乙肝相關性肝癌患者血清異常凝血酶原、甲胎蛋白和甲胎蛋白異質體表達水平及臨床意義

蘭劍鋒，張應泉，曾麗嬌

1.深圳市第三人民醫院(南方科技大學附屬第二醫院)感染病國家臨床重點專科，廣東 深圳 518112；2.深圳市第三人民醫院病案統計圖書科，廣東 深圳 518112

當前，隨著人們生活壓力逐漸增大以及不健康生活方式的常態化，肝癌的發病率呈直線上升趨勢[1-2]。目前，原發性肝癌的發病機制尚不明確，但有關研究表明，其發生、發展與肝炎病毒感染關系密切，特別是乙型肝炎病毒，可以從多方面對原發性肝癌的發生、發展及預后產生影響。相關調研數據表明，我國絕大多數的原發性肝癌是由乙型肝炎病毒感染所致，而不同病因導致的肝癌則呈現出不同的臨床特征，相應的診斷標準也存有差異[3-4]。傳統的診斷方法主要依賴病理學檢查及影像學監測，準確性不足且存有缺陷。由于乙型肝炎病毒可以與干細胞整合，使細胞免疫功能受抑制從而損傷肝組織，最終導致細胞癌變。而肝癌早期癥狀并不明顯，確診時往往已處于中晚期，目前臨床對于肝癌治療并無特效手段，預后不理想，死亡率較高[5-6]。因此，進行有效的早期診斷，對于把握最佳治療時機，提升患者生存率具有重要意義。本研究通過對比檢測乙肝病毒感染相關肝癌患者和慢性肝硬化患者的血清異常凝血酶原(serum abnormal prothrombin，DCP)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)、甲 胎 蛋 白 異 質 體(alpha fetoprotein heterogeneity，AFP-L3)水平，以探究其診斷意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年1月至2020年12月深圳市第三人民醫院接診的60例乙肝病毒感染相關肝癌患者作為研究組，另選取同期在本院治療的60例慢性肝硬化(排除乙肝病毒感染)患者作為對照組。本研究的病例選取標準及評判標準均根據中華醫學會肝膽科分會制定的診斷標準[7]進行。納入標準：①年齡＜75歲者；②診療依從性良好，能夠配合各項診療者；③精神狀況良好，能夠正常進行溝通、交流者。排除標準：①需要復雜的全面監測和處理的嚴重心肺疾病者；②嚴重肝腎功能不全或衰竭者；③有顯著呼吸系統疾病患者，最近患有呼吸道感染有明顯發熱、喘息、鼻塞和咳嗽者；④有精神類疾病者。對照組中男性43例，女性17例；年齡45～73歲，平均(62.2±5.3)歲；研究組中男性44例，女性16例；年齡44～74歲，平均(63.6±4.9)歲。兩組患者的性別、年齡比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，患者及家屬均知情并簽署同意書。

1.2 觀察指標與檢測方法 (1)比較兩組患者的血清異常凝血酶原(DCP)、甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白異質體(AFP-L3)水平。采用酶聯免疫吸附試驗檢測兩組患者DCP、AFP、AFP-L3表達水平，試劑盒Human DCP ELISA kit、Human AFP-L3 ELISA kit、Human AFPELISA kit均采購自美國rapidbio公司。(2)采用診斷試驗評價法[8]分析DCP、AFP、AFP-L3單獨和聯合檢測診斷乙肝病毒感染相關肝癌的敏感性、特異性、符合率和Youden指數。(3)采用Kaplan-Meier分析法分析患者AFP、AFP-L3、DCP表達與預后相關性情況，并繪制Kaplan-Meier曲線。

1.3 統計學方法 應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，采用診斷試驗評價法進行診斷效能評價，采用Kaplan-Meier分析AFP、AFP-L3、DCP與疾病預后之間相關性，并繪制Kaplan-Meier曲線，均以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的DCP、AFP、AFP-L3水平比較 研究組患者的DCP、AFP、AFP-L3水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的DCP、AFP、AFP-L3水平比較(±s)

表1 兩組患者的DCP、AFP、AFP-L3水平比較(±s)

組別研究組對照組t值P值例數60 60 DCP(mAU/mL)2 153.7±175.7 32.6±4.7 93.478＜0.05 AFP(ng/mL)2 759.6±264.4 58.4±12.3 79.049＜0.05 AFP-L3(%)11.6±4.6 4.8±1.2 11.079＜0.05

2.2 DCP、AFP、AFP-L3診斷乙肝相關性肝癌的效能 經診斷試驗評價法評價，DCP、AFP、AFP-L3兩者或三者的聯合檢測敏感性、特異性、符合率均明顯高于單獨檢測，且三者聯合檢測敏感性、特異性、符合率最高，見表2。

表2 兩組患者DCP、AFP、AFP-L3診斷效能評價

2.3 AFP、AFP-L3、DCP與疾病預后的相關性 經Kaplan-Meier分析法對預后相關性分析發現，隨著AFP、AFP-L3、DCP蛋白表達升高，患者預后逐漸變差，見圖1～圖3。

圖1 AFP與疾病預后的相關性

圖2 AFP-L3與疾病預后的相關性

圖3 DCP與疾病預后的相關性

3 討論

在我國，因乙型肝炎攜帶者基數很大，超過90%的原發性肝癌患者主要為乙型肝炎病毒感染。在乙肝病毒持續復制作用下，會導致肝細胞壞死、腹腔積液、肝硬化、肝功能衰竭，最終引發惡變，嚴重威脅患者的生命健康安全[9-10]。臨床研究顯示，肝癌往往起病隱匿，早期缺乏明顯癥狀，當病情持續惡化發展至中晚期時，已經失去了最佳的治療時機，無法再行肝移植或外科切除術，只能通過保守治療延長患者生存期[11-12]。因此，通過研究監測肝癌發病相關生物大分子標志物，強化早期篩查診斷，避免漏診誤診，對于提升患者生存率，改善預后至關重要。

相關研究表明，作為DNA病毒，乙型肝炎病毒可以在HBX蛋白的作用下促使基因異常表達，或不依賴肝硬化途徑直接與宿主基因進行整合從而導致細胞發生癌變。同時，由于部分患者存在細胞免疫功能抑制，導致肝癌患者體內的乙型肝炎病毒無法徹底清除，致使病情加劇惡化[13-14]。有關研究表明，作為惡性腫瘤病理過程相關的生物大分子，DCP、AFP和AFP-L3聯合檢測結果可作為肝癌早期診斷的重要標志物[15]。在本研究中，DCP、AFP、AFP-L3兩者或三者聯合檢測敏感性、特異性、符合率均明顯高于單獨檢測，在預后性分析發現，隨著DCP、AFP、AFP-L3蛋白表達升高，患者預后逐漸變差。與上述研究相符。

DCP是維生素K缺乏或拮抗劑-Ⅱ誘導的蛋白質，區別于正常凝血酶，因其氨基末端缺乏Y-氨基谷氨酸，使其無法和鈣離子進行結合[16]。臨床研究表明，乙型肝炎病毒感染的肝癌患者血清中的DCP水平顯著升高。已有研究認為，由于肝癌細胞的微粒體內維生素K依賴性羧化體系功能障礙，導致羧化酶活力降低，谷氨酸羧化不全，從而造成大量DCP形成。DCP對原發性肝癌有較高特異性，因此，假陽性的概率極低，診斷有效指數相對較高[17]。本研究中，乙肝病毒感染相關肝癌患者DCP水平明顯高于慢性肝硬化患者，符合相關理論研究。AFP是胚胎時期肝臟合成的糖蛋白，在成年人體內含量極低。乙型肝炎病毒感染的肝癌患者血清中的AFP水平則呈急劇上升趨勢。但有關研究表明，當發生急、慢性肝炎及肝硬化時，患者血清AFP水平也會升高，因此，APF的應用受限于其低敏感性和高特異性[18]。本研究中，乙肝病毒感染相關肝癌患者AFP水平明顯高于慢性肝硬化患者，與上述理論相符。AFP-L3僅由肝癌細胞產生，是原發性肝癌患者血清中AFP的主要形式，與扁豆凝集素有很強的結合力。本研究中，乙肝病毒感染相關肝癌患者AFP-L3水平明顯高于慢性肝硬化患者，與李惠軍等人的臨床研究結果相符[19]。但本次研究的研究對象選取量有限，研究結果存在一定偶然性，缺乏一定的嚴謹性和客觀性，在下一步研究中，會進一步擴大樣本數量，使研究結果更加科學嚴謹。

綜上所述，相對于單獨診斷，DCP、AFP、AFP-L3聯合診斷可有效提高乙肝相關性肝癌的診斷敏感性、特異性和符合率，具有臨床應用價值。