酶提取法分離制備魚皮中膠原蛋白的研究進展

王曉靜 潘一峰 林潔虹 黃玉萍

摘 要：魚皮中富含膠原蛋白，當作廢棄物處理造成資源浪費和環境污染。魚皮中膠原蛋白的提取逐漸引起人們的關注。基于近年來在魚皮中膠原蛋白的分離提取研究現狀，本文分析總結了酶提取法分離制備魚皮中膠原蛋白的研究成果，以期為魚皮中膠原蛋白的提取提供參考。

關鍵詞：魚皮;膠原蛋白;酶提取法

膠原蛋白（簡稱膠原）是一種纖維性蛋白質類高分子物質，棒狀結構，白色、不透明、無支鏈，主要以纖維的形式廣泛存在于動物的皮膚、骨骼、軟骨、韌帶、血管和肌腱中[1]。水產膠原蛋白因其獨特的三螺旋結構而具有多重功效，可潤滑關節、保護血管、增強免疫力等，廣泛應用于生物醫藥、化妝品、食品添加劑等領域。

20世紀70年代，有學者發現可從魚皮、魚骨等部位提取膠原蛋白[2]。我國是水產養殖大國，在水產品加工過程中，不可避免的會產生大量的魚皮、魚骨、魚鱗等廢棄物，直接丟棄，容易引起環境污染、造成資源的浪費。目前膠原蛋白的提取方法主要有酶提取法、酸提取法、堿提取法、熱水提取法、中性鹽提取法等，提取方法不同，得到的膠原蛋白結構特征和功能性質也會有所不同[3]。其中酶提取法因其反應條件溫和、反應時間短、提取的膠原蛋白三螺旋結構保持性好、純度高等頗受歡迎。本文主要整理了近幾年研究者們利用酶提取法分離制備魚皮中膠原蛋白的研究成果，以期為魚皮中膠原蛋白的提取提供研究參考。

1 酶提取法分離制備魚皮中的膠原蛋白

酶提取法是目前魚皮中膠原蛋白提取最常用的方法，使用的酶有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、無花果蛋白酶、堿性蛋白酶和復合蛋白酶等[4]。

張建忠等[5]分別采用酸提取法和胃蛋白酶提取法提取草魚皮中膠原蛋白，并對膠原蛋白進行了紫外、紅外和電泳分析，結果表明兩種方法得到的膠原蛋白純度高，以干基計重，膠原蛋白的提取率分別為8%和18.6%，胃蛋白酶提取明顯具有較強的優勢。王晴等[6]利用醋酸和胃蛋白酶分別提取羅非魚魚皮中的膠原蛋白，研究結果顯示兩種膠原蛋白結構相似，但酶溶性蛋膠原蛋白的提取率、溶解性、保濕性、吸油性等明顯優于酸溶性膠原蛋白。基于此研究，王晴等[7]繼續優化羅非魚魚皮膠原蛋白酶法提取工藝，通過單因素正交試驗確定酶解時間15 h，酶解溫度50 ℃，料液比1︰70，pH為3，胃蛋白酶提取膠原蛋白的影響因素的主次順序為：酶解時間>酶解溫度>料液比>pH。

魚皮材料不相同，使用的蛋白酶不同，提取得到的膠原蛋白類型也不同。馬儷等[8]采用酸性蛋白酶通過響應面優化提取鱈魚魚皮中的膠原蛋白的條件。結果表明響應面法提取率為27.53%，遠遠高于單因素實驗的最高提取率5.23%，最佳提取條件為水解時間10.43 h，水解溫度16.32 ℃，酶濃度0.054%，電泳測定提取的膠原蛋白，確定其純度較高，α1和α2鏈的分子量分別為113 kDa和110 kDa。

2 輔助酶提取法分離制備魚皮中的膠原蛋白

酶法提取率相對較高，但存在水解不徹底的問題。因此，學者們紛紛開始嘗試以其他手段輔助酶提取法，解決單一的酶提取法存在水解不徹底的問題。超聲波提取法具有節能環保、破壞性低、污染小、可有效混合等優點，頗受歡迎[9]。王金梅等[10]對超聲波輔助胃蛋白酶提取草魚皮中膠原蛋白的工藝進行研究，變量是超聲功率、超聲時間和酶解時間，通過響應面法確定最佳提取工藝條件為超聲功率310 W，超聲時間10 min，酶解時間29 h，膠原蛋白的提取率高達68.67%，遠高于傳統的酶提取法。凝膠電泳圖和傅里葉紅外光譜圖表征結果說明超聲波處理草魚皮不會破壞膠原蛋白的三螺旋結構，為超聲波在膠原蛋白的提取工藝中的應用提供科學參考，也為膠原蛋白的工業化生產奠定基礎。公維潔等[11]將超聲波輔助技術應用到馬面魚皮膠原蛋白的提取中，采用響應面法優化提取工藝，最佳提取條件為：乙酸濃度0.5 mol/L，料液比值30 mL/g，加酶量2 000 U/g，超聲波功率700 W，超聲10 min，提取率達到15.31%，遠高于傳統酶法的提取率（3.89%），明顯縮短了提取時間。王正云等[9]利用超聲波技術輔助胰蛋白酶提取青魚魚皮中的膠原蛋白，探究超聲波功率及其處理時間、酶解時間、酶解溫度、酶添加量、pH值等因素對提取率的影響。正交試驗結果表明，提取膠原蛋白的影響因素主次順序為：酶解溫度>超聲波處理時間>酶添加量>pH。當酶添加量為100 U/g、pH7.5，酶解溫度40 ℃、超聲波處理50 min后，膠原蛋白的提取率最高，達到45.3%。

3 結語

與酸提取法、堿提取法等方法相比，酶提取法相對溫和、安全，受到越來越多學者的青睞。魚的品種不同，使用酶的種類有所不同，提取率差別較大，且膠原蛋白的熱穩定性差，對酶解溫度要求苛刻。此時需要探究輔助其他技術手段，在保護膠原蛋白特殊結構的同時，可有效提高膠原蛋白的提取率和純度，為其工業化生產探索最佳工藝路線。除了超聲波輔助技術，未來研究趨勢還可以考慮在魚皮前處理階段輔助特殊技術，如任國艷等[12]在魚皮的前處理階段使用高密度CO2處理魚皮，提取率增加18.85%。

參考文獻

[1]張志勝，齊文聰，韓晴，等.鱈魚皮膠原蛋白的提取與應用[J].食品安全質量檢測學報，2016，7（8）：3228-3233.

[2]于穎，肖剛，陳晚華.魚皮膠原蛋白的提取工藝及特性研究[J].藥物研發，2019，40（3）：70-73.

[3]林麗，薛為長，麥篤萍，等.魚皮膠原蛋白的提取于檢測研究綜述[J].內江科技，2019（7）：94-95.

[4]周瑞，陳舜勝.魚皮膠原蛋白提取方法研究及其在食品中的應用[J].上海農業學報，2021，40（3）：129-135.

[5]張建忠，安辛欣，王林，等.草魚皮酸溶性和酶榮幸膠原蛋白的提取及性質[J].食品科學，2006，27（12）：556-559.

[6]王晴，曹穩根，錢玉梅，等.酸法和酶法提取羅非魚魚皮膠原蛋白特性分析[J].赤峰學院學報（自然科學版），2019，35（9）：90-92.

[7]王晴，錢玉梅，李紅俠，等.羅非魚魚皮膠原蛋白酶法提取工藝及特性研究[J].攀枝花學院學報，2020，37（5）：6-10.

[8]馬儷，王曉丹，程賀，等.響應面法優化酶法提取鱈魚皮中膠原蛋白條件[J].中國釀造，2010（9）：83-85.

[9]王正云，蔣慧亮.超聲波輔助酶法提取青魚魚皮膠原蛋白工藝[J].食品研究與開發，2020，41（5）：133-137.

[10]王金梅，包建強.超聲波輔助酶法提取草魚皮膠原蛋白及其純化[J].食品工業科技，2016，37（18）：236-240.

[11]公維潔，卓先勤，許環浪.響應面優化超聲波輔助提取馬面魚皮膠原蛋白工藝研究[J].食品工業，2018，39（7）：92-96.

[12]任國艷，宋婭，康懷彬，等.高密度CO2處理提取鯢皮膠原蛋白的工藝優化[J].食品科學，2017，38（16）：198-204.