污泥細菌總數檢測方法的研究

習蘇蕓 黃河笑 李顯芳 蔣利莎

（國家城市供水水質監測網重慶監測站，重慶 400074）

一、前言

目前污水處理的方法主要包括物理法、化學法及生物法。生物法主要是利用微生物的新陳代謝活動，分解污水中的有機物質，從而達到污水凈化的目的。污水中的微生物[2]多數為腐生型細菌和原生動物。測定污泥中能夠細菌總數，對污泥污染程度的判斷及污水處理廠污泥排放是否符合標準，具有非常重要的意義。2005 年，中華人民共和國建設部頒布的《城市污水處理廠污泥檢驗方法》（CJ/T 221-2005）[]，為檢測污水處理廠的污泥提供了技術方法。

二、實驗部分

（一）實驗原理

一定量的污泥樣品經稀釋處理以后，接種于營養瓊脂培養基中，在37℃培養24h 后，所生長的細菌菌落的總數即為樣品的細菌總數[1]。

（二）藥品試劑

氫氧化鈉溶液：c(NaOH)=1mol/L；鹽酸溶液：c(HCl)=1mol/L；生理鹽水：ω(NaCl)=0.8%；無菌稀釋水：根據污泥樣品的數量配制稀釋用的生理鹽水，分裝于三角瓶及試管中。每個污泥樣品需準備一個內裝有9mL 生理鹽水的試管，同時準備8 個至9 個（具體數量根據污泥樣品的稀釋倍數確定）內裝有90mL 生理鹽水的三角瓶，其中放入數玻璃珠），經115℃高壓蒸汽滅菌20 min，備用。

營養瓊脂培養基成分：蛋白胨（10g），牛肉浸膏（3g），氯化鈉（5g），瓊脂（15～20g），蒸餾水（1000mL）。將成分混合后，用氫氧化鈉（1mol/L）溶液或鹽酸溶液（1mol/L）調節pH 值為7.4～7.6，過濾除去沉淀，分裝于玻璃容器中，經115℃高壓蒸汽滅菌20 min，貯存于冷暗處備用。

（三）儀器及設備

高壓蒸汽滅菌器：115℃、121℃可調；隔水式培養箱：允許溫度偏差37℃±1℃；恒溫水浴鍋：46℃±1℃；電子分析天平；菌落計數器；振蕩器；可調式電爐。

（四）實驗步驟

稱取1g 的污泥樣品，轉至9mL 滅菌的生理鹽水，制成1:10 的稀釋液。振蕩搖勻，全部轉移至90mL 的滅菌生理鹽水，制成1:100 的稀釋液。吸取10mL1:100 的稀釋液于90mL 的滅菌生理鹽水，制成1:1000 的稀釋液。重復上述步驟，根據對污泥樣品含菌量的估計，選擇2 個至3 個適宜濃度的稀釋菌液用作平板培養。污泥的稀釋倍數一般選擇（1×105）至（1×107）之間，培養后平皿上的菌落數在30～300 之間。

在無菌條件下，用1 mL 滅菌的移液管移取所選擇的適宜濃度的稀釋菌液1 mL 轉入滅菌平皿中，邊倒入15 mL 左右已融化并冷卻到45℃左右的營養瓊脂培養基，邊不斷轉動平皿，使稀釋菌液和培養基混合均勻。每個稀釋倍數應做兩個對照培養結果。每次實驗，應另用一個滅菌的平皿只傾注營養瓊脂培養基加1mL 滅菌生理鹽水做空白對照。待營養瓊脂培養基凝固后，翻轉平皿，置于37℃±1℃恒溫培養箱內培養24 h±1h，取出計數。計算和報告計數結果見表1[1]。

表1 稀釋倍數選擇及菌落總數測定值[1]

三、結果與討論

（一）精密度

對同一污泥樣品，1 人平行檢測6 次，檢測結果見表2 所示。

表2 同一污泥樣品中細菌總數含量檢測結果

由上表2 可知，精密度相對偏差為0.55%，本次精密度檢測結果符合技術要求，結果滿意。

（二）重現性

對同一污泥樣品，3 人各自檢測結果見表3 所示。

表3 同一污泥樣品中細菌總數檢測結果

由上表3 可知，重現性相對偏差為0.43%，本次重現性檢測結果符合技術要求，結果滿意。

（三）樣品的檢測

按照本方法對污泥中細菌總數進行測定，測定的結果見表4。

表4 不同污泥樣品中細菌總數檢測結果

四、結論

綜上所述，從檢測結果可以看出：在該檢測條件下，用平皿計數法對污泥中細菌總數進行測定，方法的精密度RSD 為0.55%，重現性RSD 為0.43%。檢測取得了較好結果，滿足《城市污水處理廠污泥檢驗方法》CJ/T 221-2005（13）[1]的要求。