微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定注射用鹽酸吉西他濱中6 種重金屬元素

余師師，王鵬，鐘振華，夏紅英，王烜，程奇珍

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點(diǎn)實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029

注射用鹽酸吉西他濱，是一種新型抗嘧啶代謝的抗腫瘤化療藥。可以用于晚期的或者轉(zhuǎn)移性的胰腺癌，或者治療局部晚期或轉(zhuǎn)移性的非小細(xì)胞肺癌，以及乳腺癌、膀胱癌，還有其他實體腫瘤［1-4］。由于重金屬元素可能會影響藥品療效，導(dǎo)致引起一系列不良反應(yīng)的發(fā)生，同時，重金屬在人體易與酶蛋白結(jié)合，使蛋白質(zhì)失去活性，損傷人體組織細(xì)胞，過量攝入某些重金屬會對人體產(chǎn)生危害［5-6］，故而應(yīng)將重金屬元素控制在可控限度內(nèi)。

ICH Q3D 元素雜質(zhì)指南在2014 年12 月開始實施，對元素雜質(zhì)分類及限度、制劑每日允許暴露量與濃度限度的相互轉(zhuǎn)換等進(jìn)行詳細(xì)說明，為藥品制定合理的元素雜質(zhì)控制提供了研究方法和限度依據(jù)［7-9］。《中國藥典》四部通則陸續(xù)增加了“鉛、鎘、砷、汞、銅測定法”“汞、砷元素形態(tài)及價態(tài)測定法”以及“中藥中鋁、鉻、鐵、鋇元素測定指導(dǎo)原則”［10］,可見《中國藥典》對藥品中重金屬元素的控制也越來越重視。

電感耦合等離子體質(zhì)譜是一種無機(jī)多元素分析檢測技術(shù)。具有高靈敏度、干擾少、低檢出限、可進(jìn)行多種元素分析等優(yōu)點(diǎn)，在當(dāng)今前沿技術(shù)中具有極高的地位，常應(yīng)用于化藥重金屬元素日常分析檢驗和安全監(jiān)測領(lǐng)域［11-15］。

本研究采用靈敏性高和準(zhǔn)確性高的電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法建立注射用鹽酸吉西他濱中Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 等6 種重金屬元素含量的測定方法，并通過完整的方法學(xué)驗證，保證各重金屬元素檢測的準(zhǔn)確靈敏，為市售注射用鹽酸吉西他濱的質(zhì)量控制和安全性評價提供準(zhǔn)確監(jiān)測數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

超純水制水機(jī)（Synergguv millipore 密理博中國有限公司）；安捷倫電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（7700 ICP-MS）；趕酸儀（GST26-20）；微波消解儀（MARS-Xpress）。

1.2 試藥與對照品信息

硝酸（批號：BCBP0680V，來源：fluka）；混合對照標(biāo)準(zhǔn)品溶液（含鉻、銅、砷、銀、鎘、鉛等元素，10 μg/mL），購于安捷倫科技有限公司；內(nèi)標(biāo)對照品溶液（含鉍、鍺、銦、銠、鈧等元素，100 μg/mL），購于安捷倫科技股份有限公司 。

1.3 樣品信息

本研究共涉及8 家公司生產(chǎn)的29 批次注射用鹽酸吉西他濱，樣品詳細(xì)信息見表3。

1.4 儀器條件

射頻功率：1 530 W；碰撞氣：氦氣；載氣：氬氣；冷卻溫度：4 ℃；載氣流量：1.08 L/min；等離子氣流量：15 L/min；積分時間：0.3 s；四級桿真空度：3.04×10-4Pa；采樣錐孔徑：1.0 mm；截取錐孔徑：0.4 mm；入口溫度：33.8 ℃；出口溫度：41.5 ℃；數(shù)據(jù)采集重復(fù)次數(shù)：3 次。

1.5 測定法

測定時以72Ge、103Rh、115In、209Bi、45Sc 作為內(nèi)標(biāo)，將標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液進(jìn)樣，以53Cr、63Cu、75As、107Ag、111Cd、208Pb 元素濃度為橫坐標(biāo)，儀器響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時進(jìn)行空白校正。

1.6 溶液的制備

1.6.1 混合內(nèi)標(biāo)溶液 精密量取內(nèi)標(biāo)對照品溶液1 mL，置100 mL 量瓶中，用2%硝酸定量稀釋制成每1 mL中濃度為1 μg 的溶液，即得。

1.6.2 對照品溶液的制備 精密量取混合對照標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，用2%硝酸溶液定量稀釋成系列含各金屬元素濃度分別為1、4、8、10、20、40、60、80、100、200、400、600 ng/mL 的對照品溶液。

1.6.3 樣品的制備 取注射用鹽酸吉西他濱1 瓶加水適量（制成40 mg/mL 的樣品溶液），精密量取1 mL，置微波消解罐中，加硝酸10 mL，100 ℃預(yù)消解1 h，取出，加蓋，放入微波消解儀中，190 ℃消解45 min，取出，放冷后，開蓋，140 ℃趕酸至罐內(nèi)硝酸近干，用2%硝酸轉(zhuǎn)移至25 mL 量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 線性關(guān)系試驗

取混合內(nèi)標(biāo)溶液與對照品溶液,按“1.5”項下ICP-MS 測定條件同時進(jìn)樣測定，記錄儀器響應(yīng)值（CPS）。以對照品溶液質(zhì)量濃度（x，ng/mL）為橫坐標(biāo)，儀器響應(yīng)值（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程、線性范圍詳見表1。

表1 線性關(guān)系與檢出限試驗結(jié)果

2.2 精密度試驗

取“1.6.2”項對照品溶液（濃度為200 ng/mL），重復(fù)進(jìn)樣測定6 次，記錄測定結(jié)果。結(jié)果：Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 元素儀器響應(yīng)值的RSD 分別是0.9%、0.5%、0.8%、0.5%、0.4%、0.4%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3 重復(fù)性試驗

取注射用鹽酸吉西他濱樣品（D 公司，批號：20180404），照“1.6.3”方法平行制備6 份樣品溶液，作為重現(xiàn)性試驗溶液。結(jié)果顯示：6 份樣品中Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 等測定結(jié)果的RSD 分別為1.5%、0.9%、1.1%、1.6%、0.5%、1.0%（n=6），表明本方法重復(fù)性好。

2.4 回收率試驗

取注射用鹽酸吉西他濱2 瓶（D 公司，批號：20180404），各加水5 mL，振搖使溶解，搖勻，精密量取1 mL（n=9），置微波消解罐中，分別精密加入混合對照標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度均為10 μg/mL）0.125、0.125、0.125、0.25、0.25、0.25、0.5、0.5、0.5 mL，加硝酸10 mL，100 ℃預(yù)消解1 h，取出，加蓋，放入微波消解儀中，190 ℃消解45 min，取出，放冷后，開蓋，140 ℃趕酸至罐內(nèi)硝酸近干，用2%硝酸溶液轉(zhuǎn)移至25 mL 量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，作為回收試驗溶液。回收試驗結(jié)果詳見表2。

表2 回收試驗結(jié)果

2.5 檢出限

取樣品空白溶液，連續(xù)測定11 次，計算儀器響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，以測定標(biāo)準(zhǔn)偏差的3 倍為各待測元素的檢測限，見表1。

2.6 樣品結(jié)果與分析

該品種本次抽驗中共涉及8 家公司生產(chǎn)的29批次，現(xiàn)對每批樣本進(jìn)行金屬元素含量檢測。樣本信息及重金屬元素測定結(jié)果詳見表3。

表3 樣本信息及重金屬元素測定結(jié)果

3 討論

對8 家公司市售29 批注射用鹽酸吉西他濱進(jìn)行研究測定，參照ICH Q3D 元素雜質(zhì)指南對注射用制劑金屬元素雜質(zhì)限度規(guī)定［7］，結(jié)果表明各元素均低于限度，本品使用時重金屬安全風(fēng)險較低。各重金屬元素的分類、限度及注射用鹽酸吉西他濱樣品中重金屬元素含量范圍詳見表4。

表4 各重金屬元素的分類、限度及樣品中重金屬元素含量范圍

本方法采用ICP-MS 法測定注射用鹽酸吉西他濱中的Cr、Cu、As、Ag、Cd、Pb 重金屬元素，此法操作方便簡單，線性關(guān)系良好，檢出限低，定性定量準(zhǔn)確，適用于注射用鹽酸吉西他濱中雜質(zhì)檢測分析，為相關(guān)風(fēng)險評價提供依據(jù)。