液相色譜—串聯質譜法測定海參中的甲氰菊酯和撲草凈含量

馬瑞欣 周凡 李雪萍 王曉靜 張鵬燕

摘要：建立了液相色譜-串聯三重四極桿質譜法（LC-MS/MS）同步檢測海參中的甲氰菊酯和撲草凈。樣品用乙腈提取，中性氧化鋁柱凈化，LC-MS/MS分析，基質標準曲線定量。結果表明，甲氰菊酯和撲草凈在0～50ng/mL范圍內呈良好線性，相關系數均在0.999以上，方法檢出限為1.0μg/kg，定量限為5.0μg/kg。在5.0μg·kg-1、10μg·kg-1、50μg·kg-1添加水平下，甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之間，撲草凈平均回收率在86%～92%之間，RSD均小于10%。該方法操作簡單，分析速度快，可適用于海參中的甲氰菊酯和撲草凈同時測定。

關鍵詞：液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）;海參;甲氰菊酯;撲草凈

甲氰菊酯別名滅掃利，是一種廣譜擬除蟲菊酯類殺螨殺蟲劑，中等毒性，廣泛用于棉花、水果、蔬菜和茶葉等多種經濟作物;撲草凈主要作用于大豆、花生、棉花、水稻、甘蔗等作物，防除禾本科雜草和闊葉雜草，中等毒性。兩種農藥均不得在水產養殖中使用。海參池塘養殖過程中易受到病蟲和大型藻類的危害[1-2]，有些養殖戶非法使用甲氰菊酯和撲草凈殺蟲滅藻。目前食品中的甲氰菊酯和撲草凈檢測標準為氣相色譜-質譜法[3-5]，氣相色譜-質譜法前處理繁瑣，分析時間長，且單四極桿受試劑空白干擾大，對低濃度的樣品定性定量造成困擾。

本方法建立了液相色譜-串聯質譜法分析海參中的甲氰菊酯和撲草凈，前處理簡單，分析速度快，抗干擾能力強，可以對兩種農藥同時進行定性和定量，極大提高了檢測速度，減少了檢測差錯率。

1實驗部分

1.1儀器、試劑與材料

LC-20AD液相色譜儀（日本島津）、QTRAP4500三重四極桿質譜儀（美國ABSCIEX）、百分之一電子天平（賽多利斯）、平行蒸發儀（瑞士BUQI）、TDZ5-WS離心機（湖南湘儀）、MS3渦旋混合器（IKA）、JYS-A8000絞肉機（九陽）。

甲氰菊酯：1000μg/mL（正己烷）;撲草凈：1000μg/mL（丙酮），均為北京北方偉業計量技術研究院生產。

乙腈和甲醇（HPLCGrade，Merck）、中性氧化鋁柱：1000mg/6mL（DIKMA）、甲酸（HPLCGrade，DIKMA）、0.2μm濾膜（PALL），實驗所用水為超純水。

1.2試樣制備

海參去內臟后切成小塊后混勻，絞肉機絞碎，裝入潔凈容器中，密封，-20℃保存。

1.3樣品前處理

稱取5.00g樣品（精確到0.01g）于50mL離心管中，加入10mL乙腈，3000r/min渦旋混勻2min，4000r/min離心5min，上清液移入25mL比色管中;殘渣中再加入10mL乙腈，3000r/min渦旋混勻2min，超聲5min，4000r/min離心5min，上清液合并至25mL比色管中，乙腈定容至25.0mL，混勻備用。

中性氧化鋁柱5mL乙腈活化后，準確移取5.00mL提取液至中性氧化鋁柱上，流出液接入蒸發管中，5mL乙腈洗滌中性氧化鋁柱，收集全部流出液。45℃蒸發至干。準確加入2.00mL乙腈+水（1+1）洗滌蒸發管內壁，經0.2μm濾膜過濾后供液相色譜-串聯質譜分析。

1.4液相色譜-串聯質譜條件

液相色譜條件：色譜柱AccucoreTMaQ（100mm×2.1mm，2.6μm），柱溫40℃，流速0.5mL/min，進樣量5μL，流動相A為0.005mol/L乙酸銨溶液（含0.3%甲酸），B為甲醇;梯度洗脫程序：0～1min，10%B;1～3min，10%B～90%B;3～5min，90%B;5～5.1min，90%B～10%B;5.1～7min，10%B。

質譜條件：電噴霧離子源（ESI），多反應掃描（MRM）正離子模式，噴霧電壓5500V，氣簾氣30PSi，碰撞氣Medium;溫度550℃;霧化氣：55PSi;輔助加熱氣：55PSi。質譜條件及參數見表1。

1.5標準曲線配制

取甲氰菊酯和撲草凈的標準溶液各100μL于同一進樣小瓶中，氮氣吹干溶劑后，準確加入1mL乙腈，混勻，為100μg/mL標準溶液，用空白基質逐級稀釋成0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10，25，50ng/mL的標準系列。

2結果與討論

2.1質譜條件的確定

分別取1μg/mL的甲氰菊酯和撲草凈溶液通過蠕動泵注入質譜中，尋找母離子、子離子和碰撞能，并優化去簇電壓和碰撞池出口電壓。甲氰菊酯的一級質譜圖顯示其加NH+4離子m/z367.1信號比其本身母離子m/z350信號強，并由實驗結果進行了證實。因此本文選用m/z367.1作為甲氰菊酯的母離子進行分析。

2.2基質效應

以基質標準曲線與溶劑標準曲線的斜率比值來評定基質效應，標準曲線見表2;甲氰菊酯的基質效應為59.6%，撲草凈的基質效應為74.5%，二者均表現為基質抑制，其中甲氰菊酯基質抑制更明顯。因此選用基質標準曲線進行定量。

2.3線性范圍

以濃度為橫坐標，定量離子峰面積為縱坐標繪制標準曲線，甲氰菊酯和撲草凈基質標準曲線在0～50ng/mL范圍內均呈現良好線性關系，線性系數r>0.999。甲氰菊酯和撲草凈基質標準溶液的多反應掃描質量色譜圖見圖1。

2.4回收率和精密度

通過空白樣品添加標準物質的方式進行回收率和精密度測試，添加梯度為1.0、5.0、10、50μg·kg-1，回收率和精密度見表3和表4。由表中數據可知，在5.0～50μg·kg-1添加范圍內，甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之間，RSD在5.1%～9.0%之間;撲草凈平均回收率在86.6%～92.4%之間，RSD在3.5%～6.9%之間。

2.5檢出限和定量限

通過分析表3和表4中的回收率和RSD值，甲氰菊酯和撲草凈的檢出限可定為1.0μg·kg-1，定量限可定為5.0μg·kg-1。

2.6實際樣品檢測

檢測實際樣品38份，檢測結果與氣相色譜-質譜法一致。

3結論

本方法建立了液相色譜-串聯質譜法同時檢測海參中的甲氰菊酯和撲草凈。前處理操作簡單，可操作性強，分析速度快，準確度和精密度滿足檢測方法學的要求，可作為海參中甲氰菊酯和撲草凈的定性、定量檢測方法。

參考文獻：

[1]

孫愛麗.海參養殖池塘中幾種大型藻類的危害及其防治措施[J].水產養殖，2014（5）：28-29.

[2]房英春，張慧，陳曦.海參養殖常見病害的診治[J].中國水產，2008（1）：70-71.

[3]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.進出口食品中甲氰菊酯殘留量檢測方法：SN/T2233-2008[S].北京：中國標準出版社，2009：1-17.

[4]中華人民共和國衛生部中國國家標準化管理委員.動物性食品中有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥多組分殘留量的測定：GB/T5009.162-2008[S].北京：中國標準出版社，2009：1-16.

[5]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.進出口食品中撲草凈殘留量檢測方法氣相色譜-質譜法：SN/T1968-2007[S].北京：中國標準出版社，2008：1-6.

（收稿日期：2021-05-07）