甲狀腺乳頭狀癌中SphK1和CD56表達及其在頸部淋巴結轉移中的意義

李曉玲，蘇法銘，陳永華，劉美蓮，陳曉銘

甲狀腺癌作為內分泌系統和頭頸部常見的惡性腫瘤之一，其病理類型包括甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)、濾泡癌、髓樣癌和未分化癌，其中PTC最為常見，約占甲狀腺癌的89.4%[1]。盡管PTC預后相對較好，但其早期易出現頸部淋巴結轉移[2]，而淋巴結轉移和被膜侵襲等是導致PTC患者發生遠處轉移的重要危險因素[3]。近年，早期預測和診斷PTC分子標志物的研究受到越來越多學者的關注。尋找相關分子標志物可靠、可行的檢測手段，對PTC的診斷具有重要的臨床意義。本文采用免疫組化法探討SphK1和CD56在PTC組織中的表達及其在頸部淋巴結轉移中的意義，旨在為臨床早期診斷PTC及判斷其預后提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料收集2017年12月1日～2019年3月31日廣東醫科大學附屬醫院確診的PTC患者86例，其中無淋巴結轉移者41例，有淋巴結轉移者45例，由兩位高年資病理醫師復閱切片確診，同時收集各病例的臨床資料。所用SphK1兔抗人多克隆抗體、CD56兔抗人多克隆抗體購自武漢博士德生物公司，二抗及其他試劑均購自福州邁新公司。

1.2 方法標本均經10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋，常規切片，HE染色，光鏡下觀察，免疫組化染色采用MaxVision法。將磷酸鹽緩沖液為一抗作為陰性對照，比較上述分子標志物在有、無淋巴結轉移的PTC組和癌旁甲狀腺組織中的表達差異。

1.3 結果判斷免疫組化染色結果由兩位病理科醫師采用雙盲法獨立閱片。SphK1表達定位于胞質，CD56表達定位于胞膜和(或)胞質。根據染色強度評分：無陽性染色為0分，弱染色為1分，中等染色為2分，強染色為3分。根據腫瘤細胞陽性范圍評分：陽性細胞范圍<25%為1分，25%～49%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。將兩項評分相乘得出染色指數(staining index, SI)來判斷SphK1和CD56在切片標本組織中的表達水平。將SI=4～6中等陽性()及SI>6強陽性()定義為高表達。

2 結果

2.1 臨床特征86例PTC中，男性22例，女性64例，年齡21～63歲，平均(47.19±13.58)歲；無淋巴結轉移者41例，其中男性13例、女性28例，<45歲22例、≥45歲19例，腫瘤單發18例、多發23例，腫瘤直徑≥1 cm者26例、<1 cm者15例；有淋巴結轉移者45例，其中男性9例，女性36例，<45歲32例、≥45歲13例，腫瘤單發15例、多發30例，腫瘤直徑≥1 cm者34例、<1 cm者11例。兩組患者臨床特征差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.2 各組織中SphK1的表達SphK1在癌旁甲狀腺組織、無淋巴結轉移和有淋巴結轉移的PTC組織中的高表達率分別為20.93%、70.73%、68.89%。SphK1在無淋巴結轉移的PTC組織中的表達高于癌旁甲狀腺組織(P<0.05)；SphK1在有淋巴結轉移的PTC組織中的表達高于癌旁甲狀腺組織(P<0.05)；SphK1在有、無淋巴結轉移的PTC組織中的表達水平差異無統計學意義(P>0.05，表1，圖1)。

圖1 A.癌旁甲狀腺濾泡中SphK1呈陰性，MaxVision法；B.無淋巴結轉移PTC組織中SphK1呈陽性，定位于細胞質，MaxVision法；C.有淋巴結轉移的PTC組織中SphK1呈陽性，定位于細胞質，MaxVision法 圖2 A.PTC及其癌旁甲狀腺濾泡；B.無淋巴結轉移的PTC中CD56呈細胞膜/細胞質灶性弱陽性，其癌旁甲狀腺濾泡細胞膜/細胞質呈陽性，MaxVision法；C.有淋巴結轉移的PTC組織中CD56細胞膜/細胞質呈陰性/缺失，其癌旁甲狀腺濾泡細胞膜/細胞質呈陽性，MaxVision法

表1 各組織中SphK1的表達水平

2.3 各組織中CD56的表達CD56在癌旁組織、無淋巴結轉移和有淋巴結轉移PTC組織中的高表達率分別為65.12%、26.83%、33.33%。CD56在無淋巴結轉移PTC組織中的表達低于癌旁甲狀腺組織(P<0.05)；CD56在有淋巴結轉移PTC組織中的表達低于癌旁甲狀腺組織(P<0.05)；CD56在有、無淋巴結轉移的PTC組織中的表達水平差異無統計學意義(P>0.05，表2，圖2)。

表2 各組織中CD56的表達水平

2.4 PTC中SphK1和CD56表達與臨床病理特征的關系SphK1、CD56表達與患者年齡、性別、腫瘤數量及腫瘤大小均無相關性(P>0.05，表3)。

表3 PTC中SphK1和CD56表達與臨床病理特征的關系[n(%)]

3 討論

甲狀腺癌是內分泌系統和頭頸部常見的惡性腫瘤之一，在實際臨床工作中，診斷金標準仍有賴于光鏡下組織病理學改變。然而光鏡下部分形成假乳頭或伴有乳頭狀增生的結節性甲狀腺腫與PTC鑒別困難，易誤、漏診。隨著人們生活方式的改變，PTC有低齡化趨勢，雖然PTC相比其他惡性腫瘤的預后一般較好[4]，但發生淋巴結轉移的PTC患者預后不良。有研究表明年齡較小的PTC患者比年齡較大的PTC患者淋巴結轉移更具易感性[5]。尋找早期發現和診斷PTC及淋巴結轉移的方法，減少誤、漏診，尤其是年齡較小者，是延長患者預期壽命和改善疾病預后的關鍵。分子標志物在分子層面上參與疾病的發生、發展，而疾病在分子層面上的改變往往早于臨床表現，故分子標志物具有早期發現或預測疾病發生、發展的潛在價值。

SphK1作為鞘磷脂的活性代謝產物1-磷酸鞘氨醇(S1P)在體內生物合成過程中的限速酶，參與體內磷脂代謝、炎癥反應及心血管與神經系統疾病的病理生理過程[6]，其主要表達于正常脾臟、腦與胸腺中，與多種惡性腫瘤的發生、發展密切相關[7]。SphK1通過調控腫瘤細胞的增殖和凋亡而參與腫瘤的進程。Li等[8]采用免疫組化法檢測175例胃癌中SphK1的表達，其中115例表達較高，而相鄰的癌旁胃組織中表達較低或未檢測到。Kim等[9]通過免疫組化法檢測287例子宮頸癌組織和5例正常子宮頸組織中SphK1的表達，結果發現183例子宮頸癌組織中SphK1高表達，而正常子宮頸組織SphK1均陰性。目前有關SphK1在PTC組織中表達的報道較少，Do等[10]采用免疫組化EnVision法檢測SphK1的表達，結果發現81例正常甲狀腺組織均陰性，16例結節性甲狀腺腫組織中4例呈微弱陽性，而110例PTC組織中34例陽性較強，SphK1在PTC組織的表達水平高于結節性甲狀腺腫組織。本實驗中無淋巴結轉移和有淋巴結轉移的PTC組織中SphK1高表達率分別為70.73%和68.89%，癌旁甲狀腺組織為20.93%，經統計學分析提示有、無淋巴結轉移的PTC組織中SphK1的表達均高于癌旁甲狀腺組織，表明SphK1在PTC癌組織中表達水平增高。Do等[10]另對SphK1表達和PTC是否并發頸部淋巴結轉移的關系進行分析，結果發現SphK1的表達相較于年齡(≥43歲或<43歲)、性別、腫瘤單發或多發、腫瘤直徑(≥1.0 cm或<1.0 cm)、甲狀旁腺是否受累和BRAF基因是否突變來說，其是唯一能作為PTC并發頸部淋巴結轉移的獨立危險因素，SphK1在已并發頸部淋巴結轉移的PTC組織(45.3%)中的表達高于無頸部淋巴結轉移的PTC組織(0.9%)。孫雪玲等[11]研究亦發現SphK1可能參與PTC的發生、發展和淋巴結轉移，提示其可能成為甲狀腺腫瘤良、惡性診斷和早期淋巴結轉移風險評估的重要生物學因子。然而本組中SphK1在無淋巴結轉移PTC組織中的高表達率(70.73%)和有淋巴結轉移PTC組織(68.89%)相比，差異無統計學意義，提示SphK1表達與PTC是否并發頸部淋巴結轉移無確切相關性。

CD56作為免疫球蛋白超家族中的神經細胞黏附分子，表達于正常甲狀腺濾泡上皮及神經元、星形細胞和自然殺傷細胞，主要用于神經母細胞瘤、髓母細胞瘤和視網膜母細胞瘤等腫瘤的診斷。但其在甲狀腺腫瘤診斷中的應用報道不一。多個研究[12-14]提示，甲狀腺良性病變中CD56陽性率更高，而在PTC中常呈灶性弱表達或表達缺失，在癌旁正常組織中則呈高表達。陳英等[15]認為CD56在診斷PTC中可發揮重要作用，特別是濾泡亞型PTC與其他濾泡性腫瘤鑒別。許超等[16]報道PTC中CD56表達減弱及缺失與病理特征的惡化、遠處轉移的發生密切相關。劉芳芳等[17]收集719例非高危型甲狀腺微小乳頭狀癌(papillary thyroid microcarcinoma, PTMC)，分析臨床病理因素與淋巴結癌轉移之間的關系，并與PTC進行比較，采用免疫組化法檢測4種腫瘤標志物CK19、HMBE-1、Galectin-3和CD56的表達，結果顯示CD56的陽性率分別為25.6%(85/232)和20.0%(70/350)，提示腫瘤標志物CD56單獨表達不能作為否定PTMC和PTC的診斷依據。張哲等[18]提示CK19、MC陽性聯合CD56、TPO陰性可提高PTC診斷的準確性和特異性。本實驗檢測CD56在PTC中的表達并進行分析，結果顯示PTC無淋巴結轉移組和PTC有淋巴結轉移組CD56的高表達率分別為26.83%和33.33%，明顯低于癌旁良性甲狀腺組織(65.12%)，提示CD56在PTC中低表達，但在有、無淋巴結轉移PTC兩組中的表達差異無統計學意義。

綜上，本實驗結果提示SphK1過表達和CD56弱表達或缺失可提高PTC診斷的準確性，對減少其漏診及誤診有一定幫助，但兩者對PTC是否并發頸部淋巴結轉移并無明確診斷或預測價值。