腎結(jié)核患者血清和尿液人軟骨糖蛋白-39 表達(dá)水平及其診斷和預(yù)后評(píng)估的價(jià)值

安海霞 李秀君 楊家鑫 陳懷安

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院泌尿外科，河北張家口 075000

腎結(jié)核的臨床癥狀比較復(fù)雜，如膿尿、腰痛、膀胱刺激癥狀以及血尿等，如合并其他器官結(jié)核時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、消瘦等臨床特征。當(dāng)腎結(jié)核發(fā)病比較嚴(yán)重時(shí)，若同時(shí)伴有對(duì)側(cè)[1-2]。腎盂積水，也會(huì)對(duì)患者的腎功能帶來較大影響，甚至引發(fā)尿毒癥。臨床診斷腎結(jié)核的傳統(tǒng)方法則是根據(jù)患者的臨床體征及表現(xiàn)，并進(jìn)行靜脈尿路造影或者尿?qū)嶒?yàn)室抗酸桿菌檢查等[3-4]。人軟骨糖蛋白-39 可存在于多種組織和肝臟組織內(nèi)，參與了多種疾病的進(jìn)展，臨床有研究顯示，與多種惡性腫瘤生存率相關(guān)，屬于組織纖維化標(biāo)志物[5-6]。目前，臨床主要在慢性肝炎、腫瘤疾病中研究人軟骨糖蛋白-39水平情況，在腎臟疾病中研究較少，本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)腎結(jié)核患者血清和尿液人軟骨糖蛋白-39 濃度，探討其在腎結(jié)核診斷和預(yù)后評(píng)估的價(jià)值，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）泌尿外科2019 年5 月—2020 年5 月收治的80 例腎結(jié)核患者作為觀察組，另選取同期我院體檢的50 名健康人群作為對(duì)照組，均經(jīng)過患者知情同意。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：①基礎(chǔ)信息完整，參與整個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟；②尿常規(guī)檢查結(jié)果中血沉指標(biāo)出現(xiàn)變化，尿蛋白、白細(xì)胞及紅細(xì)胞異常，臨床癥狀主要表現(xiàn)為尿頻、尿痛和尿急；③經(jīng)過手術(shù)病理、尿常規(guī)等確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神異常、妊娠期女性及嚴(yán)重心臟病變；②合并尿路感染；③中途因各種原因退出。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 兩組一般資料比較

1.2 研究方法

采集研究對(duì)象清晨首次中段尿標(biāo)本以及血液標(biāo)本，指導(dǎo)其在采集標(biāo)本前需空腹至少10 h。采集病患靜脈血3 mL，將其離心分離處理（3000 r/min，半徑為10 cm），時(shí)間15 min，收集上層血清放于-80℃的冰箱中保存。采集晨起首次中段尿液10 mL，同樣將其放置在3000 r/min 的離心機(jī)中進(jìn)行持續(xù)15 min的離心處理，離心半徑為10 cm，隨后收集上層清液5 mL，并將其置入無菌試管中，并放置在-80℃冰箱中進(jìn)行保存。使用時(shí)需先將標(biāo)本從冰箱中取出，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)每組患者血清標(biāo)本以及尿液標(biāo)本中人軟骨糖蛋白-39 水平，人軟骨糖蛋白-39 試劑盒采購(gòu)至上海一基生物試劑有限公司（貨號(hào)：YJ11081），全部操作均嚴(yán)格依據(jù)試劑盒使用說明進(jìn)行。采集腎結(jié)核手術(shù)后病理組織和病變部位4 周正常組織標(biāo)本，利用免疫組化法SP 法分別檢測(cè)每組患者標(biāo)本組織中人軟骨糖蛋白-39 表達(dá)情況，人軟骨糖蛋白-39 多克隆抗體采購(gòu)至北京百奧萊博科技有限公司（貨號(hào)：K11424-VHX），SP 檢測(cè)試劑盒采購(gòu)至北京索萊寶科技有限公司（貨號(hào)：SP0041）。

1.3 觀察指標(biāo)

①觀察兩組血清以及尿液中人軟骨糖蛋白-39水平。②觀察腎結(jié)核病患病變組織、四周正常組織中人軟骨糖蛋白-39 表達(dá)情況。選擇我院2 名臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)科醫(yī)師進(jìn)行閱片，其中陽性細(xì)胞染色觀察指標(biāo)是：0 分代表未染色；1 分代表呈現(xiàn)淡黃色，2 分代表呈現(xiàn)棕黃色，3 分代表呈現(xiàn)棕褐色[7]。每張切片分別挑選5 份典型高倍鏡視野，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比（所有組織細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占比例）。其記分標(biāo)準(zhǔn)：1 分代表陽性細(xì)胞百分比1%～10%；2 分代表陽性細(xì)胞百分比＞10%～50%；3 分代表陽性細(xì)胞百分比＞50%～80%；4 分代表陽性細(xì)胞百分比＞80%～100%[8]。將染色評(píng)分與陽性細(xì)胞百分比評(píng)分相加來實(shí)施半定量分析，分析標(biāo)準(zhǔn)：0 分代表-；1～2 分代表+；3～5 分代表++；6～7 分代表+++[9]。③比較聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)方法，探討人軟骨糖蛋白-39 的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)。應(yīng)用ROC 曲線分析人軟骨糖蛋白-39、qRT-PCR 對(duì)腎結(jié)核的診斷效能。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組尿液以及血清標(biāo)本中人軟骨糖蛋白-39 水平比較

觀察組尿液以及血清標(biāo)本中人軟骨糖蛋白-39水平高于對(duì)照組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。見表2。

表2 兩組尿液及血清標(biāo)本中人軟骨糖蛋白-39 水平比較（pg/mL，）

表2 兩組尿液及血清標(biāo)本中人軟骨糖蛋白-39 水平比較（pg/mL，）

2.2 不同組織腎結(jié)核病變組織、四周正常組織中人軟骨糖蛋白-39 表達(dá)比較

腎結(jié)核病變組織中人軟骨糖蛋白-39 表達(dá)水平明顯高于四周正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 不同組織腎結(jié)核病變組織、四周正常組織中人軟骨糖蛋白-39 表達(dá)比較[例（%）]

2.3 人軟骨糖蛋白-39、qRT-PCR 對(duì)腎結(jié)核的診斷效能

人軟骨糖蛋白-39 ROC 曲線下面積為0.928（95%CI：0.902，0.971），截取值為0.5631，陽性預(yù)測(cè)值為51.25%（41/80），靈敏度為76.25%（61/80），陰性預(yù)測(cè)值為96.25%（77/80），特異度為93.75%（75/80）。qRT-PCR ROC 曲線下面積為0.793（95%CI：0.741，0.854），截取值為0.5075，靈敏度為83.75%（67/80），特異度為65.00%（52/80），陽性預(yù)測(cè)值為21.25%（17/80），陰性預(yù)測(cè)值為97.50%（78/80）。人軟骨糖蛋白-39 ROC 曲線下面積大于PCR，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=7.591，P ＜0.001）。見圖1。

圖1 人軟骨糖蛋白-39、PCR 的ROC 曲線

3 討論

隨著結(jié)核病發(fā)病率的增加，腎結(jié)核的發(fā)病率也呈現(xiàn)出大幅度上升的趨勢(shì)，但是由于該病在發(fā)病初期沒有較為典型的臨床癥狀，并且聲像圖表現(xiàn)也存在較大的差異，并且很多患者在發(fā)病初期缺乏超聲影像學(xué)的特異性變化[10-11]。

人軟骨糖蛋白-39 由單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化產(chǎn)生，可由多種細(xì)胞分泌，是一種急、慢性炎癥和組織重塑的標(biāo)志物，活化的巨噬細(xì)胞具有分泌人軟骨糖蛋白-39 的功能，人軟骨糖蛋白-39 通過干預(yù)血管平滑肌細(xì)胞移和重組來調(diào)整節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)[12-13]。人們最早在牛的乳汁分泌物中發(fā)現(xiàn)，有研究報(bào)道人軟骨糖蛋白-39 在各個(gè)正常組織中表達(dá)，包括脂肪、腎上腺、骨髓、骨骼、肝、腎、胃腸道、淋巴、神經(jīng)組織、卵巢等[14-15]。在人不同炎癥組織、巨噬細(xì)胞亞群、血管平滑肌細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)重塑的血管平滑肌細(xì)胞中都可發(fā)現(xiàn)人軟骨糖蛋白-39 的存在[16-17]；人軟骨糖蛋白-39 生理機(jī)制較為復(fù)雜，目前研究尚未完全闡明其作用機(jī)制[18]。研究顯示，健康人群血漿中人軟骨糖蛋白-39 雖然存在，但濃度較為固定，不受生理活動(dòng)影響[19]。也有研究顯示[20]，人軟骨糖蛋白-39 其生理作用類似于胰島素樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1），以一種劑量依賴方式刺激組織細(xì)胞如成纖維細(xì)胞、滑膜細(xì)胞及軟骨細(xì)胞等人體的連接組織細(xì)胞，可與IGF-1 發(fā)生協(xié)同作用。此外，人軟骨糖蛋白-39 還在細(xì)胞外基質(zhì)形成和基質(zhì)重構(gòu)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。可以抑制成纖維細(xì)胞及軟骨細(xì)胞中腫瘤壞死因子α 及白細(xì)胞介素（IL）-1 誘發(fā)的p38 和SAPK/JNK MAPKS 通路，從而減少IL-8 及基質(zhì)金屬蛋白酶，這一過程由PI3K 調(diào)節(jié)[21-22]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血清以及尿液標(biāo)本中人軟骨糖蛋白-39水平高于對(duì)照組（P ＜0.05），腎結(jié)核病變組織中人軟骨糖蛋白-39 表達(dá)水平明顯高于四周正常組織（P ＜0.05），人軟骨糖蛋白-39 ROC 曲線下面積大于PCR（P ＜0.001）。分析原因：腎結(jié)核涉及包括炎癥、氧化應(yīng)激、多種細(xì)胞因子的作用及信號(hào)級(jí)聯(lián)、細(xì)胞凋亡、成纖維細(xì)胞增殖和活化等多種因素，使間質(zhì)細(xì)胞增殖，膠原等細(xì)胞外基質(zhì)合成增多，降解減少[23-24]。與其他臟器結(jié)核具有相同特征，人軟骨糖蛋白-39 是否在腎結(jié)核中發(fā)揮一定作用，尚鮮見報(bào)道。因此，在腎結(jié)核患者尿液和血清中人軟骨糖蛋白-39 水平顯著高于普通人群。本研究中，腎結(jié)核患者病變組織中人軟骨糖蛋白-39水平顯著高于四周正常組織（P ＜0.05）。這可能與人軟骨糖蛋白-39 參與腎結(jié)核的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。人軟骨糖蛋白-39 其生理作用類似于IGF-1，故提示人軟骨糖蛋白-39 可能參與了腎結(jié)核的發(fā)生發(fā)展，為促纖維化因子，其可能的作用機(jī)制如下：以一種劑量依賴方式刺激組織細(xì)胞如成纖維細(xì)胞、滑膜細(xì)胞及軟骨細(xì)胞等人體的連接組織細(xì)胞。可與IGF-1 發(fā)生協(xié)同作用[25]。人軟骨糖蛋白-39 還能調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞及滑膜細(xì)胞的有絲分裂，這一過程主要是通過磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）1、ERK2 和蛋白激酶B，激活MAPK 信號(hào)通路和磷脂酰肌醇3-激酶信號(hào)通路。

綜上所述，腎結(jié)核患者人軟骨糖蛋白-39 水平成顯著升高趨勢(shì)，通過了解患者機(jī)體內(nèi)人軟骨糖蛋白-39水平可對(duì)腎結(jié)合進(jìn)行初步診斷。