高效液相色譜法測定保健食品中一新型他達拉非類似物的含量

楊麗蓉 趙海鵬,齊衍超 陳燕 楊釗

摘 要：目的：應用高效液相色譜法測定了保健食品中非法添加的一新型他達拉非類似物（3-羥丙基去甲基他達拉非）的含量。方法：采用島津Shim-pack GIST C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流動相A為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（60∶20∶20），流動相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（8∶46∶46），梯度洗脫，檢測波長230 nm。結果：3-羥丙基去甲基他達拉非濃度在11.53～92.24μg/mL范圍內線性關系良好（r=1.000 0），平均回收率（n=6）為99.08%。結論：建立了保健食品中3-羥丙基去甲基他達拉非含量測定的方法。

關鍵詞：3-羥丙基去甲基他達拉非;保健食品;HPLC

近年來，部分不法分子將磷酸二酯酶5抑制劑（Phosphodiesterase 5，PDE-5）類化合物非法用于提高免疫力、緩解體力疲勞的保健食品中，以獲取暴利[1]。這類非法添加的化學物質若長期使用，非但起不到強身健體效果，甚至會損害人體健康[2]。國家食品藥品監督管理局頒布的現行檢驗標準中涉及11種PDE-5選擇性抑制劑[3]，為規避檢查，不法生產者采取添加標準外的物質[4]。

本文采用HPLC-DAD進行緩解體力疲勞類保健食品中非法添加篩查時，發現有1個未知結構的他達拉非類似物，經過正相硅膠薄層色譜分離純化得到目標物后，用HPLC-MS/MS得到其相對分子質量和結構碎片，結合高分辨質譜、核磁共振氫譜數據及文獻資料[5]，經標準品對比確認，最終鑒定了目標物的結構為6-（benzo[d][1，3]dioxol-5-yl）-2-（3-hydroxypropyl）-2，3，6，7，12，12a-hexahydropyrazino[12：1，6]pyrido[3，4-b]indole-1，4-dione（結構式如圖1所示）。本實驗采用高效液相色譜法實現了對保健食品中該物質的定量檢測。

1 資料與方法

1.1 一般資料

高效液相色譜儀（Ultimate3000型，Thermo）;超聲波清洗器（KQ-700VDE型，昆山超聲儀器有限公司）;XSE-205DU電子天平（METTLER TOLEDO）。

甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），三乙胺（國藥集團化學試劑有限公司，99.0%），磷酸（國藥集團化學試劑有限公司，85.0%），3-羥丙基去甲基他達拉非對照品（加拿大TLC藥物標準品有限公司，商品名：Tadalafil Impurity 37，純度：99.4%）;保健食品（批號：20190425）為濰坊市奎文區市場監督管理局提供的樣品。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

Ultimate3000型高效液相色譜儀，色譜柱：島津Shim-pack GIST C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m）;進樣量：10 μL;柱溫：35 ℃;檢測波長：230 nm，二極管陣列檢測器;流動相A為磷酸三乙胺溶液（取三乙胺7 mL用水稀釋至1 000 mL，用磷酸調pH至2.8）-甲醇-乙腈（60∶20∶20），流動相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（8∶46∶46），梯度洗脫;1～12 min，流動相A為100%;25～30 min，流動相B為100%;31～36 min，流動相A為100%;流速：1.0 mL/min。

1.2.2 溶液的制備

（1）供試品溶液制備。精密稱取1 g供試品，置于50 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理15 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得。

（2）對照品溶液制備。精密稱取3-羥丙基去甲基他達拉非對照品9.28 mg（純度為99.4%），于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度為92.24 μg/mL的對照品溶液。

2 結果與分析

2.1 線性關系

精密吸取1.2.2（2）對照品溶液2.5 mL、5.0 mL、10.0 mL和15.0 mL，分別至20 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，按“1.2.1”色譜條件進行測定，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，計算得線性方程為Y=33.677X+14.4，r=1.000 0，表明3-羥丙基去甲基他達拉非濃度在11.53～92.24 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.2 精密度試驗

取同一供試品溶液，按“1.2.1”項下色譜條件下連續進樣6次，3-羥丙基去甲基他達拉非含量的RSD為0.3%。

2.3 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的同一批保健食品（20190425）6份各0.5 g，分別加入3-羥丙基去甲基他達拉非對照品溶液10 mL

（濃度為0.115 3 mg/mL）按1.2.2（1）制備供試品溶液，按“1.2.1”色譜條件進行測定，進行回收率考察，平均回收率為99.08%，RSD為1.10%（n=6），表明本方法測定3-羥丙基去甲基他達拉非準確率較高（表1）。

2.4 樣品含量測定

按1.2.2（1）方法制備供試品溶液，按“1.2.1”項條件進行測定，計算3-羥丙基去甲基他達拉非的含量，20190425號樣品含量為2.12 mg/g。

3 討論與結論

本實驗針對最新發現的一種新型他達拉非衍生物3-羥基丙基去甲基他達拉非，采用高效液相色譜法實現了對保健食品中該物質的定量檢測。該方法填補了現行標準對保健食品中非法添加該物質檢測的空白，為完善食品中非法添加化學藥品數據庫，保障人們飲食安全提供了技術支持。

參考文獻

[1]倪瓚，張崇生.UPLC-MS/MS法測定補腎抗疲勞中成藥及保健食品中非法添加的9種PDE-5抑制劑及其衍生物[J].中南藥學，2018，16（9）：1295-1299.

[2]蔡振世，徐端瓊，盧文斌.補腎壯陽類保健品中非法添加物檢測方法在國內的研究進展[J].海峽藥學，2016，28（7）：61-64.

[3]國家食品藥品監督管理局.藥品補充檢驗方法和檢驗項目批準件（批準件編號2009030）[EB/OL].（2009-12-07）[2021-03-17].

https：//www.doc88.com/p-9189096274401.html？r=1.

[4]黃芳，吳惠勤，黃曉蘭，等.高效液相色譜-串聯質譜法同時測定保健品及中成藥中非法添加的17種壯陽類化學藥[J].色譜，2016，34（3）：270-278.

[5]申國華，劉曉普.中成藥中非法添加他達拉非新型衍生物的檢測及結構鑒定[J].中國現代應用藥學，2020，37（2）：192-196.