HPLC-DAD變波長梯度洗脫同時測定果蔬汁飲料中的9種食品添加劑

韓秋珍 黃日梅 陳燕敏

摘 要：建立一種高效液相色譜-二極管陣列檢測法（HPLC-DAD）變波長梯度洗脫同時測定果蔬汁飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍9種食品添加劑的檢測方法。樣品用水提取，采用

C18色譜柱分離，以甲醇和0.02 mol/L乙酸銨溶液進行梯度洗脫，DAD變波長進行檢測，出峰時間定性，外標法定量。該方法9種食品添加劑在0.0～50 μg/mL具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 5，回收率為91.5%～107%，相對標準偏差為1.8%～6.8%。檢出限為0.008 3～0.029 mg/kg，定量限為0.025～0.087 mg/kg。該方法前處理簡單，色譜分離效果好，結(jié)果精確，適合果蔬汁飲料中的9種食品添加劑的同時測定。

關(guān)鍵詞：HPLC-DAD;果蔬汁飲料;食品添加劑;變波長;梯度洗脫

食品添加劑是指為改善食品品質(zhì)和色、香、味以及為防腐、保鮮和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或者天然物質(zhì)[1]，可改善和提高食品的感官指標，保持食品的營養(yǎng)價值，增加花色品種，調(diào)整營養(yǎng)結(jié)構(gòu)，延長保質(zhì)期，改進加工條件[2]。合成著色劑、甜味劑、防腐劑是果蔬汁飲料中最常使用的食品添加劑，對促進果蔬汁飲料的產(chǎn)品質(zhì)量提升發(fā)揮了重要的作用[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，過量攝入甜味劑、防腐劑、合成著色劑會對腸、肝、腎及神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)造成損害[4-6]。國家標準《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760―2014）[1]中對食品添加劑使用量有著嚴格的控制。

從2020年公布的國家食品安全監(jiān)督抽檢情況[7-8]可見，超范圍、超限量使用食品添加劑仍然存在且存在聯(lián)合使用超量問題。但目前檢測這些食品添加劑的標準不盡相同[9-12]，逐一檢測耗時耗力，發(fā)生食品安全問題時不能及時提供技術(shù)支持，造成監(jiān)管部門把控食品安全風險的時效性減弱[4]。

因此，本方法擬建立一種針對果蔬汁飲料中常進行檢測的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍9種食品添加劑采用最佳吸收波長變波長梯度洗脫同時進行測定的方法，有利于降本增效，為食品安全監(jiān)管提供方法參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀，配備二極管陣列檢測器。

甲醇（GR）、乙酸銨（AR）、實驗用水等。安賽蜜、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍標準儲備液，質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，室溫避光保存，購于海岸鴻蒙標準物質(zhì)技術(shù)有限公司;苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標準品，0～8 ℃避光保存，購于BePure公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液配制

準確稱取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標準品0.01 g（精確至0.000 1 g）至10 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL的標準儲備液。分別吸取9種食品添加劑標準儲備液10 μL、50 μL、100 μL、200 μL和500 μL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，即得1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL和50 μg/mL的混合標準工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

樣品充分混勻，準確稱取樣品5 g至25 mL比色管中，加約15 mL水，渦旋混勻，超聲30 min，冷卻后調(diào)pH至6～7，用水定容至25 mL。用0.45 μm水相濾膜過濾，濾液備用。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：C18（4.6×250 mm，5 μm）;流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μL;流動相：B相為甲醇，D相為0.02 mol/L乙酸銨溶液，梯度進行洗脫，檢測波長和洗脫條件見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理方法的改進

果蔬汁飲料基質(zhì)相對簡單，不含蛋白和脂肪，故可以不用聚酰胺粉吸附洗脫合成著色劑，不用沉淀蛋白和去除脂肪的步驟進行食品添加劑的檢測，簡化了前處理過程，大大提高了工作效率。根據(jù)檢測方法的原理，最終確定前處理方法為稱取樣品5 g至25 mL比色管中，加約15 mL水，渦旋混勻，超聲30 min，冷卻后調(diào)pH至6～7，用水定容至25 mL。用

0.45 μm水相濾膜過濾，濾液備用。

2.2 檢測波長和梯度洗脫的選擇

采用DAD對9種食品添加劑混合標準工作溶液采集210～700 nm光譜圖，掃描其最佳吸收波長，經(jīng)過反復(fù)試驗，最終確定變波長條件見表1。梯度洗脫條件在標準的基礎(chǔ)上考慮各個添加劑在流動相中的溶解度及色譜柱的分離效果，采用甲醇和20 mmol/L乙酸銨為流動相，反復(fù)試驗不同梯度條件洗脫的分離效果，最終確定采用表1的梯度洗脫程序能實現(xiàn)9種食品添加劑的較好分離，混合標準工作溶液色譜圖見圖1。

2.3 線性范圍及檢出限、定量限

將9種食品添加劑混合標準工作溶液按1.2.3中色譜條件上機測定，以質(zhì)量濃度x為橫坐標，峰面積y為縱坐標繪制標準曲線，標準曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表2。

2.4 方法的加標回收率和精密度

稱取已知含量的樣品5 g，在樣品中加入標準溶液，按1.2.2進行樣品處理，按上述1.2.3中色譜條件上機測定，結(jié)果見表3。回收率范圍為91.5%～107%，相對標準偏差范圍為1.8%～6.8%。

2.5 實際果蔬汁飲料樣品的測定

用本實驗方法對市售的果蔬汁飲料進行8個樣品測定分析，每個樣品重復(fù)測定2次。檢測結(jié)果見表4。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，8個樣品中同時檢出安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、檸檬黃、胭脂紅、日落黃6種食品添加劑的樣品有1個，同時檢出安賽蜜、山梨酸、檸檬黃、日落黃、亮藍5種食品添加劑的樣品有1個，同時檢出安賽蜜、山梨酸、檸檬黃、日落黃4種食品添加劑的樣品有1個，只檢出安賽蜜的樣品有1個，只檢出苯甲酸的樣品有3個。根據(jù)《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）[1]中對食品添加劑的使用限量標準，所檢出樣品的添加劑含量均符合國家標準要求。

3 結(jié)論

本研究建立了一種HPLC-DAD變波長梯度洗脫同時測定果蔬汁飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍9種食品添加劑的檢測方法。針對果蔬汁飲料的特點，優(yōu)化了前處理方法，采用變波長梯度洗脫實現(xiàn)了9種食品添加劑的同時測定。結(jié)果表明，該方法前處理簡單，色譜分離效果好，結(jié)果精確，適合果蔬汁飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和亮藍9種食品添加劑的同時測定，很大程度上提高了工作效率，降低了實驗成本，為食品安全監(jiān)管提供了有力支持和有效保障。

參考文獻

[1]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品添加劑使用標準：GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社，2015.

[2]周德祥.正確認識食品添加劑的作用及危害[J].現(xiàn)代食品，2017（3）：51-53.

[3]陳旋，王夢格.食品添加劑在飲料中的應(yīng)用及危害淺談[J].農(nóng)村經(jīng)濟與科技，2019（14）：32.

[4]解楠.高效液相色譜法同時測定飲料和果凍中9種食品添加劑[J].食品安全檢測學(xué)報，2021，12（4）：1524-1530.

[5]毛偉峰，宋雁.食品中常見甜味劑使用方面存在的主要問題及危害[J].食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報，2018，36（6）：9-14.

[6]趙俊.食品添加劑危害知多少[J].中國防偽報道，2017（7）：98-99.

[7]食品安全抽檢監(jiān)測司.市場監(jiān)管總局關(guān)于2020年上半年食品安全監(jiān)督抽檢情況分析的通告[EB/OL].（2020-07-30）[2021-06-02].http：//gkml.samr.gov.cn/nsjg/spcjs/202007/t20200730_320364.html.

[8]食品安全抽檢監(jiān)測司.市場監(jiān)管總局關(guān)于2020年第三季度食品安全監(jiān)督抽檢情況分析的通告[EB/OL].（2020-11-16）[2021-06-02].http：//gkml.samr.gov.cn/nsjg/spcjs/202011/t20201116_323570.html.

[9]衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定： GB/T 5009.140—2003[S].北京：中國標準出版社，2004.

[10]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定：GB/T 5009.28—2016[S].北京：中國標準出版

社，2017.

[11]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中脫氫乙酸的測定：GB 5009.121—2016[S].北京：中國標準出版社，2017.

[12]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定：GB 5009.35—2016[S].北京：中國標準出版社，2017.