不同種源八月瓜種子發芽率及總黃酮含量測定研究

李曉斌，陸文，林旭俊，李善志，陳旭，郭霞

海南省林業科學研究院（海南省紅樹林研究院），海南?？?571100

八月瓜（Holboellialatifolia Wall）是木通科木通屬的多年生藤本植物[1，2]，具有較高的藥用和食用價值，果實口感香甜，且含有豐富的維生素C、蛋白質氨基酸、可溶性糖等營養成分和人體必需的微量元素，同時在改善人體消化系統、血液循環系統、免疫系統等方面具有較高價值[1，3]。近期八月瓜被作為扶貧產業在四川、湖南、貴州等地進行推廣種植，并取得了較好的經濟效益[3-4]。

八月瓜中存在著豐富的黃酮成分，具有較高的生理學保健功能[5-6]。黃酮是一種很強的抗氧劑，可有效清除體內的氧自由基，這種阻止氧化的能力是維生素E 的10 倍以上，抗氧化作用可以阻止細胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發生[7-8]；黃酮還可以改善血液循環，降低膽固醇，這些作用大大降低了心腦血管疾病的發病率或改善心腦血管疾病的癥狀，具有廣闊的市場前景[9]?；诎嗽鹿狭己玫臓I養成分，通過收集不同種源的八月瓜，對其進行種子繁育及果皮、果肉中總黃酮含量的測定，為八月瓜產品的開展提供依據。

1 研究區概況

海南省林業科學研究院（海南省紅樹林研究院）定安龍州基地（19°31′N～19°44′N，110°7′E～110°31′E），位于海南省定安縣龍州鄉，南渡江中下游南畔。土壤類型為沙質壤土和棕色粘土，土壤透水性較好，但肥力欠佳。屬熱帶海洋性季風氣候，陽光充足，雨量充沛，2018 全年無霜期，1 月份均溫21℃，極高溫27℃，極低溫10℃；7 月份均溫31℃，極高溫37℃，極低溫24℃；12 月平均溫度24℃，極高溫30℃，極低溫10℃；年均氣溫、日照和降水量分別為24℃、1880h、1953mm。冬春季干旱，夏秋季節多臺風暴雨。

2 材料與方法

2.1 試驗材料

八月瓜種子來源于云南、貴州、廣東、湖南、江西5 個地區，人工繁育；總黃酮測定的八月瓜果實為海南省林業院自主培育不同種源苗木所結果實；蘆丁對照品（含量≥98%）。

2.2 試驗方法

2.2.1 種子不同處理方法

選用籽粒飽滿、沒有殘缺或畸形、無病蟲害的種子，用1%高錳酸鉀溶液消毒10min，清水沖洗后，分別用冷水、溫水、10%赤霉素浸泡。浸泡時間均為2h，直接播種作為空白對照。每處理使用種子30 粒，重復3 次。

播種基質為河沙，基質使用前噴灑土壤消毒劑，并覆蓋上塑料薄膜，進行基質消毒。7d 后將處理好的基質混合均勻，用于發芽試驗及苗床育苗。

溫度在22℃～27℃，光照條件為自然光。

播種后，當胚芽出土時，觀測記錄每個處理的發芽率，對各處理的發芽率進行統計：

發芽率=發芽數/播種數×100%。

2.2.2 不同播種基質選擇

試驗為單因子試驗，采用全河沙、全黃土、黃土：河沙：椰糠=3：1：2 作為育苗基質，基質使用前噴灑土壤消毒劑，并覆蓋上塑料薄膜，進行消毒。

播種前將種子用1%高錳酸鉀溶液消毒10min，清水沖洗后，用10%赤霉素浸泡2h 后播種于不同基質。每個處理30 粒種子，重復3 次。

播種后，當胚芽出土時，觀測記錄每個處理的發芽率，對各處理的發芽率進行統計：

發芽率=發芽數/播種數×100%。

2.2.3 總黃酮測定方法

八月瓜總黃酮測定采用紫外-可見光光度法測定，根據物質分子對波長為200nm～760nm 這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。

（1）樣品制備。稱取不同種源八月瓜樣品0.3g，每個種源重復3 次，加入70%乙醇30mL，密塞，稱定重量，靜置3h，超聲提取30min，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾。取濾液1mL，加去離子水6mL，加1mL5%NaNO2，搖勻靜置6min，然后加入1mL10%Al （NO3）3，搖勻靜置6min，再準確加入10mL4%NaOH，最后加去離子水定容到25mL，搖勻，靜置15min。于510nm 處進行比色，讀取吸光度。

（2）標準曲線繪制。取6 支試管，取蘆丁對照品溶液0mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL，分別置于25mL 的容量瓶中，分別加去離子水6mL、5.5mL、5mL、4.5mL、4mL、3.5mL，依次各加入1mL5%NaNO2，搖勻靜置6min，然后再依次各加入1mL10%Al（NO3）3，搖勻靜置6min，再準確依次各加入10mL4%NaOH，最后加去離子水定容到25mL，搖勻，放置15min 后待測。于510nm 處比色，測定吸光度。

3 結果與分析

3.1 不同處理方法對八月瓜種子發芽率的影響

種子千粒重直接反應了種子的大小和飽滿程度，種子育苗前首先對種子進行千粒重測定評判其質量好壞。研究收集云南、貴州、廣東、湖南、江西5個地方的種子進行測定，為種子育苗奠定基礎，具體數據如下表1：

表1 八月瓜種子測試結果Tab.1 Test results of Holboellialatifolia Wall seeds

根據表1 可以看出不同種源間的種子千粒重均存在差異性。種子千粒重表現最好的是貴州種源（189.13±5.22），其次為云南種源、湖南種源、江西種源、廣東種源。根據試驗結果，種子育苗選用貴州種源的種子。根據種子不同處理方式，對比發芽率，選取最合適的種子處理方式，如表2：

表2 不同處理的八月瓜種子發芽率統計Tab.2 Germination statistics of Holboellialatifolia Wall seeds under different treatments

種子發芽率直接反應了種子品質的好壞。試驗結果表明，不同浸泡處理的種子發芽率表現出明顯差異，種子發芽最早的是10%赤霉素浸泡（28d），其次為溫水浸泡（37d）、冷水浸泡（48d）；對比整個發芽過程，發現10%赤霉素浸泡的種子發芽率最高（92.6%），最低的直播種子發芽率為50.1%。

3.2 不同播種基質對八月瓜種子發芽率的影響

表3 不同播種基質的八月瓜種子發芽率統計Tab.3 Germination statistics of Holboellialatifolia Wall seeds with different sowing substrates

試驗結果表明，不同播種基質處理的種子發芽率表現出明顯差異，種子發芽最早的是河沙，且發芽率最高也是河沙（92.6%）。

3.3 不同種源八月瓜總黃酮含量測定

不同種源八月瓜總黃酮含量測定基于統一標準曲線下進行測定。不同種源八月瓜總黃酮含量測定結果見表4：

表4 八月瓜果肉和果皮中總黃酮含量Tab.4 Contents of Ttotal Flavonoids in flesh and peel of Holboellialatifolia Wall

研究表明，野生八月瓜果肉占比在10%～20%之間，在海南通過人工干預，果肉占比可以達到40%以上；果肉中總黃酮含量最高的是云南種源（1.173%），其次為廣東種源（0.789%）和貴州種源（0.738%）；果皮中總黃酮含量最高的是湖南種源（1.412%），其次為貴州種源（0.818%）和廣東、江西種源（均為0.782%）；總含量的排序為：湖南種源＞云南種源＞廣東種源＞貴州種源＞江西種源。

對不同種源八月瓜果實總黃酮含量的影響進行方差分析（p＜0.05），如表5，根據結果可以看出，江西種源與云南種源差異不顯著，其他4 個種源間差異均顯著。

4 結論與討論

隨著生活水平的日益提高，人們對純天然綠色食品的需求越來越大，加上野生果樹具有很大的蘊藏量，食果的加工、深加工及綜合開發利用將有廣闊的市場前景。八月瓜的營養豐富，果實乳白，清甜多汁，口感遠勝蜂蜜，其果實含有多種可溶性果糖、淀粉、碳水化合物以及人體所需的微量元素和多種維生素，是一種富含營養的上品野生瓜果。

八月瓜一般9 月～10 月成熟，將種子及時秋播或用濕沙混合貯藏，到翌年3 月～4 月播種。該研究通過開展種子發芽率試驗，發現種子播種前采用10%赤霉素浸泡種子2h，隨后采用撒播的方式進行播種，育苗基質采用全河沙基質，發芽率可以達到90%以上，這為八月瓜種子育苗的后續研究及推廣提供了技術支持。

八月瓜含有豐富的黃酮成分，具有養顏美容、強身健體的保健效果。該試驗通過對不同種源的八月瓜果實的總黃酮含量進行測定，發現果肉中總黃酮含量最高的是云南種源（1.173%），其次為廣東種源（0.789%）和貴州種源（0.738%）；果皮中總黃酮含量最高的是湖南種源（1.412%），其次為貴州種源（0.818%）和廣東、江西種源（均為0.782%）；總含量的排序為：湖南種源＞云南種源＞廣東種源＞貴州種源＞江西種源。這些數據為八月瓜鮮果、果茶等產品開發銷售提供了依據。