Hcy相關酶基因多態性與老年癲癇患者的相關性研究

馬 婷

黑龍江省佳木斯市中心醫院神經內一科 154002

癲癇為神經科常見疾病，在我國約有1 000余萬的癲癇患者，且發病率逐年增加。該病具有病程長、易復發等特點，為此早期發現癲癇在臨床上具有重要意義[1]。癲癇的病因比較復雜，包括吸煙、肥胖、高血壓、高血脂、糖尿病、胰島素抵抗等[2-3]。癲癇也屬于多基因遺傳病，遺傳因素是該病發生的主要影響因素，而基因因素已經成為研究癲癇發病機制的研究熱點[4]。同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)在機體內主要以蛋氨酸的代謝中間產物的形式，在Hcy的代謝方式當中，任意一類酶或者輔因子出現不足或者異常，都有可能導致機體出現高同型半胱氨酸血(Hyperhomocystinemia，HHcy)[5]。Hcy的代謝相關酶所引起酶活性的減弱可能是導致HHcy的重要原因之一，包括胱硫醚合成酶(Cystathioninep-synthase，CBS)、亞甲基四氫葉酸還原(Methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)等[6-7]。本文探討與研究了Hcy相關酶基因多態性與老年癲癇患者的相關性，旨在從遺傳學角度探討老年癲癇的病因及發病機制，為老年癲癇的防治提供理論依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2019年11月—2020年11月在本院神經內科就診的老年癲癇患者78例作為癲癇組。選擇同期在本院門診體檢的正常老年人群78例作為對照組。納入標準：年齡60～75歲；既往未服用任何抗癲癇藥物；醫院倫理委員會批準了此次研究；患者同意參與研究并簽署知情同意書；均為漢族人；居住在本地區≥3年。排除標準：合并惡性腫瘤；伴有遺傳代謝性疾病；伴有其他基因疾病患者；長期或近2周內服用過影響Hcy的藥物患有心腦血管、內分泌代謝、血液或免疫相關性疾病。

兩組的性別、年齡、吸煙、飲酒、收縮壓、舒張壓等對比差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。癲癇組患者平均發作頻率(4.14±0.12)次/月，發作類型：部分性運動發作34例、部分性感覺發作36例、癡笑發作8例。

表1 兩組一般資料對比

1.2 CBS基因多態性檢測 抽取所選患者清晨空腹外周靜脈血3ml，EDTA抗凝后儲存于低溫冰箱保存。提取血液中的DNA(上海生工公司提供提取試劑盒)，采用Bio-Rad CFX manager軟件對CBS C1080T基因的基因型PCR擴增結果進行分析。

1.3 評價指標 (1)檢測與記錄CBS C1080T基因型和等位基因分布情況。(2)取1.2中的血液學樣本，離心后分離上層血清，采用酶聯免疫法檢測血清Hcy含量。

1.4 統計學方法 本次研究所采集的數據都使用SPSS19.00軟件進行分析，通過Hardy-weinberg平衡檢驗基因型頻率排列，計量資料用(均數±標準差)表示，采用t檢驗，計數資料用率(%)表示，采用χ2檢驗，借助Pearson分析與Logistic回歸法完成相關性與影響因素分析，檢驗水準為α=0.05。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清Hcy值對比 癲癇組的血清Hcy值為(18.22±3.32)μmol/L，高于對照組的(11.98±2.77)μmol/L，差異有統計學意義(t=7.585，P=0.010)。

2.2 CBS C1080T基因型和等位基因分布對比 CBS C1080T基因多態性分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。癲癇組的CBS C1080T CC基因型高于對照組，等位基因C頻率高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組CBS C1080T基因型和等位基因分布對比(n)

2.3 相關性分析 在156例入選者中，Pearson分析顯示CBS C1080T基因型CC、等位基因C、Hcy與癲癇存在相關性(P<0.05)。見表3。

表3 Hcy相關酶基因多態性與老年癲癇患者的相關性(n=156)

2.4 影響因素分析 多元Logistic回歸分析顯示CBS C1080T基因型CC、等位基因C、Hcy為導致老年癲癇發生的重要影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響老年癲癇發生的多因素分析(n=156)

3 討論

癲癇為神經科常見疾病，抗癲癇藥物能短期控制患者的癥狀，但是需要長期服用藥，對于患者的依從性比較高，且也有一定的不良反應[8]。Hcy是蛋氨酸代謝過程中的一個重要中間產物，其包括兩種代謝途徑，其可通過葉酸循環途徑，以甲基四氫葉酸為甲基供體，甲基化為L-蛋氨酸，其次也可通過轉硫過程形成代謝產物，進入至三羧酸循環中，若兩條代謝途徑受到影響時，會使得Hcy在血液中濃度升高，高Hcy與多種疾病的病理過程密切相關，包括阿爾茲海默病、動脈粥樣硬化、神經管畸形、帕金森病等相關，而降低Hcy濃度可減少癲癇發作次數，表明其可能與癲癇發病、預后密切相關[9]。而其對癲癇的作用機制尚不明確，因此本文分析了Hcy相關酶基因多態性與老年癲癇患者的相關性，探討癲癇發作機制，為臨床癲癇治療提供依據。本研究顯示癲癇組的血清Hcy值高于對照組(P<0.05)。研究也表明Hcy能促進內皮細胞、平滑肌細胞分泌大量炎癥因子，從而使得單核及中性粒細胞黏附至血管內皮細胞，促成炎性反應，造成癲癇的發生[10]。

血漿Hcy濃度會受到營養狀況、遺傳因素、藥物、肝腎功能及某些疾病時機體代謝狀況的影響，其中遺傳因素多由MTHFR中的A1298C、C677T、T1317C及CBS基因的G919A、T833C、T27796C、C699T、T1080C等突變導致。而遺傳因素在癲癇的發生發展中可能起著重要作用，CBS是Hcy代謝途徑中的關鍵酶。CBS是一種血紅素蛋白，位于染色體21q22.3，基因全長28 046bp，可編碼551個氨基酸。CBS可將Hcy催化為胱硫醚，可調節Hcy由胞內到胞外的釋放[11]。本研究顯示癲癇組的CBS C1080T CC基因型高于對照組(P<0.05)，等位基因C頻率高于對照組(P<0.05)。從機制上分析，等位基因上T突變是一種次要等位基因C，形成的CBS C1080T對于CBS具有一定影響，使其更好的釋放，進而促進炎癥反應，從而誘發癲癇的發生[12]。本研究Pearson分析顯示CBS C1080T基因型CC、等位基因C、Hcy與癲癇存在相關性(P<0.05)；多元Logistic回歸分析顯示CBS C1080T基因型CC、等位基因C、Hcy為導致老年癲癇發生的重要影響因素(P<0.05)。C1080T是CBS基因上的一種非同義SNP，在主要等位基因T發生改變，變成次要等位基因C時，從而使得其中1080位置上的編碼氨基酸發生轉變，造成Hcy釋放量增加，并可引起血管內皮細胞受損，進而影響凝血因子的含量和活性，誘發癲癇的發生[13]。本研究也存在一定的不足，只納入了老年患者，也只分析了一個Hcy相關酶基因，將在后續研究中進行探討。

綜上所述，老年癲癇患者伴隨有Hcy的大量釋放，且CBS C1080T基因呈現多態性分布，兩者存在相關性。