Geminin表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的關(guān)系

王孝安 陳一楠 程傳東 計(jì) 穎

膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，復(fù)發(fā)率高，病死率高，預(yù)后差[1]。Geminin表達(dá)失衡參與多種腫瘤病理過程[2～4]。研究報(bào)道Geminin 表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病理分級(jí)相關(guān)[5]。本文探討Geminin 表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選取2014 年1 月～2017 年1 月手術(shù)切除經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本90 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理證實(shí)為膠質(zhì)瘤；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往腦部手術(shù)史；往腦卒中、顱腦損傷病史，合并其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病；術(shù)前放、化療史；術(shù)后隨訪期因膠質(zhì)瘤以外原因死亡。同時(shí)取50 例同期因顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)中切除非腫瘤腦組織作為對(duì)照組。

1.2 Geminin mRNA 水平的測(cè)定 采用熒光定量PCR法測(cè)定Geminin mRNA表達(dá)量。使用Trizol試劑提取總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板配置PCR反應(yīng)體系并以U6作為內(nèi)參進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。Geminin 上游引物5'-TCGAAGCTAAGCGCTAGCG-3'，下游引物5'-TCGAACGTAATCGATGCT- 3'；U6 上 游 引 物5'- TCGAACGTAAGCTGAGCTG-3'，下游引物5'-TCGAACGTAGCAAGCTGAG-3'。PCR 反應(yīng)條件為：94 ℃變性15 s、60 ℃退火30 s，45個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。以2-△△Ct法進(jìn)行量化分析。根據(jù)腦膠質(zhì)瘤組織Geminin mRNA 表達(dá)水平中位數(shù)分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。

1.3 術(shù)后隨訪 隨訪時(shí)間截止2020年1月1日或者病人死亡，包括門診、電話隨訪等，記錄生存情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析；計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；采用多因素Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析死亡的影響因素；采用Kaplan-Meier曲線分析Geminin mRNA表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病人生存期的關(guān)系；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2 結(jié)果

2.1 腦膠質(zhì)瘤組織Geminin mRNA 的表達(dá)水平 腦膠質(zhì)瘤組織Geminin mRNA 表達(dá)水平（1.19±0.35）明顯高于非腫瘤腦組織[（0.87±0.20）；P＜0.05]。

2.2 隨訪結(jié)果90 例膠質(zhì)瘤病人隨訪32～55 個(gè)月，中位隨訪時(shí)間41 個(gè)月。隨訪期間，死亡80 例，存活10例。

2.3 腦膠質(zhì)瘤術(shù)后死亡的影響因素 單因素分析結(jié)果顯示，性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、術(shù)前KPS評(píng)分與病人死亡無明顯關(guān)系（P＞0.05，表1），而WHO分級(jí)、腫瘤切除程度、術(shù)后治療方法、Geminin mRNA表達(dá)水平與病人死亡有關(guān)（P＜0.05）。多因素Cox 比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示，WHO分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)、腫瘤未全切除、Geminin mRNA高表達(dá)是腦膠質(zhì)瘤術(shù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05，表2），而術(shù)后放化療是腦膠質(zhì)瘤病人術(shù)后存活的保護(hù)性因素（P＜0.05，表2）。

表1 本文90例膠質(zhì)瘤術(shù)后死亡危險(xiǎn)因素的單因素分析（例）

表2 本文90例膠質(zhì)瘤術(shù)后死亡危險(xiǎn)因素的多因素Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析（例）

2.4 Geminin mRNA 表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤病人生存期的關(guān)系Kaplan-Meier 生存曲線顯示，低表達(dá)組中位生存期較高表達(dá)組明顯延長(zhǎng)（P＜0.05，圖1）。

圖1 Kaplan-Meier 曲線分析Geminin mRNA 表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病人生存期的關(guān)系

3討論

膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展是復(fù)雜的多因素過程，可能涉及多個(gè)基因的表達(dá)變化，因此，探討對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)展及治療結(jié)局具有重要作用的分子及其作用機(jī)制具有重要的臨床意義。本文結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤組織Geminin 呈高表達(dá)，是病人術(shù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；Geminin高表達(dá)的膠質(zhì)瘤病人生存期明顯縮短。

Geminin 對(duì)細(xì)胞周期時(shí)相中重要事件具有調(diào)節(jié)作用，如對(duì)DNA 復(fù)制、中心體復(fù)制以及神經(jīng)發(fā)育的調(diào)控[2，6]。在正常細(xì)胞中，Geminin 與Cdt1 聯(lián)合調(diào)控細(xì)胞周期[7，8]。研究發(fā)現(xiàn)抑制Geminin 表達(dá)，可通過DNA 損傷介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖[9]。Arbi等[3]發(fā)現(xiàn)Geminin是細(xì)胞器中心體擴(kuò)增的主要調(diào)控因子，推測(cè)Geminin 通過擴(kuò)增細(xì)胞中心體，促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖。田薇等[5]報(bào)道Geminin 在腦膠質(zhì)瘤組織中異常表達(dá)，與病理級(jí)別有關(guān)。本文結(jié)果顯示Geminin可作為腦膠質(zhì)瘤手術(shù)預(yù)后評(píng)估指標(biāo)。

總之，腦膠質(zhì)瘤組織Geminin 呈高表達(dá)，是影響病人生存結(jié)局的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這提示Geminin 可能是腦膠質(zhì)瘤發(fā)生機(jī)制探索及治療的新靶點(diǎn)之一。