超高效液相色譜法測(cè)定茶葉中的兒茶素

崔利輝 胡娜 李璐琦

摘 要：建立超高效液相色譜法測(cè)定茶葉中7種兒茶素類茶多酚，通過調(diào)整流動(dòng)相乙腈-0.1%甲酸溶液梯度，優(yōu)化了分離度，進(jìn)行了加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果表明，在10～100 μg/mL范圍內(nèi)，7種兒茶素的峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)不低于0.999，檢出限為6.1～97.8 mg/kg，加標(biāo)回收率93.1～96.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.7%～3.3%。該方法具有分析時(shí)間短，回收率、精密度高的優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜;兒茶素;茶葉

茶葉中富含多種營養(yǎng)成分[1-2]，有效成分的含量和種類對(duì)茶葉的品質(zhì)至關(guān)重要。茶葉中主要的抗氧化活性成分為茶多酚[3-4]，約占茶葉干重的20%～30%。除此之外，茶多酚還具有抗氧化、抗癌、抑菌、降壓和降脂[5]等保健功效。茶多酚主要包括黃酮類、黃酮醇、兒茶素類、黃青素類、酚酸類等物質(zhì)，其中兒茶素類含量最高，占茶多酚的60%～80%。兒茶素[6]包括兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、沒食子酸和咖啡因等。

茶多酚中兒茶素類化合物的檢測(cè)方法多為液相色譜法，

如GB/T 8313—2018，高效液相色檢測(cè)方法分析時(shí)間較長，試劑消耗量較大。本研究在此基礎(chǔ)上，利用超高效液相色譜法建立了同時(shí)測(cè)定7種兒茶素茶多酚定量方法，方法分析速度快，操作簡單，可用于茶葉中兒茶素類的測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

LC30A超高效液相色譜儀（日本島津公司）、MS3渦旋震蕩器（德國IKA公司）、Allegra 64R低溫高速離心機(jī)（美國貝克曼公司）、ME204電子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 材料與試劑

乙腈、甲醇（HPLC級(jí)，美國天地），甲酸（HPLC級(jí)，阿拉丁），水（實(shí)驗(yàn)室自制超純水）。對(duì)照品：沒食子酸、表沒食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯（純度>98%，北京壇墨質(zhì)檢）

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)物50 mg，混合后用甲醇溶解稀釋定容至50 mL，配制成濃度為1.00 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;分別取1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL和10.0 mL儲(chǔ)備液用甲醇稀釋定容至100 mL，配制成濃度為10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、80.00 μg/mL和100.0 μg/mL系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.2 樣品處理

稱取約0.2 g（0.000 1 g）茶葉樣品于10 mL離心管中，加入5 mL 70%甲醇，40 ℃下超聲提取30 min（每間隔10 min渦旋1 min），8 000 r/min離心5 min，重復(fù)提取1次，合并兩次溶液于10 mL容量瓶，混勻后吸取1.00 mL用水1∶1稀釋后過0.22 μm尼龍濾膜，液相色譜測(cè)定。

1.4 色譜條件

色譜柱：Shim-pack XR-ODS III（2 mm×75 mm，1.6 μm）;流速：0.5 mL/min;進(jìn)樣量5 μL，柱溫40 ℃;流動(dòng)相A：

0.1%甲酸乙腈溶液，流動(dòng)相B：0.1%甲酸水溶液;洗脫程序（A）：0～1 min，5%升至95%，4.5 min維持95%;7.0 min降至70%維持至8 min;檢測(cè)波長：280 nm;檢測(cè)器采集頻率：100 ms;外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 洗脫程序優(yōu)化

本文采用的超高效液相色譜法測(cè)定茶葉中兒茶素類和咖啡堿，色譜峰較窄，為獲得較高的重復(fù)性，設(shè)定的紫外檢測(cè)器檢測(cè)頻率為100 ms，進(jìn)樣量5 μL，以保證的每個(gè)峰的采集點(diǎn)數(shù)多于20個(gè)，且峰較窄，更有利于分離;乙腈和甲醇相比較，乙腈能有效的降低柱壓，得到更窄的色譜峰，響應(yīng)強(qiáng)度更高，有利于提升檢測(cè)靈敏度，能較好的分離7種化合物，分析時(shí)間小于8 min，色譜圖如圖1所示。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量限

按照確定的樣品預(yù)處理方法和液相檢測(cè)條件，依次測(cè)定濃度10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L、80.00 mg/L和100.0 mg/L，混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，得到線性回歸方程，線性關(guān)系良好。以20 mg/L濃度的混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行液相分析，以各目標(biāo)峰的信噪比（S/N≥3）分別確認(rèn)7種兒茶素的檢出限，如表1表示。

2.3 準(zhǔn)確度和精密度

選擇樣品測(cè)定6次，計(jì)算目標(biāo)物含量后，于0.2 g樣品中加入0.2 mL 100 mg/mL，按確定的方法進(jìn)行處理（n=6），計(jì)算加標(biāo)回收率和精密度，見表2。

3 結(jié)論

本研究基于超高效液相色譜法建立了一種處理簡單、快速、準(zhǔn)確定量分析茶葉中沒食子酸、表沒食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯7種茶多酚方法，與GB/T 8313—2018相比，優(yōu)化了色譜條件，提高了檢測(cè)靈敏度，縮短了檢測(cè)分析時(shí)間。

結(jié)果顯示，本方法可以在8 min內(nèi)完成7種茶多酚的檢測(cè)，具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，在10～100 mg/L范圍內(nèi)，信號(hào)響應(yīng)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)大于0.999，檢出限為6.1～97.8 mg/kg，加標(biāo)回收率93.1%～96.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.7～3.3%。

參考文獻(xiàn)

[1]王麗麗，林清霞，宋振碩，等.分光光度法測(cè)定茶葉中總黃酮含量[J].茶葉學(xué)報(bào)，2021，62（1）：1-6.

[2]王奕霏，王珊姍，陳豐，等.高效液相色譜法測(cè)定茶葉中有效成分含量的方法綜述[J].化工設(shè)計(jì)通訊，2020，46（6）：156-158.

[3]林清霞，王麗麗，楊軍國，等.基于DPPH法的茶葉兒茶素類抗氧化譜效關(guān)系研究[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2020，35（2）：210-216.

[4]白亞欣，侯彩云.幾種茶葉生化成分及其抗氧化活性分析[J].中國食物與營養(yǎng)，2020，26（1）：31-36.

[5]張建勇，王偉偉，王蔚，等.茶多酚保健及藥理功能的應(yīng)用[J].中國茶葉，2020，42（12）：9-15.

[6]王芬，裴會(huì)敏，陳志，等.茶多酚功能及代謝機(jī)理研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代食品，2020（14）：21-22.