西青果顆粒在多種溶出條件下溶出曲線測定及溶出機制研究

宋韶錦 鞏騰飛 孟慶山 張羽

摘 要：目的：測定西青果顆粒在不同溶出條件下溶出曲線并分析其溶出機制。方法：采用HPLC法檢測沒食子酸含量，漿法、小杯法作為溶出測定方法，測定西青果顆粒在不同溶出介質（蒸餾水、0.1 mol/L鹽酸溶液）、攪拌速度

（50 r/min、75 r/min、100 r/min）的溶出曲線，Origin軟件分析西青果顆粒的溶出機制。結果：HPLC法測定西青果顆粒溶出方法準確穩定;漿法測定西青果顆粒在不同溶出條件下溶出曲線相似，在10 min累計溶出率均高于80%;小杯法測定西青果顆粒溶出曲線對一級動力學擬合相關性系數均高于0.99。結論：西青果顆粒溶出迅速，滿足顆粒劑的制劑要求，溶出機制為Fick擴散。

關鍵詞：西青果顆粒;沒食子酸;溶出曲線;溶出機制

西青果又稱“藏青果”，為使君子科植物訶子（Terminalia chebula Retz.）的干燥幼果，在中醫臨床中作為清熱解毒藥用于復方配伍治療肺炎、喉炎、扁桃體炎、咽炎、細菌性痢疾等癥[1]。西青果中鞣質與酚酸類成分含量豐富，主要化學成分為訶子酸、訶黎勒酸及沒食子酸等[2-3]。西青果顆粒是由西青果水提醇沉物經制劑化制備的中成藥顆粒，在臨床用于治療咽喉干痛、慢性扁桃體炎等疾病[4]。進行中藥顆粒制劑的體外溶出度評價研究是有效的制劑質量控制手段，有利于指導制劑的處方優化與制劑質量標準的建立[5]。本文旨在比較不同溶出度測試方法對西青果顆粒溶出行為評價的影響差異，考察西青果顆粒在不同溶出條件下的溶出行為適應性及進行溶出機制分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

島津LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）;Hypersil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）;MS105DU電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）;RCZ-8B溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）;UV-2550紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

甲醇（色譜純，默克）;磷酸（天津市科密歐化學試劑有限公司）;水為自制重蒸水;其他試劑未經說明均為分析純。沒食子酸標準品（中國藥品食品檢定研究所，批號110831-201605，含量90.8%）;西青果顆粒（廣西天天樂藥業股份有限公司，15 g×10袋）。

1.2 沒食子酸含量分析方法建立

1.2.1 色譜條件

Hypersil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;SPD-10A型二極管陣列檢測器;柱溫25 ℃;流動相為以甲醇-0.5%磷酸水溶液（15∶85）;流速0.8 mL/min;檢測波長215 nm，進樣量20 μL。

1.2.2 供試品溶液制備

取樣品10袋，研細，精密稱定一定量的細粉約0.3 g，平行兩份于具塞錐形瓶中，分別以50%甲醇、水和0.1 mol/L鹽酸為溶劑，精密加入溶劑25 mL后稱定重量，超聲處理20 min（功率250 W，頻率40 kHz），超聲的過程中要不斷的變換瓶子的相對位置，以便于超聲均勻，再用對應的溶劑補足失重后，搖勻，用0.45 μm的濾膜過濾，采用HPLC法測定。

1.2.3 對照品溶液制備

精密稱定沒食子酸對照品11.36 mg，置于100 mL容量瓶，50%甲醇溶液溶解定容，微孔濾膜（0.45 μm）過濾，制備得濃度為103.15 μg/mL沒食子酸對照品原始液，備用。

1.2.4 標準曲線制備

50%甲醇溶液對濃度為103.15 μg/mL沒食子酸對照品原始液進行梯度稀釋，得到濃度為1.031 5 μg/mL、10.315 μg/mL、20.63 μg/mL、41.26 μg/mL、61.89 μg/mL、82.52 μg/mL和103.15 μg/mL的系列濃度溶液。HPLC進樣20 μL測定后以峰面積（Y）對濃度（x）擬合回歸方程。

1.2.5 精密度考察

移取沒食子酸對照品原始液，重復進樣6次，記錄峰面積。

1.2.6 穩定性考察

移取新配制的沒食子酸對照品溶液，于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h和48 h時間點分別進樣測定。

1.2.7 重復性考察

分別以50%甲醇溶液、蒸餾水、0.1 mol/L鹽酸溶液為溶劑溶解定容沒食子酸對照品，所得樣品溶液分別于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h和48 h時間點分別進樣測定。

1.2.8 加樣回收率考察

分別精密量取1.2.2項3種溶劑的樣品溶液1 mL，置于50 mL容量瓶中，分別加入1.2.3項下沒食子酸對照品溶液1 mL，再分別用相對應的溶劑稀釋定容至刻線，0.45 μm的濾膜過濾，HPLC法測定。

1.3 溶出度測定

1.3.1 漿法

西青果顆粒1袋，采用2015年版《中國藥典》附錄溶出度測定第二法漿法，溶出介質體積為800 mL，于不同設置轉速下在（37±0.5）℃下進行西青果顆粒劑的溶出測定。在設置取樣時間點（10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min、70 min、80 min、90 min、100 min、110 min和120 min）利用自動取樣系統取樣5 mL，并及時補充等溫等量溶出介質。為保證取樣準確性與自動取樣系統的運行穩定性，取樣針配制0.45 μm濾頭以防止取樣未溶解細小顆粒。

1.3.2 小杯法

基于小杯法測定西青果顆粒溶出的測試方法除溶出介質體積設置為200 mL利用自動取樣系統取樣1 mL，并及時補充等溫等量溶出介質，向取樣管中精密加4 mL的溶出介質混勻制成樣品，其他參數與1.3.1項下漿法參數一致。

1.4 西青果顆粒在不同測試條件下溶出曲線繪制

西青果顆粒1袋，參照1.3.1項下漿法與1.3.2項下小杯法溶出度測定方法，在不同溶出介質（蒸餾水、0.1 mol/L鹽酸溶液）和攪拌速度（50 r/min、75 r/min、100 r/min）組合條件下進行西青果顆粒的溶出測試，溶出樣品經HPLC進行含量測定，繪制溶出曲線。

1.5 西青果顆粒溶出機制分析

利用Origin數據分析軟件對西青果顆粒小杯法測定溶出曲線分別進行零級動力學、一級動力學、Higuchi方程以及Korsmeyer- peppas方程動力學方程擬合，尋找最佳描述和預測西青果顆粒溶出行為的數學模型。

2 結果與分析

2.1 沒食子酸含量分析方法建立

沒食子酸回歸方程為Y=105 934x-1 465.3，相關系數R2=0.999 9，結果表明沒食子酸在1.0315～103.15 μg/mL范圍內線性關系良好。精密度考察峰面積的RSD為0.45%（n=6），表明方法精密度良好。穩定性考察沒食子酸峰面積的RSD為1.49%（n=7），表明沒食子酸對照品溶液在

48 h內穩定。

重復性考察（n=7）和加樣回收率（n=3）的結果見表1，通過數據可以表明，沒食子酸在不同溶液之間的重復性良好，且加樣回收率符合定量測定要求。

2.2 不同溶劑的含量結果比對

通過數據比較可以得出，不同溶劑之間含量測定的比對結果顯示，蒸餾水、50%甲醇溶液、0.1 mol/L鹽酸溶液的含量測定結果偏差較小。實驗數據結果見表2。

2.3 西青果顆粒在不同測試條件下溶出曲線繪制

由表3、表4可知，西青果顆粒漿法測定，在不同溶出介質、不同攪拌速度的組合測試條件下，在10 min的累計溶出率均高于80%，溶出迅速，符合顆粒劑快速溶出的制劑要求。以漿法作為測試方法，以蒸餾水作為溶出介質時，西青果顆粒在攪拌速度分別為50 r/min、75 r/min、100 r/min條件下，10 min時的累計溶出率分別為84.44%、91.63%、91.06%，溶出達平臺期時間分別為20 min、10 min、10 min，說明攪拌速度可影響溶出藥物的擴散速率從而影響制劑溶出。溶出曲線測定時攪拌速度的設定應模擬體內生理環境。為了在體外制劑研究時更好控制制劑質量，確保制劑在多種體內環境均有較好溶出適應性，應考察制劑在低攪拌速度（50 r/min）下的溶出曲線，以預測制劑在患者體虛狀態胃腸蠕動功能低下時的溶出性能。西青果顆粒在50 r/min攪拌條件下在蒸餾水和0.1 mol/L鹽酸溶液兩種溶出介質中均可快速溶出，顆粒在不同攪拌速度下的溶出適應性較好。漿法測定西青果顆粒溶出時，在不同攪拌條件下，顆粒劑在蒸餾水和0.1 mol/L鹽酸溶液中的溶出曲線較為相似，顆粒劑在不同溶出介質中的溶出適應性較好。

小杯法與漿法相比，是在更小體積的溶出介質中進行的固體制劑溶出測試。以小杯法作為測試方法測定西青果顆粒的溶出曲線，在相同溶出介質中，攪拌速度影響西青果顆粒劑的溶出，這與漿法測定結果一致。當溶出介質相同，所選擇的轉速不同時，其相同時間段內表現出來的累計溶出率之間存在著一定的差異，具體數據可以參見表2。以上結果說明西青果顆粒在小杯法中的溶出慢于漿法測定，其原因可能為由于溶出介質體積差異導致的剪切速率與沒食子酸擴散速率的差異。

2.4 西青果顆粒溶出機制分析

擬合結果表明，西青果顆粒在各種溶出條件下小杯法測定溶出曲線對一級動力學的擬合相關性系數均高于0.99。在低攪拌速度（50 r/min）對一級動力學方程與Higuchi方程擬合較好，擬合相關系數均高于0.99，表明西青果顆粒的溶出機制為Fick擴散，顆粒溶蝕對其溶出存在一定影響。在高攪拌速度（100 r/min）對一級動力學方程擬合較好，Higuchi方程擬合相關性降低，西青果顆粒溶出機制只為Fick擴散。其原因是由于在低攪拌速度下顆粒的溶蝕過程影響藥物溶出，在高攪拌速度下顆粒快速溶出，顆粒快速完成溶蝕過程。結果見表5。

3 討論

依托HPLC法，結合沒食子酸在不同溶液之間溶出度的含量變化，有利于進一步分析中成藥之間化學成分的溶出行為[6]。進行中藥固體制劑的體外溶出研究是制劑質量控制與預測體內釋藥行為的有效手段，溶出條件的設置應模擬制劑在體內釋藥部位的生理環境。制劑在多種溶出環境中均能保持穩定可控的溶出特性是保證制劑在體內多種生理環境中良好溶出并保證生物利用度的前提[7]。不同的溶出測定方法會影響制劑的溶出曲線，小杯法在少量固體制劑的溶出測定中可提高溶出液的濃度以保證樣品溶液滿足檢測限要求[8]。進行溶出曲線的溶出動力學分析可預測制劑在體內的溶出特性，并對溶出曲線進行精確控制。

參考文獻

[1]林款，茹琴，梁征，等.西青果多酚的提取純化及其抗氧化活性分析[J].食品研究與開發，2018，39（5）：70-76.

[2]安碩，黃麗珍，李蘇穎.正交設計優化西青果中沒食子酸的提取工藝[J].河南醫學高等專科學校學報，2017，29（5）：

500-502.

[3]王奉悅，李汝卓，汪敏等.西青果總鞣質中沒食子酸和沒食子酸乙酯含量測定及抗菌作用研究[J].吉林醫藥學院學報，2017，38（4）：243-246.

[4]孫鵬.青果?西青果及訶子的鑒別與臨床應用[J].臨床醫藥文獻雜志，2017，4（54）：10673-10676.

[5]張嬙，黎翩，孫陽恩，等.中藥固體制劑溶出行為研究進展[J].中國新藥雜志，2019，28（20）：2498-2501.

[6]孫國祥.中藥整體質量標準體系構建和一致性評價步驟專題[J].中南藥學，2019，17（3）：321-331.

[7]王麗君，陳雅琴.法羅培南鈉顆粒劑的制備及溶出方法學研究[J].遼寧化工，2014，43（3）：246-247.

[8]郭懷宇，蔣家龍，陳金鋒，等.中藥固體制劑溶出度檢測方法研究進展[J].廣州化工，2017，45（11）：24-32.