備日服用（按照成人體重60Kg計算）生藥所得中藥顆粒45g，需生藥量133g。

（二）試驗儀器、試劑及色譜分析

色譜柱：InertSustain C18 5μm 250×4.6mm，乙腈為色譜純，水為注射用水，其他試劑為分析純;清解顆粒：濰坊永和藥業有限公司（濰坊市）企業技術中心提供。

流速：1ml/min柱溫：25℃檢測波長：276nm進樣量：5μl柱壓：107bar

對照品溶液的制備：依次取黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素四種對照品適量，精密測定，加入70%甲醇制成每1ml含黃芩苷300μg、黃芩素50μg、漢黃芩苷80μg、漢黃芩素20μg的混合溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本顆粒制劑裝量差異下的內容物0.1g，研磨至細粉，精密測定，置150ml錐形瓶內，加入70%甲醇50ml，密塞，稱定總重量，超聲處理（功率400W，頻率100kHz）15mins，于室溫靜置放冷，再稱定總重量，用70%甲醇補足其失重，搖勻，濾過，取續濾液，即得。從而得出如下圖譜：

從液相圖譜中可得如下評判數據表格：

五、結語

經如上工藝制備而得的中藥清解顆粒呈鉻黃色或土黃色、氣微、無異味（無焦灼味、無苦味），經實驗室實驗、臨床試驗和定向投放應用驗證：其具有顯著的抗病毒和激發自身免疫作用、安全可靠性高、重現性高、尚無明顯毒副作用，且生產工藝便捷、儲存攜帶方便等優點為其推廣應用占據了優勢。

參考文獻：

[1]仝欣.黃芪主要活性成分的藥理作用[J].時珍國醫國藥，2011，22（05）：1246-1249.

[2]馬興銘，丁劍冰主編.醫學免疫學[M].北京：清華大學出版社，2013.

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[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2020.

項目：濰坊市寒亭區應用技術研究與開發項目：清解顆粒在蛋雞抗病毒作用的應用研究（ZJ202004）

作者簡介：尹海德（1990— ），男，漢族，中共黨員，本科，工程師，山東省中藥原植物科普教育基地辦公室主任，山東省科技特派員，寒亭區高里街道青年工作共建委員會成員，濰坊永和藥業有限公司副總經理兼辦公室主任，（濰坊市企業）技術中心主任，“兩新”團組織書記，濰坊江源生物科技有限公司副總經理，濰坊市工程研究中心主任，山東工業技師學院機電工程系專業課講師。