高效液相色譜法檢測藥用膠囊中的人工合成色素含量研究

王 鵬

（浙江國邦藥業有限公司 浙江·紹興 312369）

膠囊是臨床中常用的固體劑類型，膠囊實際由兩部分組成，分別是膠囊外衣和內部填充物，內部填充物為藥物和輔助填充物的混合物，其中內部填充物是膠囊藥理活性的來源，膠囊外衣則是膠囊制劑的外部包裝物，一般不具備藥理作用，是為了維持內部填充物混合狀態或將藥物送至特定部位的藥物載體。

膠囊外衣通常由明膠和輔助料制作而成，分為帽和體兩部分，內部具有一定的容納空間，可以將活性物質填充在內，內部填充物可以為固體、晶體、粉末、藥片、半固體等物質。膠囊外衣一般無藥理活性，主要負責輸送內部活性物質，是一種較為穩定的、可靠的藥物包裝、藥物載體。一方面，膠囊外衣能夠將特定質量的活性物質容納在內，實現藥品的定量、定容制備，便于藥物的出售和服用，另一方面則是相較于無外衣的藥片、粉末而言，膠囊更容易通過水送服，藥物通過食道的過程中不會對患者上消化道產生刺激。此外通過調整膠囊外衣成分可以控制外衣崩解部位和崩解時間，從而實現高效用藥。

大部分藥品對保存條件有特殊要求，其中避光保存是較為常見的藥物保存條件，因此大部分膠囊在制作時會加入人工合成色素成分以提高膠囊的遮光能力，從而避免內部活性成分在光照下發生分解，最大化保留藥效。但膠囊畢竟會通過口服的方式進入人體消化系統，人工色素的少量攝入不會對健康造成影響，但大量的攝入可引起代謝不足導致人工色素在人體內的堆積，從而對人體健康造成不利影響。因此我們要做好膠囊外衣人工色素的檢驗與測定工作，完善膠囊的合格檢驗與鑒定，實現藥品安全。

基于上述背景，本文采用高效液相色譜法對膠囊人工合成色素含量進行檢驗和測定，以期為相關藥物研究、藥品制備和藥品管理工作提供數據參考。

1 材料與試劑

1.1 材料

從醫院藥品庫中抽調一批藥用明膠空心膠囊外衣為本次研究的研究材料。應用于研究前該批空心膠囊均處于正常保存狀態下，外包裝密封良好，確保研究時為首次拆封。

1.2 試劑

色素試劑準備如下：檸檬黃，純度90；誘惑紅，純度83；胭脂紅，純度70；亮藍，純度97.3；赤蘚紅，純度91.6；莧菜紅，純度93.6；色素試劑均為藥用膠囊人工合成常用色素標準品，試劑均為首次拆封。同時準備色譜研究用甲醇。所有試劑均在分析提純后備用。

1.3 儀器設備

液相色譜儀型號：SupersilODS-B；色譜柱：4.6mm*250mm（5m）；流動相：0.02mmol/L；A相：乙酸銨溶液；B相：甲醇；梯度洗脫：0min，90%A 相、10%B相；4min，80%A相、20%B 相；5min，65%A相、35%B相；15min，2%A相、98%B相；波長：254nm；柱溫：35；流速：1.0ml/min；進樣量 10l。

1.4 溶液制備

1.4.1 對照溶液

對照品制備，稱取各類型色素試劑樣品5mg，使用10ml容量瓶盛放，加水稀釋至刻度線并搖勻，取上層溶液，加水稀釋成50g/ml的對照樣品，備用。

1.4.2 供試溶液

精確稱取空心明膠膠囊0.5g，加入10ml清水，使用檸檬酸鈉稀釋為6pH溶液，60℃恒溫水浴。同時精確稱取2g聚酰胺粉，加入10ml清水調成粥狀后與水浴樣品進行混合，漏斗過濾后69℃溫水沖洗，然后依次使用甲酸甲醇溶液（4:6）進行10ml、5ml、5ml沖洗，加入清水調節為pH7溶液，再使用乙醇-氨水-水（7:2:1）進行洗滌，最后收集清洗液并蒸發至近干，加入適當水振蕩溶解后擴容至10ml，呈于容量瓶后搖勻，備用。

2 實驗方法

2.1 專屬實驗

以水為對照溶液，掃描對照溶液進行對比對照觀察，波長范圍設定值在200-400nm，直接觀察人工色素對紫外吸收情況；同時取10ml對照溶液和10l明膠溶液進行對比對照觀察，波長設定為200-400nm，通過觀察和對比分析明膠對色譜測定結果的影響。

2.2 標準曲線建立

取6種不同人工色素對照溶液分別稀釋為1、5、10、25、50、75、100g/ml的溶液，取10l進行液相色譜檢測，根據檢測結果建立主藥峰面積與濃度的線性回歸圖像并依據圖像繪制相應標準曲線，其中采用3倍噪聲極限作為標準。

2.3 回收率實驗

回收率=（實測量/加入量）*100%。具體操作如下：取適量人工合成色素對照品按照供試溶液配置方法配置成 1、50、100g/ml溶液，分別于不同濃度取樣品，高效液相色譜檢測合成色素回收水平。

2.4 精密度實驗

2.5 穩定性實驗

在精密度實驗的基礎上，分別于配置后0h、12h、24h、48進樣，分別進行高效液相色譜檢測，評價色素溶液的穩定性。

3 結果

3.1 色譜條件和波長

以水為對照，掃描常用人工合成色素溶液波長，于200-400nm進行掃描，結果發現，本實驗中所選的常用的六種要用人工合成色素在254nm左右的信號響應值最佳，因此研究中色譜柱波長鎖定為254nm。

同時就所選波長進行檢驗，取對照溶液和供試溶液，結果顯示人工合成色素分離度較高，分離度均在1.5以上，滿足研究所需。

3.2 線性范圍

根據主藥峰面積和濃度的線性回歸關系，提示人工合成色素在1-100g/ml內線性良好，因此研究色譜柱線性范圍選定為1-100g/ml，同時就檢出限進行觀察，結果提示人工色素的檢出限為0.05g/ml。

3.3 回收率

根據回收率實驗設計，分別配置了低中高三種濃度供試溶液，根據液相色譜儀檢測結果，提示三種濃度供試溶液中人工色素的回收率均在99%以上，RSD小于5%，提示該法回收情況良好，符合研究需求。

3.4 精密度檢驗

根據反復檢驗和評價，液相色譜儀結果提示通過高效液相色譜法檢測膠囊人工色素水平準確率較高，標準偏差值均在2%以內，提示該法測定膠囊人工色素精密度較高，符合研究需求。

3.5 穩定性

分別就3種不同的濃度溶液在不同時間內的穩定性進行色譜分析，結果顯示人工合成色素溶液在48h內的穩定性均較良好，符合研究需求。

3.6 測定結果

根據測定結果，明膠空心膠囊中有明顯的色素殘留，各種色素殘留情況如表1所示，其中赤蘚紅是最容易殘留的人工合成色素，莧菜紅則是殘留濃度最高的人工合成色素。

表1：膠囊中不同人工合成色素含量

4 討論

膠囊制劑是臨床中使用頻率最高的藥物類型，膠囊的外衣既是膠囊的包裝物也是保護膠囊內藥物活性的保護材料，在藥物藥效發揮、藥物保存中均有著重要作用。我國臨床中所用膠囊大多為明膠膠囊，明膠是一種天然的可食用分子增稠劑，因此口服后無毒副作用，被廣泛應用于藥品外衣。但膠囊外衣不僅僅有明膠一種成分，通常還會添加人工合成色素賦予膠囊顏色以遮蔽光照達到避光保存藥物的目的。但是人工合成色素中很大一部分并不能被人體吸收或代謝，持續攝入可對人體健康造成不利影響，因此膠囊人工色素殘留殘留問題一直是食品藥品監督部門關注的重點。

人工色素屬于化工產品，其是經過一系列復雜的鹵化反應、硝化反應等一系列郵寄化合反應制作而來，其不僅僅能夠為食藥品添加顏色，還具有表層保護的功能，是品種最常用的添加劑類型。但是人工合成色素與天然色素相比，其進入人體循環后容易發生雜質殘留，難以被人體吸收和代謝，會隨著時間推移逐漸累積，當人工合成色素在人體中累積到一定程度時就會對人體正常代謝產生不利影響，長時間服用還可成為心腦血管疾病的誘發因素。

本研究旨在通過高效液相色譜法對膠囊人工合成色素殘留情況進行測定，一方面是檢測常見藥用空心膠囊色素殘留情況，為膠囊制劑制備和藥品管理工作提供數據參考，另一方面則是評價高效液相色譜法在膠囊人工合成色素殘留檢測中的有效性和可靠性，為藥用膠囊人工合成色素檢測工作提供經驗參考，以促進我國食品藥品監督工作質量提升。在研究中，應用清水、色素對比液和膠囊供試液進行高效色譜分析，在進行供試液色譜分析前先就高效液相色譜法對人工合成色素的監測情況進行評價，結果發現高效液相色譜法在人工合成色素檢測中的精確度、回收率、線性范圍、穩定性均較好，符合研究需要。最后就空心明膠膠囊的色素殘留進行檢測，結果提示膠囊色素殘留中赤蘚紅是最容易殘留的人工合成色素，莧菜紅則是殘留濃度最高的人工合成色素。

本研究證明了，高效液相色譜法在藥用膠囊人工合成色素測定中應用效果良好，操作簡單、高效便捷、準確有效，測定結果可信度、準確度均較高。