血清趨化素與自身免疫性肝炎的相關(guān)性

胡溢博

作者單位：鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州450003

自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）是由自身免疫介導(dǎo)的慢性進(jìn)行性免疫疾病，主要以肝細(xì)胞損害和肝細(xì)胞炎癥指標(biāo)升高為主要臨床特征，嚴(yán)重者可快速進(jìn)展為肝硬化和肝衰竭。遺傳易感性曾被認(rèn)為是其主要發(fā)病因素，而其他因素如環(huán)境、免疫系統(tǒng)、藥物、病毒感染等可能是在此基礎(chǔ)上引起機(jī)體免疫耐受機(jī)制破壞，產(chǎn)生肝臟自身抗原的免疫反應(yīng)，從而破壞肝細(xì)胞導(dǎo)致肝臟炎癥。目前認(rèn)為主要是個(gè)體自身免疫紊亂，促使炎癥因子浸潤使肝細(xì)胞損傷，但具體促炎因子目前尚不明確。趨化素是G蛋白偶聯(lián)受體人趨化因子受體1的配體，具有趨化作用，主要參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)，其可通過結(jié)合受體趨化素-R進(jìn)而趨化炎性細(xì)胞，進(jìn)而參與機(jī)體炎性反應(yīng)。研究表明趨化素與免疫炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，但目前對AIH發(fā)病過程是否與血漿趨化素存在相關(guān)性的研究尚未報(bào)道，因此本研究分析和探討趨化素與AIH的關(guān)系，為AIH的早期診斷及尋找可靠的診斷標(biāo)志物提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年10月至2018年10月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院就診的AIH病人68例，男31例，女37例，年齡（55±10）歲，范圍為44～70歲；同期收集該院70例進(jìn)行健康體檢的志愿者，男35例，女35例，年齡（55±9）歲，范圍為45～70歲；同期收集該院酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）病人63例為ALD組，男34例，女29例；年齡（57±10）歲，范圍為41～72歲。三組性別（

χ

=

8.000，

P

=0.092）、年齡（

F

=0.984，

P

=0.376），具有可比性。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照2011年中國《自身免疫性肝病診斷和治療指南》和《自身免疫性肝炎診斷和治療共識（2015）》及2003年中華醫(yī)學(xué)會肝臟病學(xué)會酒精性肝病學(xué)組制定的《酒精性肝病診斷標(biāo)準(zhǔn)》。AIH病人納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)B超或CT檢查后，證實(shí)存在脂肪肝；（2）無飲酒史；（3）自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有其他感染性疾病；（2）病原學(xué)檢測甲型肝炎病毒-免疫球蛋白、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒或抗輸血相關(guān)病毒陽性者；（3）酒精性或中毒性肝病等。ALD病人納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）5年以上飲酒史；（2）平均飲酒量＞40 g/d；（3）自愿參加。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）病毒感染；（2）合并肝損傷；（3）B超有彌漫性肝病表現(xiàn)等。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 方法

采集所有研究對象同一時(shí)間段外周靜脈血5 mL，經(jīng)乙二胺四乙酸抗凝，對外周血單個(gè)核細(xì)胞采用梯度離心法進(jìn)行分離，利用單克隆抗體對Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T-cell，Treg）進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色，并采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附測定對血清干擾素γ、白細(xì)胞介 素-4（interleukin-4，IL-4）、轉(zhuǎn) 化生長因子β（transformimng growth factor，TGF-β）、白細(xì)胞介素-17（interleukin-17，IL-17）和脂肪因子趨化素進(jìn)行檢測，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 三組血清趨化素水平比較

對照組、ALD組和AIH組 血 清 趨 化 素 水 平 依 次 為（73.88±21.69）mmHg、（89.57±23.58）mmHg、（122.69±31.86）mmHg（

F

=48.463，

P

＜0.001）。與對照組相比，ALD組、AIH組病人血清趨化素水平均明顯升高（

P

＜0.05）；與ALD組比較，AIH組病人血清趨化素水平明顯升高（

P

＜0.05）。

2.2 CD4T細(xì)胞亞群及血清細(xì)胞因子表達(dá)水平比較

與對照組比較，AIH組、ALD組病人Th1、Th17細(xì)胞比例及血清干擾素γ和IL-17表達(dá)水平均明顯升高（

P

＜0.05），Th2、Treg細(xì)胞比例均明顯降低（

P

＜0.05）；與ALD組病人比較，AIH組病人Th1、Th17細(xì)胞比例及血清干擾素γ和IL-17表達(dá)水平均明顯升高（

P

＜0.05），Th2、Treg細(xì)胞比例均明顯降低（

P

＜0.05）。三組IL-4、TGF-β表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05），見表1，2。

表1 三組外周血CD4+T細(xì)胞亞群水平比較/（%，±s）

2.3 血清趨化素與CD4T細(xì)胞亞群及血清細(xì)胞因子相關(guān)性

Pearson分析結(jié)果顯示，血清趨化素與Th1、Th17、干擾素γ、IL-17均呈正相關(guān)（

P

＜0.05），與Th2、Treg細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)（

P

＜0.05），見表3。

表3 血清趨化素與CD4+T細(xì)胞亞群及血清細(xì)胞因子相關(guān)性

表2 三組外周血細(xì)胞因子檢測水平比較/（ng/L，±s）

2.4 AIH的多因素logistic回歸分析

以是否發(fā)生AIH為因變量，因Th1、Th17、干擾素γ、IL-17、Th2、Treg、趨化素等單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)為自變量進(jìn)行多因素logistic回歸分析顯示，Th1、Th17、干擾素γ、趨化素是影響AIH的危險(xiǎn)因素（

P

＜0.05），見表4。控制年齡、性別、IL-17、Th2、Treg等混雜因素后，以Th1、Th17、干擾素γ、趨化素等指標(biāo)為自變量進(jìn)行多因素logistic回歸分析結(jié)果仍顯示，Th1、Th17、干擾素γ、趨化素是影響AIH的危險(xiǎn)因素（

P

＜0.05），見表5。

2.5 ROC評價(jià)血清中趨化素表達(dá)水平對AIH的診斷價(jià)值

ROC曲線分析顯示，以對照組為參考，血清中趨化素水平對AIH診斷價(jià)值的曲線下面積（AUC）為0.897（95%

CI

：0.792～0.921），截 斷值 為94.15 mmHg，其靈敏度、特異度分別為80.9%、88.4%；以ALD組為參考，則血清趨化素水平對AIH診斷價(jià)值的AUC為0.703（95%

CI

：0.614～0.793），截?cái)嘀禐?16.95 mmHg，其靈敏度、特異度分別為57.4%、81.2%，見圖1。

表4 自身免疫性肝炎（AIH）的多因素logistic回歸分析

表5 控制混雜因素后自身免疫性肝炎（AIH）的多因素logistic回歸分析

3 討論

AIH是自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的實(shí)質(zhì)炎癥性疾病，臨床發(fā)病率逐漸升高，病人大多情況下起病過程較為隱匿，為慢性癥狀，少數(shù)病人是急性發(fā)作。趨化素的循環(huán)水平與多種因素密切相關(guān)，如體質(zhì)指數(shù)、三酰甘油、血壓等，其在肝臟和脂肪組織中高表達(dá)。當(dāng)機(jī)體發(fā)生凝血、纖溶、炎癥級聯(lián)反應(yīng)時(shí)，前體形式被蛋白酶水解成具有生物活性的趨化素。趨化素發(fā)揮作用是通過結(jié)合其受體G蛋白偶聯(lián)受體、C-C類趨化因子受體樣蛋白2。研究表明趨化素在胃腸道惡性腫瘤、肺癌等多種腫瘤組織及血清中高表達(dá)，并參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，如促進(jìn)腫瘤新生血管的形成；改變宿主免疫機(jī)制并刺激腫瘤進(jìn)展。而本研究結(jié)果，顯示AIH病人血清趨化素水平均明顯高于對照組，提示趨化素可能是AIH的重要危險(xiǎn)因素。

注：ALD為酒精性肝病。

T淋巴細(xì)胞在人體免疫應(yīng)答中有著重要作用，其中CD4T淋巴細(xì)胞分化為Th1、Th2、Treg、Th17等細(xì)胞亞群，是通過在體內(nèi)被不同抗原刺激、激活、增殖而發(fā)生的，Th1細(xì)胞表達(dá)以INF-γ和IL-2為主。Th2細(xì)胞主要功能是輔助B淋巴細(xì)胞，令其參與體液免疫。Treg細(xì)胞通過分泌抑制性細(xì)胞因子發(fā)揮免疫抑制作用維持免疫穩(wěn)態(tài)。王君麗等研究證實(shí)，Th1/Th2平衡失調(diào)與結(jié)締組織病相關(guān)性間質(zhì)性肺疾病的發(fā)生有關(guān)。Th17細(xì)胞與上述細(xì)胞在功能上相互制約，其主要細(xì)胞因子是IL-17。顧娜等發(fā)現(xiàn)HBV感染相關(guān)肝纖維化病人Th17/Treg比值較正常組高。本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，ALD組、AIH組病人血清趨化素水平均明顯升高；與ALD組比較，AIH組病人血清趨化素水平明顯升高。提示血清趨化素水平異常表達(dá)，與ALD、AIH發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。CD4T淋巴細(xì)胞在AIH、ALD病人體內(nèi)可能被不同抗原刺激、激活、增殖、分化后發(fā)揮免疫效應(yīng)。進(jìn)一步通過Pearson分析結(jié)果顯示，血清趨化素與Th1、Th17、干擾素γ、IL-17均呈正相關(guān)，與Th2、Treg細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)。提示可能是CD4T淋巴細(xì)胞比例影響炎癥因子從而引發(fā)疾病，而趨化素與二者關(guān)系密切。多因素logistic回歸分析顯示，Th1、Th17、干擾素γ、趨化素是AIH的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示可能由于趨化素結(jié)合受體趨化素-R進(jìn)而趨化T淋巴細(xì)胞，使CD4T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的水平和（或）功能異常并誘導(dǎo)多種炎癥因子引發(fā)炎癥反應(yīng)。另外通過ROC曲線分析，以對照組為參考，血清中趨化素水平對AIH診斷價(jià)值的AUC為0.857（95%

CI

：0.792～0.921），截?cái)嘀禐?4.15 mmHg，其靈敏度、特異度分別為80.9%、88.4%；以ALD組為參考，則血清中趨化素水平對AIH診斷價(jià)值的AUC為0.703（95%

CI

：0.614～0.793），截 斷 值 為116.95 mmHg，其靈敏度、特異度分別為57.4%、81.2%。提示以對照組為參考時(shí)，血清趨化素表達(dá)水平對AIH診斷價(jià)值較高，對于血清趨化素水平升高的病人，除考慮AIH之外，還應(yīng)考慮ADL的可能。

綜上所述，AIH血清趨化素水平高表達(dá)，可能為AIH促病因素，在AIH炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝過程中發(fā)揮重要作用，為將來以趨化素為靶點(diǎn)治療AIH提供一定理論依據(jù)。但本研究樣本量少，且并沒有對其機(jī)制及與預(yù)后情況的關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步研究，是本文的不足，后期需大樣本對其作用機(jī)制作進(jìn)一步研究和探討。