性病門診就診488例單純皰疹患者病毒檢測結果分析

于雪瑩 陳達香 吳興中 方銘恒 黃進梅 薛耀華 鄭和平，3

1安徽醫科大學廣東皮膚病臨床學院（合肥230032）；2南方醫科大學皮膚病醫院檢驗科（廣州510091）；3廣東省皮膚病醫院檢驗科（廣州510091）

生殖器皰疹是臨床上常見的一種慢性易復發的病毒性疾病，目前已成為全球感染率最高的性傳播疾病之一，世界衛生組織（WHO）估計全世界約有5.9 ～ 6.5 億人患有生殖器皰疹［1］。單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）屬致病性人類α皰疹病毒，是一種嗜神經的DNA 雙鏈病毒，分為1型單純皰疹病毒（HSV?1）和2 型單純皰疹病毒（HSV?2）兩種血清型［2］。HSV?1 主要經口傳播引起口唇皰疹［3］，HSV?2主要通過性行為傳播，HSV?1和HSV?2 均能引起生殖器皰疹［4-5］。HSV 感染會增加人類免疫缺陷病毒和梅毒螺旋體感染的風險［6］，并可能協同人乳頭瘤病毒誘發宮頸癌［7］，此外，HSV 可以在骶尾神經節等組織內建立潛伏狀態，并且周期性復活而導致病情遷延難愈，對患者生理及心理健康造成了嚴重的影響［8?9］。因此，早期診斷及治療生殖器皰疹對控制HSV 的傳播和降低其危害性具有重要的臨床意義。為了解廣州地區性病門診生殖器皰疹患者HSV 感染現狀，本研究對2020年1?7月廣東省皮膚病醫院皮膚性病科488 例就診者的樣本進行了單純皰疹病毒的檢測并對HSV 感染特點進行了分析，結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究回顧性分析了2020年1?7月廣東省皮膚病醫院488 例就診者的臨床資料和實驗室檢測結果，其中男351 例，女137 例，年齡17 ～ 86 歲，平均38 歲。病例入選標準：外生殖器部位出現可疑生殖器皰疹臨床表現，如水皰、潰瘍、膿皰、結痂等；具有不典型生殖器皰疹表現，如紅斑、丘疹、泌尿生殖器有紅、腫、痛、癢；自訴有高危接觸史或曾出現過類似單純皰疹現象而就診時未見典型臨床表現者，為求確診而行實驗室檢查者。確診標準：依據中華人民共和國衛生行業標準WS/T 236?2017，生殖器皰疹診斷分為臨床診斷病例和確診病例，病毒培養、抗原檢測、核酸檢測中的任一項陽性者為確診病例［4］。

1.2 標本采集對有水皰或者潰瘍者，無菌生理鹽水清潔皮損周圍皮膚，用針頭刺破水皰，用小棉簽吸取皰液或刮取潰瘍面的漿液性分泌物，紅斑和丘疹者用小棉簽在皮損表面摩擦采集表皮樣本，患者自述高危接觸史而無典型臨床表現者取尿道拭子或宮頸陰道拭子。標本置無菌生理鹽水中，于?20 ℃保存。

1.3 儀器與試劑儀器為羅氏診斷產品有限公司生產的羅氏cobas480 PCR 擴增儀和瑞士帝肯公司的全自動酶標儀（Tecan Freedom evolyzer），PCR 試劑盒為廈門泰普生物科技有限公司1/2 型單純皰疹病毒核酸檢測試劑盒（PCR?熒光探針法），ELI?SA 檢測試劑盒為愛爾蘭Trinity 公司提供的HSV IgM/IgG 抗體，試劑使用均在有效期內，實驗操作及結果判斷嚴格按照說明書進行。

1.4 檢測方法

1.4.1 核酸檢測嚴格按照臨床基因擴增實驗室的要求開展HSV DNA 檢測。對采集好的樣品放入1 mL 無菌生理鹽水中浸泡10 min，?20 ℃保存，一周內檢測。1.5 mL 離心管12 000 r/min 離心5 min，棄上清，沉淀中加入50 μL DNA 裂解液混勻，充分震蕩混勻，100 ℃恒溫處理10 min，冷卻降溫后12 000 r/min 離心5 min，取上清液5 μL加入PCR反應管，擴增參數及結果嚴格按照說明書進行，分別報告HSV?1 DNA 和HSV?2 DNA 檢測結果。HSV?1 DNA 或HSV?2 DNA 檢測陽性的患者為生殖器皰疹確診病例。

1.4.2 抗體檢測HSV 抗體檢測操作嚴格按照試劑盒中說明書進行。將患者血清稀釋加到包被有抗原微孔中，室溫反應60 min，去除未結合的抗體，加入結合有過氧化物酶的IgM/IgG 抗體，室溫反應30 min，再加顯色底物，反應30 min，在405 nm 單波長讀取每個吸光度值（OD），并計算臨界值，ISR值=血清標本OD值/臨界值，患者標本ISR 值＞1.10認定為陽性。HSV 型特異性血清抗體檢測對于生殖器皰疹具有輔助診斷價值。

1.5 統計學方法采用SPSS 23.0 對數據進行統計分析，計數資料表示為例數和百分數，比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HSV核酸檢測結果在488例樣本中，PCR檢測HSV?1/2 DNA 陽性樣本141 例，陽性率為28.89%（141/488）。其中HSV?1 DNA 單陽性5 例（3.55%），HSV?2 DNA 單陽性135 例（95.74%），HSV?1 和HSV?2 DNA 雙陽性1 例（0.71%）。女性HSV DNA 陽性檢出率（40.88%）高于男性（24.22%），差異有統計學意義（P＜0.001）。不同性別和年齡分組患者HSV?1 DNA 和HSV?2 DNA 陽性率比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 488 例性病門診患者HSV 核酸檢測結果Tab.1 The analysis of HSV DNA detection by PCR of 488 STD outpatients 例（%）

2.2 男性不同取材部位的HSV 檢測結果85 例男性HSV 感染患者中，82 例為HSV?2 DNA 陽性，3 例HSV?1 DNA 陽性。根據不同部位進行統計，其中包皮龜頭檢出HSV 陽性者60 例，占男性核酸檢測陽性總數的70.59%（60/85），提示包皮龜頭為男性HSV 的好發部位。見表2。

2.3 女性不同取材部位的HSV 檢測結果137例女性可疑單純皰疹就診者中，54 例檢出HSV?2 DNA 陽性，3 例檢出HSV?1 DNA 陽性，其中1 例為HSV?1 和HSV?2 雙陽性。根據不同部位進行統計，外陰檢出41 例陽性，占女性核酸檢測陽性患者的73.21%，提示外陰為女性HSV 的好發部位。外陰HSV 陽性檢出率為56.94%，顯著高于宮頸和陰道感染（10.00%），差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 488 例性病門診患者不同解剖學部位樣本HSV 核酸檢測結果Tab.2 HSV DNA detection results from different anatomical parts of 488 STD outpatients 例（%）

2.4 HSV?2 DNA 與血清HSV?2（IgM 或IgG）抗體檢測結果488 例患者中，286 例同時進行了HSV IgM/IgG 和核酸檢測，對HSV?2 DNA 和HSV?2 IgM/IgG 抗體檢測結果進行統計。68 例HSV?2 DNA 陽性的患者中，HSV?2 IgM 陽性4 例（5.88%），HSV?2 IgG 陰性23 例（33.82%）。見表3。

表3 HSV?2 DNA 與血清HSV?2（IgM 或IgG）抗體檢測結果分析Tab.3 Results of HSV?2 DNA and HSV?2 IgM/IgG antibody detection in serum 例（%）

3 討論

生殖器皰疹在全球多個國家高度流行，我國患病率也在逐年增加，早期診斷并治療，對降低HSV 傳染性和致病性有重要意義［9］。目前HSV 感染的實驗室診斷方法主要有細胞培養、免疫熒光、血清學實驗和核酸檢測［10］。細胞培養法是檢測HSV 感染的金標準［11］，但因培養周期長且要求條件高，不適合實驗室開展。血清HSV 特異性抗體檢查可檢測HSV?1/2，對無皮損的患者有輔助診斷意義［12?13］。PCR 檢測HSV 有較高的敏感性和特異性，是歐洲實驗室和美國疾病預防控制中心（CDC）推薦的方法［14?15］，在我國實時熒光PCR 檢測也逐步推廣應用。

本文通過實時熒光PCR 檢測對488 例受檢者進行HSV?1/2 DNA 檢測，發現生殖器皰疹的感染以HSV?2 感染為主，但HSV?1 感染引起的生殖器皰疹仍占一定比例（4.26%）。何紹等［16］報道79 例生殖器潰瘍患者中HSV?2 感染占92.4%（73/79），HSV?1 型感染占7.6%（6/79）。王蘭芳等［17］報道在59 例PCR 檢出HSV 陽性樣本中，HSV?2 感染患者46 例，占89.8%，HSV?1 感染患者6 例，占10.2%。KORTEKANGAS 等［18］報道芬蘭性病門診就診者中，HSV?2 感染的患者占66.4%（557/839），HSV?1感染患者占33.6%（282/839）。MTSHALI 等［19］研究發現女性宮頸陰道脫落細胞中，HSV?1 檢出率為9.6%（24/251）。由此可見，生殖器皰疹主要由HSV?2 感染引起［1］，但是近年來隨著性生活方式的多樣化，HSV?1 引起生殖器皰疹的現象不容忽視。因此，在進行實驗室檢查時，同時進行HSV?1/2 檢查可有效避免HSV?1 感染導致的生殖器皰疹的漏檢。

本研究顯示女性HSV DNA 陽性檢出率高于男性。蘇宗義等［20］報道200 例皮膚性病就診者中，女性HSV 陽性檢出率為38.06%（51/134），男性陽性檢出率為22.7%（15/66），女性HSV 陽性檢出率高于男性。世界衛生組織統計，2016年婦女HSV?2 患病率高于男性，尤其是非洲地區的婦女［19］，與本報道的結果相符，可能與女性的生理構造相對男性易感HSV［21］，也可能與男性發生高危性行為后主動到醫院篩查就診有關。

本研究通過不同取材部位的HSV 檢查發現，在男性包皮龜頭、陰莖、陰囊/陰阜、尿道拭子、肛周、臀等解剖學部位的陽性樣本中，包皮龜頭的陽性率最高，為70.59%（60/85），在女性外陰、宮頸/陰道、肛周、臀等解剖學部位的陽性樣本中，外陰的陽性率最高，為73.21%（41/56）。CONNOLLY 等［22］報道HSV 的入侵與不同細胞類型相關，本研究發現生殖器皰疹好發于男性包皮龜頭和女性外陰，可能與HSV 對此部位的細胞具有親和性有關。

HSV 感染后約1 周可檢測到IgM 抗體，表明存在HSV 的新發感染［23］；HSV?2 IgG 產生較IgM 抗體遲，對早期診斷幫助不大，但持續時間較長［23?24］。核酸檢測是生殖器皰疹確診的依據，本研究68 例HSV?2 DNA 陽性的患者中，HSV?2 IgM 陽性檢出率為5.88%（4/68），提示HSV?2 IgM 輔助診斷價值較低；HSV?2 DNA 陽性而HSV?2 IgG 陰性的患者有23例，提示可能為初發性生殖器皰疹；HSV?2 DNA 陽性且HSV?2 IgG 陽性的患者有45 例，提示可能為復發性生殖器皰疹。

本研究為回顧性分析，部分臨床信息不完善的患者被剔除，入組標本數量不夠多，因此本研究有一定的局限性。安全套可以保護包皮龜頭和外陰的直接接觸，正確和堅持應用乳膠安全套，可在一定程度上減少HSV 傳播的風險，因此，在性病門診，醫學咨詢和安全套的宣教對預防和控制HSV傳播也有重要意義。

綜上所述，廣州地區性病門診就診者生殖器皰疹患病率較高，且以HSV?2 感染為主，但HSV?1感染也不可忽視，HSV?1/2 DNA 聯合檢測可避免漏診，男性包皮龜頭和女性外陰是生殖器皰疹的好發部位。HSV 核酸和IgG 抗體聯合檢測有助于鑒別初發和復發性生殖器皰疹。