系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人血清人附睪分泌蛋白4和抗雙鏈DNA抗體水平與病情活動(dòng)性的相關(guān)性

馬玲，余靜

作者單位：德陽市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，四川德陽618000

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種累及機(jī)體多系統(tǒng)的自身免疫性疾病，臨床常伴隨產(chǎn)生大量自身抗體。目前，SLE發(fā)病原因尚未完全闡明，臨床上多認(rèn)為與感染、內(nèi)分泌、免疫異常等因素有關(guān)，雖然上述因素對(duì)評(píng)估SLE疾病活動(dòng)度具有重要作用，但仍有部分SLE病人無法正確判斷其疾病活動(dòng)程度。因此，應(yīng)繼續(xù)探討與SLE病人發(fā)病相關(guān)因子，以提高判斷SLE病人疾病活動(dòng)度準(zhǔn)確性。人附睪蛋白4（Human epididymis protein 4，HE4）是一種蛋白酶抑制劑，其功能與自然免疫性有關(guān)。而抗雙鏈DNA抗體（anti-dsDNA，抗dsDNA抗體）是SLE臨床檢測常用的血清標(biāo)志物，與SLE疾病活動(dòng)性密切相關(guān)。鑒于此，本研究通過檢測SLE病人血清HE4、抗dsDNA抗體水平等臨床指標(biāo)，分析SLE病人血清HE4和抗dsDNA抗體水平與疾病活動(dòng)性關(guān)系，并探討血清HE4、抗dsDNA抗體水平區(qū)分SLE病人非活動(dòng)期及活動(dòng)期的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2018年12月在德陽市人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科進(jìn)行診治的74例SLE病人作為受試對(duì)象，其中女性68例，男性6例；年齡（32.98±10.75）歲，范圍為20～45歲。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。入選標(biāo)準(zhǔn)：①均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)對(duì)SLE修訂的分類標(biāo)準(zhǔn)；②臨床資料完整；③均為初次發(fā)病；④均自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他自身免疫性疾病者；②女性妊娠或哺乳期；③近3個(gè)月內(nèi)未服用過糖皮質(zhì)激素類藥物；④嚴(yán)重感染者。按照SLE病情活動(dòng)指數(shù)（SLE disease activity index，SLEDAI）評(píng)分將74例SLE病人分為非活動(dòng)期組35例（SLEDAI＜10分）和活動(dòng)期組39例（SLEDAI≥10分）。非活動(dòng)期組有女性32例、男性3例，年齡（32.01±10.46）歲，范圍為20～44歲；活動(dòng)期組有女性36例、男性3例，年齡（33.12±10.67）歲，范圍為20～45歲。另選取同期在該院進(jìn)行體檢的57例健康者作為對(duì)照組，其中女性52例，男性5例；年齡（33.57±

11.24

）歲，范圍為20～46歲。上述三組受試者性別、年齡比較，均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1

血清標(biāo)本采集所有受試者均于入院第2天清晨空腹抽血（靜脈血），每人3 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清后保存于-80℃超低溫冰箱備用。

1.2.2

血清HE4、抗dsDNA抗體水平檢測采用酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）雙抗體夾心法檢測血清HE4、抗dsDNA抗體水平，HE4試劑盒購自上海心語生物科技有限公司，抗dsDNA抗體試劑盒購自北京華夏遠(yuǎn)洋科技有限公司，具體步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。血清抗dsDNA抗體起始稀釋倍數(shù)為1∶10，本研究以＜1∶10作為陰性（

n

=32），≥1∶10作為陽性（

n

=42）。

1.2.3

其他臨床指標(biāo)檢測采用免疫散射比濁法檢測補(bǔ)體（C、C）、免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）水平，試劑盒均購自德國西門子公司；采用間接免疫熒光法檢測抗核抗體（antinuclear antibody，ANA），試劑盒由歐蒙醫(yī)學(xué)診斷（中國）有限公司提供，其起始稀釋倍數(shù)為1∶100，本研究中低滴度為1∶10≤血清ANA≤1∶1 000，高滴度為血清ANA＞1∶1 000；采用比色法檢測24 h尿蛋白定量。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與SLE病人血清HE4、抗dsDNA抗體水平比較

SLE病人血清HE4、抗dsDNA抗體水平分別為（83.44±26.53）pmol/L、（1.53±0.49）μg/L，均顯著高于對(duì)照組的（39.16±8.25）pmol/L、（0.42±0.13）μg/L（

t

=12.147、16.644，均

P

＜0.001）。

2.2 SLE病人血清HE4水平與抗dsDNA抗體關(guān)系

SLE病人抗dsDNA抗體陽性血清HE4水平為（99.34±30.69）pmol/L，明顯高于抗dsDNA抗體陰性者的（58.16±17.52）pmol/L（

t

=6.788，

P

＜0.001），且SLE病人血清HE4與抗dsDNA抗體水平呈正相關(guān)（

r

=0.698，

P

＜0.001）。

2.3 SLE病人血清HE4水平與病情活動(dòng)性關(guān)系

SLE活動(dòng)期病人SLEDAI評(píng)分、血清HE4水平分別為（14.95±4.07）分、（95.76±29.55）pmol/L，均明顯高于非活動(dòng)期的（6.52±2.13）分、（60.34±18.12）pmol/L（

t

=10.974、6.130，均

P

＜0.001），且SLE病人血清HE4水平與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)（

r

=0.587，

P

＜0.001）。

2.4 SLE病人血清HE4水平與其他臨床指標(biāo)相關(guān)性

SLE病人血清HE4水平與補(bǔ)體（C、C）水平呈負(fù)相關(guān)（

P

＜0.05），與IgA、IgG、IgM、ANA滴度及24 h尿蛋白定量均呈正相關(guān)（

P

＜0.05）。見表1。

表1 SLE病人血清HE4水平與其他臨床指標(biāo)相關(guān)性

2.5 ROC曲線分析血清HE4、抗dsDNA抗體水平區(qū)分非活動(dòng)期及活動(dòng)期SLE病人價(jià)值

血清HE4水平區(qū)分非活動(dòng)期及活動(dòng)期SLE病人的曲線下面積為0.912（95%

CI

：0.848～0.977，

P

＜0.001），最佳截?cái)嘀禐?0.15 pmol/L，靈敏度為85.00%，特異度為90.00%；血清抗dsDNA抗體水平區(qū)分非活動(dòng)期及活動(dòng)期SLE病人的曲線下面積為0.904（95%

CI

：0.836～0.973，

P

＜0.001），最佳截?cái)嘀禐?.39 μg/L，靈敏度為75.00%，特異度高達(dá)97.50%。見圖1。

圖1 血清人附睪蛋白4（HE4）、抗雙鏈DNA抗體（抗dsDNA抗體）水平區(qū)分非活動(dòng)期及活動(dòng)期系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人的ROC曲線

3 討論

SLE是一種免疫介導(dǎo)引起機(jī)體多組織器官損傷的慢性炎癥性疾病，多發(fā)于青年女性。SLE發(fā)病原因涉及環(huán)境、遺傳和免疫紊亂等多個(gè)環(huán)節(jié)，在多種因素相互作用下可使機(jī)體產(chǎn)生許多自身抗體，同時(shí)在補(bǔ)體參與下可破壞細(xì)胞、組織，從而導(dǎo)致機(jī)體多臟器損傷。目前，SLE常用臨床檢測指標(biāo)包括ANA滴度、補(bǔ)體C、C等，監(jiān)測其水平變化對(duì)評(píng)估SLE疾病活動(dòng)性具有一定幫助，但在區(qū)分SLE活動(dòng)期與非活動(dòng)期上效果不顯著。因此，本研究通過分析SLE病人血清HE4和抗dsDNA抗體水平與疾病活動(dòng)性關(guān)系，并采用ROC曲線評(píng)估其在區(qū)分SLE是否在活動(dòng)期的價(jià)值，以期為SLE臨床治療提供幫助。

HE4首次發(fā)現(xiàn)于人附睪上皮細(xì)胞中，位于人染色體20q12～13.1，其編碼產(chǎn)物蛋白質(zhì)與精子成熟有關(guān)。HE4為乳清酸蛋白（WAP）基因編碼產(chǎn)物，可通過4-二硫化物核心結(jié)構(gòu)域發(fā)揮作用，因此又稱WAP-4-二硫化物核心結(jié)構(gòu)域2（WFDC2）。研究發(fā)現(xiàn)HE4可編碼胰蛋白酶抑制物，在抵抗微生物毒力因子上發(fā)揮重要作用，還參與多種疾病的免疫防御功能，可能發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。因此探討血清HE4水平對(duì)SLE病人具有重要意義。楊曉霞等研究報(bào)道，慢性腎臟病病人血清HE4水平遠(yuǎn)高于正常對(duì)照組，血清HE4水平與病人臨床分期、腎間質(zhì)纖維化比例等有關(guān)，且可作為評(píng)估慢性腎臟病病人預(yù)后的血清標(biāo)志物。孟騫等研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，子宮內(nèi)膜異位癥病人血清HE4水平顯著升高，血清HE4可作為子宮內(nèi)膜異位癥的診斷依據(jù)。安黎云等研究報(bào)道，慢性腎臟病各期病人血清HE4水平與對(duì)照組比較均明顯升高，且ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)血清HE4水平對(duì)慢性腎臟病診斷價(jià)值較高。而抗dsDNA抗體是SLE病人體內(nèi)重要的特異性抗體，其在SLE發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色；且有研究發(fā)現(xiàn)，抗dsDNA抗體陽性可在一定程度上提示SLE處于活動(dòng)期，因此研究血清HE4水平與抗dsDNA抗體關(guān)系具有一定臨床意義。已有研究報(bào)道，抗dsDNA抗體參與狼瘡腎炎發(fā)生、發(fā)展，并與SLE病人疾病活動(dòng)性有關(guān)。

本研究檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，SLE病人血清HE4、抗dsDNA抗體水平均顯著升高，與楊曉霞等、孟騫等研究報(bào)道類似，提示血清HE4、抗dsDNA抗體水平可能參與SLE發(fā)病過程。為探討血清HE4水平與抗dsDNA抗體及病情活動(dòng)性關(guān)系，本研究發(fā)現(xiàn)SLE病人抗dsDNA抗體陽性血清HE4水平遠(yuǎn)高于抗dsDNA抗體陰性者，SLE活動(dòng)期病人SLEDAI評(píng)分、血清HE4水平均遠(yuǎn)高于非活動(dòng)期病人，且相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)SLE病人血清HE4水平與抗dsDNA抗體水平及SLEDAI評(píng)分均呈正相關(guān)，提示血清HE4水平與抗dsDNA抗體密切相關(guān)，并可在一定程度上反映SLE病人的疾病活動(dòng)性。本研究還發(fā)現(xiàn)，SLE病人血清HE4水平與補(bǔ)體（C、C）水平呈負(fù)相關(guān)，與IgA、IgG、IgM、ANA滴度及24 h尿蛋白定量均呈正相關(guān)，進(jìn)一步提示血清HE4水平與SLE活動(dòng)程度有關(guān)。此外，本研究通過ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清HE4水平、抗dsDNA抗體水平均可有效區(qū)分非活動(dòng)期及活動(dòng)期SLE病人，且血清HE4水平效能優(yōu)于血清抗dsDNA抗體水平，與安黎云等研究結(jié)果相似，提示血清HE4水平更有利于檢測SLE病人疾病活動(dòng)程度，從而為臨床治療提供一定幫助。

綜上所述，血清HE4、抗dsDNA抗體水平在SLE病人中明顯升高，二者水平變化與SLE病人疾病活動(dòng)性有關(guān)，可作為區(qū)分活動(dòng)期及非活動(dòng)期SLE病人的有效指標(biāo)，尤其是血清HE4水平。本研究僅初步探討血清HE4水平與SLE病人疾病活動(dòng)性關(guān)系，接下來應(yīng)進(jìn)一步研究證實(shí)。