結直腸癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達水平及臨床意義

鄧江，黎相照

1.深圳市龍崗區第二人民醫院病理科，廣東 深圳 518112；2.南方醫科大學南方醫院病理科，廣東 廣州 510515

結直腸癌為消化系統的常見惡性腫瘤[1]，近年來結直腸癌的發病呈年輕化趨勢，且發病率不斷增加，嚴重危及患者生命與健康。最新研究報道，早期結直腸癌的生存率顯著高于晚期患者[2]。因此早發現、早治療對結直腸癌患者預后有非常重要的影響。熱休克因子1 (heat shock factor 1，HSF1)是機體重要的轉錄因子，可調節腫瘤間質細胞生成，參與惡性腫瘤發生[3]。臨床研究已證實HSF1在多種腫瘤中呈高表達，是評價腫瘤發展和惡化的重要指標[4]。氨基末端激酶(amino terminal kinase，c-Jun)屬原癌基因，其可參與細胞增殖及分化，從而參與腫瘤的發生及發展。二氫嘧啶脫氫酶(dihydropyrimidine dehydrogenase，DPD)為嘧啶分解代謝酶，其在結直腸癌的中表達能夠影響化療效果[5]。本研究主要探討結直腸癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集南方醫科大學南方醫院2018 年1 月至2019 年12 月 收治的114 例結直腸癌患者的臨床資料。納入標準[6]：經病理檢查確診為結直腸癌；手術前未經放化療等治療；病例資料完整。排除標準：其他惡性腫瘤病史者；肝腎功能嚴重不全者；卡氏評分低于70分，預計生存時間＜3個月者；嚴重惡液質者；結直腸癌復發者。114例結直腸癌患者中男性77 例，女性37 例；年齡38～71 歲，平均(55.71±4.43)歲；腫瘤部位：直腸54例，左半結腸33例，右半結腸27例；腫瘤大小：瘤體直徑＜5 cm 45例，≥5 cm 69例；腫瘤區域淋巴結遠處轉移(TNM)：Ⅰ+Ⅱ期56 例，Ⅲ+Ⅳ期58 例；分化程度：低分化41 例，中、高分化73 例；淋巴結轉移：陰性56 例，陽性58 例。均進行為期1 年的隨訪，記錄期間死亡例數。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 鼠抗人HSF1 單克隆抗體，批號：20170512，廠家：亞諾法生技股份有限公司；鼠抗人c-jun 單克隆抗體，批號：20170903，廠家：京中杉生物技術有限公司；鼠抗人p-c-jun 單克隆抗體，批號：20170718，廠家：京中杉生物技術有限公司；鼠抗人DPD 單克隆抗體，批號：20171006，廠家：廣州萬孚生物技術股份有限公；通用免疫組織化學SP 試劑盒，批號：20170419，廠家：北京中世普為生物科技有限公司；DAB 免疫組織化學顯色試劑盒，批號：20171105，廠家：北京酷來搏科技有限公司。

1.2.2 檢測方法 收集結直腸癌患者癌組織(腫瘤組織均取自無壞死區域、腫瘤生長良好區域)和癌旁組織(采集距離腫瘤≥5 cm 區域)，選用免疫組化染色依據SP 試劑盒，采用免疫組織化學-鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結染色法，檢測HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達情況。標本經10%中性福爾馬林液固定，常規自動病理組織脫水機脫水透明浸蠟。組織經石蠟包埋后，按3 μm 層厚連續切片，取硅化玻片撈片并70℃高溫烤片，常規脫蠟水洗，用高壓鍋高壓修復抗原，免疫組化染色依據SP 試劑盒說明書進行。

1.3 結果判讀 HSF1、c-Jun、p-c-Jun陽性判定于細胞核內出現棕褐色或者棕黃色顆粒，DPD陽性判定于細胞質內棕褐色或者棕黃色顆粒。染色強度評分：棕褐色、棕黃色、淺黃色、無色分別統計為3、2、1、0分。隨機抽取每張切片組織的5個高倍鏡視野(×400)，各計數500個細胞，陽性細胞百分比為其平均值，＞76%、51%～75%、26%～50%、6%～25%、＜5%分別統計為4、3、2、1、0分。最后評分取染色強度評分與陽性細胞百分比乘積，≥4分表示陽性，0分表示陰性[7]。

1.4 統計學方法 應用SPSS20.0 統計軟件進行數據分析，計量資料符合正態分布，以均數±標準差()表示，計數資料比較采用χ2檢驗，采用Log-rank 檢驗分析并比較生存情況，采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線圖，相關性分析采用Spearman 分析，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 結直腸癌組織與癌旁組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達水平比較 HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD 在結直腸癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 結直腸癌組織與癌旁組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達水平比較[例(%)]

2.2 不同臨床病理特征結直腸癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達水平比較 HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD陽性表達率與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無明顯相關(P＞0.05)；Ⅲ+Ⅳ期、低分化、淋巴結轉移陽性者HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 陽性表達率明顯高于Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、淋巴結轉移陰性者，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2、表3。

表2 不同臨床病理特征結直腸癌患者的HSF1、c-Jun表達水平比較[例(%)]

表3 不同臨床病理特征結直腸癌患者的p-c-Jun及DPD表達水平比較[例(%)]

2.3 不同預后結直腸癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達水平比較 HSF1 陽性者1 年生存率低于HSF1 陰性者，c-Jun 陽性者1 年生存率低于c-Jun 陰性者，p-c-Jun 陽性者1 年生存率低于p-c-Jun 陰性者，DPD 陽性者1 年生存率低于DPD 陰性者，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表4，生存曲線見圖1。

表4 不同預后結直腸癌患者的HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 表達水平比較(%)

圖1 結直腸癌患者的生存曲線分析

2.4 結直腸癌患者HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD表達的相關性 結直腸癌患者HSF1 與c-Jun、p-c-Jun及DPD 均呈正相關(r=0.391、0.415、0.376，P＜0.05)；c-Jun 與p-c-Jun 及DPD 呈正相關(r=0.427、0.402，P＜0.05)；p-c-Jun與DPD呈正相關(r=0.428，P＜0.05)。

3 討論

結直腸癌為危害人類生命安全的主要惡性腫瘤之一，盡管目前結直腸癌的治療方式不斷改善，但患者5年生存率仍較低。目前有關結直腸癌的預后評價缺乏靈敏指標，主要從病理組織類型、腫瘤臨床分期等方面進行判定，有一定局限性[8]。

腫瘤的發生發展為多因素的復雜過程。近年來研究報道，HSF 能夠參與及穩定腫瘤的異常增殖反應，在腫瘤發生發展中有重要作用[9]。胡娟等[10]研究發現，HSF 一方面可誘導抑癌基因及癌基因產物的表達，另一方面HSF的高表達能夠提高腫瘤細胞抵抗凋亡的作用，促進其無限增殖。臨床研究報道，HSF1在多種腫瘤疾病中呈陽性表達，且和腫瘤預后及分期有一定關系[11]。另有研究發現，HSF1 和腫瘤耐藥有一定關系，HSF1 在多種耐藥腫瘤和細胞株中出現過表達[12]。本研究中，結直腸癌患者癌組織中HSF1陽性表達率顯著高于癌旁組織，提示HSF1 能夠參與結直腸癌的發生。浸潤轉移為惡性腫瘤的主要生物學特征，也是影響患者治療效果及預后的主要因素。本研究發現，臨床分期較晚、有淋巴結轉移及低分化型結直腸癌中的HSF1陽性表達率分別高于無淋巴結轉移及中、高分化型者，提示隨著結直腸癌淋巴結的轉移和分化程度的降低，HSF1的表達相應增加，進一步提示HSF1 能夠參與結直腸癌的進展。另外本研究中，HSF1 陽性表達者的生存率低于HSF1 陰性表達者，表明HSF1 表達能夠評估結直腸癌患者預后情況。宋旭等[13]研究也認為，HSF1高表達和前列腺癌發生、發展有明顯相關性，且陽性表達者的預后較差。

抑癌基因及癌基因表達失衡為腫瘤發生發展的基礎，原癌基因是參與細胞增殖及凋亡的基因，機體正常狀態下呈低表達，其過度表達能夠導致細胞發生惡性轉化，引起腫瘤發生。c-Jun 為機體常見原癌基因，c-Jun 受到刺激后可立即表達并生成轉錄因子，調節其他基因轉錄和表達，影響正常細胞生長、發育及分化，導致細胞發生惡性轉化[14]。本研究中，c-Jun、p-c-Jun可在結直腸癌及癌旁組織中表達，且結直腸癌組織中的陽性表達率更高，提示c-Jun、p-c-Jun 在結直腸癌組織組織中高表達，其異常表達能夠導致細胞周期異常，引起腫瘤發生。隨著結直腸癌臨床分期及組織分化程度的加重，c-Jun、p-c-Jun陽性率隨之上升，且與淋巴結轉移有明顯相關性，提示c-Jun、p-c-Jun 異常表達可能和腫瘤的轉移、侵襲性有關。考慮與c-Jun能夠避免腫瘤細胞發生凋亡及生長監控，抑制異常增殖，刺激結直腸癌組織的發生發展。同時本研究顯示，c-Jun、p-c-Jun 在結直腸癌組織中陽性表達者的預后相對較差。

有研究發現，DPD高表達的惡性腫瘤患者的腫瘤分期越晚，更容易發生轉移[15]。又有研究報道，DPD活性缺乏能夠影響5-FU在體內的清除，延長半衰期，增加細胞毒性反應[16]。本研究結果顯示，DPD在結直腸癌組織中的陽性表達率顯著上調，且隨著腫瘤惡性程度的加重而增加，和腫瘤的惡性生物學行為有明顯相關性，表明DPD 能夠促進細胞惡性增殖，參與結直腸癌發生發展。且DPD 陰性表達的結直腸癌患者預后優于DPD 陽性表達者，考慮與DPD 活性較高能夠加快5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)在機體的代謝，降低5-FU的抗癌效應，影響腫瘤組織對相關藥物的吸收效果，從而影響預后。有關研究發現，HSF1能夠和c-Jun 中HSE 結合，促進c-Jun 的轉錄翻譯[17]。另有研究表明，HSF1能夠和p-c-Jun結合，產生新型的異源二聚體，并可刺激DPD 轉錄，增加機體DPD 活性，導致5-FU 耐藥[18]。本研究發現，結直腸癌組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun 及DPD 的表達均有一定相關性，提示此類指標能夠共同參與結直腸癌的發生發展。

綜上所述，結直腸癌組織中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表達明顯上調，能夠反映腫瘤的臨床生物學行為及預后情況。但本研究隨訪時間較短，HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD對結直腸癌患者預后的影響，有待更多大規模的長期研究進一步論證和分析。