陽光玫瑰葡萄組培快繁技術

孫知雨

（華南師范大學生命科學學院，廣東 廣州 510631）

陽光玫瑰葡萄屬歐美雜交種，但具有典型的歐亞種特性。該品種果穗呈圓錐形，果穗質量600 g左右，大穗可達1 800 g，平均單果質量8～12 g；果粒著生緊密，呈橢圓形，黃綠色，果面有光澤，果粉少；果肉鮮脆多汁，有玫瑰香味，可溶性固形物含量在20%左右，最高可達26%；鮮食品質極優，是目前市場上最受歡迎的葡萄品種之一［1］。為了進行優良陽光玫瑰葡萄果苗的快速繁育，并保持該品種的優良特征，宜采用組織培養方式進行繁殖。對葡萄進行組織培養的研究已多有報道［2-10］，但是關于陽光玫瑰葡萄組織培養的論文僅有1篇［11］。為了解影響陽光玫瑰組織培養效果的條件，此試驗對陽光玫瑰葡萄的組織培養和快速繁殖技術進行研究，為陽光玫瑰葡萄的快速繁殖提供參考。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料選取陽光玫瑰葡萄春季萌發的10 cm長的莖段，在室內去掉葉片，流水沖洗30 min，去掉頂梢最嫩的一段，剪成帶1個芽的莖段。將莖段放在超凈工作臺上，先用70%的酒精浸泡60 s，然后用0.1%氧化汞消毒9 min，再用無菌水涮洗3次，每次5 min。在無菌接種盤或者無菌培養皿上，切掉葡萄帶芽莖段兩端，然后將莖段接種在啟動培養基上。

1.2 啟動培養

B5為葡萄外植體芽誘導的基本培養基，培養基中添加植物生長調節劑6-BA和NAA。6-BA的濃度分為4個梯度，分別為0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L和2.0 mg/L，NAA的濃度為0.5 mg/L。此次試驗接種30瓶，每瓶1個外植體，設3次重復。外植體生長30 d，調查統計葡萄無菌芽的誘導成功率。

1.3 增殖培養

將誘導成功的葡萄組培苗在用無菌操作條件下切下，接種到預先配制好的增殖培養基上。增殖培養的基本培養基與啟動培養的基本培養基相同，6-BA的濃度分為4個梯度，從0.5 mg/L到2.0 mg/L，按照每個梯度增加0.5 mg/L設置，植物生長調節劑IBA的濃度選擇0.3 mg/L和0.5 mg/L。接種20瓶，每瓶4株苗，3次重復。生長30 d，調查統計組培苗的平均增殖系數和平均株高，篩選出適合組培苗增殖的6-BA與IBA濃度組合。

1.4 生根培養

將增殖培養基上生長30 d的組培苗，接種到生根培養基上。生根培養基選用1/2B5，IBA濃度設置3個梯度水平（從0.5 mg/L到1.5 mg/L，按照每個梯度增加0.5 mg/L設置），NAA濃度設置3個濃度（從0.1 mg/L到0.3 mg/L）。每處理接種20瓶，每瓶4株，3次重復。生長28 d，調查統計平均每株組培苗的生根數、平均根長和平均生根率，篩選出適合組培苗生根的IBA與NAA濃度組合。

1.5 培養條件

啟動培養和增殖培養的培養基均添加白砂糖30 g/L，生根培養基添加白砂糖20 g/L，每升培養基添加瓊脂粉6.5 g，培養基pH值調整為6.5。組培苗室的室內溫度控制在（25±1）℃，光照時間每天14 h，光照強度為培養架正常兩根日光燈管（距離組培瓶40 cm）。

2 結果與分析

2.1 啟動培養

在葡萄組培苗誘導過程中，莖段基部先形成愈傷組織，然后腋芽開始萌發，一般15 d可以看到外植體芽長到1 cm左右，25 d外植體芽長到3 cm長，并且整個外植體沒有細菌和霉菌污染，就確定為外植體芽誘導成功。從表1可看出，隨著植物生長調節劑6-BA濃度的不斷升高，芽的誘導率先升高后下降；葡萄成芽率最高為76.7%，此時6-BA的濃度為1.5 mg/L。在6-BA濃度為2.0 mg/L時，莖段基部愈傷組織增多，影響芽的誘導。根據實驗結果，篩選出最佳培養基及植物生長調節劑配比為B5+6-BA（1.5 mg/L）+NAA（0.5mg/L）。

表1 葡萄陽光玫瑰的啟動培養

2.2 增殖培養

從表2可看出，將經過啟動培養的芽接種到增殖培養基上，當IBA濃度為0.3 mg/L時，隨著6-BA濃度的升高，陽光玫瑰葡萄的增殖系數不斷升高，平均株高先降低后升高再降低；當IBA濃度為0.5 mg/L時，隨著6-BA濃度的升高，陽光玫瑰葡萄的增殖系數先升高后降低，平均株高先升高后降低。當6-BA相同時，除了6-BA濃度為2.0 mg/L時，植物生長調節劑IBA濃度為0.3 mg/L的增殖系數高于IBA濃度為0.5 mg/L的增殖系數，其余均為IBA濃度為0.5 mg/L的增殖系數高于IBA濃度為0.3 mg/L的增殖系數。

表2 陽光玫瑰葡萄的增殖培養

2.3 生根培養

在增殖培養基上生長的叢生芽長到3 cm以上時，可以轉接到葡萄生根培養基上。葡萄組培苗在生根培養基中10 d有根眼出現，20 d根可長到2 cm左右，根數2～4條。由表3可看出，在IBA相同濃度下，隨著NAA濃度的升高，葡萄組培苗的平均生根條數、生根率和平均根長均呈現不斷升高趨勢；在NAA相同濃度下，隨著IBA濃度的不斷升高，平均生根條數呈現先升高后降低，平均根長表現為先升高后降低；NAA濃度為0.1 mg/L和0.2 mg/L時，隨IBA濃度的不斷升高，生根率呈現為不斷升高；NAA濃度為0.3 mg/L時，隨IBA濃度的升高，生根率呈現為先升高后下降。根據實驗結果，1/2B5+IBA（1.0mg/L）+NAA（0.3mg/L）的培養基最適合陽光玫瑰葡萄生根，生根率達到96.5%。

表3 陽光玫瑰葡萄的生根培養

3 結語

通過對陽光玫瑰葡萄當年生莖段進行組培快繁試驗發現，最佳外植體芽的誘導培養基為B5添加6-BA（1.5 mg/L）和NAA（0.5 mg/L），最適合的增殖培養基為B5添加植物生長調節劑6-BA（1.5 mg/L）和IBA（0.5 mg/L），最適合的生根培養基為B5添加植物生長調節劑IBA（1.0 mg/L）和NAA（0.3 mg/L）。