ApoE基因多態性與大動脈粥樣硬化型腦梗死預后的相關性研究

陳貴發 李立新 張翠宏 羅文東

廣東省惠州市第三人民醫院老年醫學科 516001

載脂蛋白E(ApoE)是一種多態性蛋白，主要是參與脂蛋白的轉化與代謝過程[1]。這種堿性蛋白有3個等位基因異構體，即E2、E3和E4[2]，在對載脂蛋白E的多態性研究發現，其多態性是動脈粥樣硬化早期及發展過程中個體差異的主要原因，尤其是E4等位基因的一般作用是可以顯著地升高健康人的總膽固醇濃度，從而極易形成動脈粥樣硬化，誘發動脈粥樣硬化性腦梗死[3]。因此，本文分析ApoE基因多態性與老年(≥65周歲)大動脈粥樣硬化型腦梗死發病的嚴重程度及預后的相關性，旨在為腦梗死的治療提供有利參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2019年1月—2020年3月收治的60例老年大動脈粥樣硬化型腦梗死患者設為老年梗死組，另選60例性別年齡相匹配的正常體檢人員設為正常體檢組。老年梗死組：男40例，女20例；年齡65～86歲，平均年齡(64.2±5.4)歲；所有患者均經CT、MRI檢查確診為動脈粥樣硬化型腦梗死，且均未患有糖尿病。正常體檢組：男35例，女25例；年齡66～88歲，平均年齡(68.8±6.6)歲。兩組在年齡及性別等一般資料上對比，無顯著差異(P>0.05)，有可比性。

1.2 方法 (1)基因抽查：首先所有的患者均于清晨空腹進行靜脈采血，采取3ml外周靜脈血后及時對其進行基因的抽取。(2)PCR擴增：依據相關的文獻設計引物序列，即上游引物：5’-TAA GCT TGG CAC GGC TGT CCA AGG A-3’，下游引物：5’-ACA GAA TTC GCC CCG GCC TGG TAC A-3’，隨后在反應總體積為50μl下進行擴增，在95℃預變性10min后在此溫度下變性1min，1min后轉為60℃退火1min，退火后再在75℃下延伸1min的循環條件下繼續擴增33個循環，循環結束后再在72℃下延伸10min[4-5]。隨后將擴增的產物通過2%瓊脂糖凝膠電泳，隨后使用GeL Doc1000紫外線檢測系統對其測試電泳結果。(3)基因的判定：PCR擴增的產物采取使用限制性內切酶Hin6I進行酶切得到酶解產物，隨后采用10%的聚丙烯酰胺凝膠對酶解產物進行電泳[6]，分析其產物基因片段，即：E2中有36、16、91、18、83bp 5個片段，E3中有36、16、91、18、48、35bp 6個片段，E4中有36、16、19、72、18、48、35bp 7個片段。

1.3 觀察指標 采用RCR-RFLP方法對于兩組患者的ApoE基因型進行檢測，并對比兩組差異。隨后將老年梗死組進行NIHSSS評分，按照評分數值分為高危組與低危組，各30例，對比高危組和低危組患者的ApoE基因型情況。

1.4 統計學方法 使用SPSS20.0軟件分析數據，計數資料采用率(%)表示，行χ2檢驗，以P<0.05作為差異有統計學意義。

2 結果

在ApoE3/4基因型頻率與ε4等位基因頻率中，老年梗死組明顯高于正常體檢組，組間差異明顯(P<0.05)；而在高危組與低危組患者的對比中，兩組的基因型與等位基因頻率差別不大(P>0.05)。詳情見表1、表2。

表1 各組患者的ApoE基因型效比較[n(%)]

表2 各組患者的ApoE等位基因頻率比較[n(%)]

3 討論

動脈粥樣硬化性腦梗死也被稱為動脈硬化血栓形成性腦梗死，主要是由于腦部動脈粥樣硬化和血栓形成，使得腦血管管腔狹窄或閉塞，導致急性腦供血不足，從而引起的局部腦組織缺血性壞死[7]。患者在病發后容易出現癱瘓、失語等腦局灶性損害的癥狀，因此該疾病也被稱為是缺血性腦血管疾病，主要是在老年人群體中較為多發。臨床研究發現，形成動脈粥樣硬化性腦梗死的危險因素較多，本文針對ApoE基因多態性是否與其具有相關性進行了深入的研究，期望從中探尋這兩者之間的相關性，從而為對動脈粥樣硬化型腦梗死發病的原因及如何進行有效治療尋找突破口，從而更好地在疾病發生的早期進行預防。

ApoE基因是人體血液血漿中一種重要的組成成分，主要是由299個氨基酸殘基組成的一種富含精氨酸的堿性蛋白，在人體血漿中的極低、中、高密度脂蛋白和乳糜微粒中均含有該基因成分，而ApoE基因是LDL受體的配體，同時還是肝細胞CM殘粒受體的配體，從而其具有轉運膽固醇、調節脂類代謝的重要作用，因此其與血脂中的蛋白代謝具有十分重要的意義。有研究表明，動脈粥樣硬化與血脂代謝是否正常具有相關性，而ApoE基因多態性是決定個體血脂水平與動脈粥樣硬化之間存在密切相關性的原因，并且ApoE基因中的E4更加是造成動脈粥樣硬化型腦梗死的一大危險因素，主要是由于其能夠讓小腸吸收膽固醇，導致血漿中的膽固醇含量顯著增高，而人體內的膽固醇無法有效的排出體外，從而造成人體內膽固醇含量較高，患者的血脂代謝異常，導致大動脈粥樣硬化型腦梗死疾病的發作。并且還有研究報告顯示，ApoE基因的生理功能具有參與免疫調節劑神經組織的再生作用，且在對其的研究中發現ApoE基因中的ε3和ε4對神經元細胞具有一定的影響性，主要表現為ε3能夠對神經元細胞的生長產生促進作用，從而減少了神經元細胞產生過多的分支，而ε4則具有相反的作用，會抑制神經元細胞的生長。因此，ApoE基因在人體中的作用具有多樣性，不同的基因型和等位基因頻率會在人體中形成不同的生理性作用，這也表示針對動脈粥樣硬化型腦梗死而言，不同等位基因的人群在該疾病的患病率上具有差異性。由于ApoE基因多態性具有十分重要的臨床研究意義，因此在對其進行分析研究后將其結果運用在實際臨床中能夠對臨床疾病的診斷及尋求新的治療方式具有一定的幫助性。

本文結果顯示，在ApoE3/4基因型頻率與ε4等位基因頻率中，老年梗死組明顯高于正常體檢組，組間差異明顯(P<0.05)；該結果同Jin等的實驗結果具有一致性[8]，表明ε4基因在老年大動脈粥樣硬化型腦梗死疾病中屬于遺傳易感因子。而在高危組與低危組患者的對比中，兩組的基因型與等位基因頻率差別不大(P>0.05)，表明ApoE基因型及基因多態性與老年大動脈粥樣硬化型腦梗死患者的NIHSS評分之間不具有相關性。

綜上所述，在老年大動脈粥樣硬化型腦梗死的發病中，ApoE基因多態性與其相關性較為明顯，但是與患者的預后關聯性不大。