Ki-67在甲狀腺微小乳頭狀癌中的表達差異及臨床意義

吳 弢

（福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350005）

甲狀腺微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinomas，PTMC）指的是腫瘤直徑≤1 cm的甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）。隨著超聲影像技術(shù)的廣泛普及，病理診斷技術(shù)的不斷提高，使PTMC的診斷率不斷提高。目前，PTMC的發(fā)病率增加速度也在不斷提高。Ki-67是臨床病理檢測中常見的細胞因子，大量的研究已經(jīng)證實Ki-67是一種與惡性腫瘤的預后情況相關(guān)的細胞核增殖抗原，因其操作方法簡單、特異性高，已應用于乳腺癌、前列腺癌及胃腸道惡性腫瘤等的臨床實踐中[1-2]。而Ki-67在PTMC中的表達目前仍不明確。因此，本研究探討Ki-67在不同PTMC中的表達差異及其臨床意義，為PTMC患者的預后評判及術(shù)后內(nèi)分泌治療提供一定的參考價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年1月1日至2019年12月31日福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院頸部甲狀腺乳腺外科的PTMC患者的病歷資料。納入標準：①初次行甲狀腺手術(shù)的患者。②術(shù)后石蠟病理結(jié)果確診為單病灶的PTMC。③患者均行Ⅳ區(qū)或行頸側(cè)淋巴結(jié)清掃術(shù)。排除標準：①既往曾有放射史者。②合并其他惡性腫瘤患者。共收集PTMC患者病歷資料124例，其中男性37例，女性87例；年齡＜55歲的86例，≥55歲的38例；腫瘤直徑＜0.5 cm的43例，≥0.5 cm的81例；包膜侵犯的31例，無包膜侵犯的93例；有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的55例，無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的69例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色 采用Envision兩部法檢測癌灶中Ki-67的表達情況，具體方法如下：選取符合要求的組織蠟塊切成厚度4 μm的切片。繼續(xù)進行烤片、脫蠟、無水乙醇水化、修復液修復，將3%H2O2滴于組織上避光封閉10 min。隨后用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗玻片，滴加小鼠抗人Ki-67單克隆抗體（一抗），37 ℃孵育120 min，再用PBS沖洗，滴加增強劑，37 ℃孵育。用PBS沖洗，滴加Evension聚合物（二抗），37 ℃孵育30 min。用PBS液沖洗3次。滴加2滴顯色液，等待5 min，清水沖洗終止顯色。切片繼續(xù)經(jīng)過復染，返藍，再進行脫水、透明、封片。

1.2.2 結(jié)果的判讀 采用Ki-67的增殖指數(shù)為標準。組織切片的細胞核中染色為淡黃至棕黃色定義為陽性細胞，以高倍顯微鏡中陽性細胞所占的百分比例統(tǒng)計分析，即Ki-67的增殖指數(shù)。將Ki-67增殖指數(shù)＞3%定義為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67在PTMC組織中的陽性表達 124例PTMC患者中Ki-67陽性患者90例，Ki-67陽性表達率72.58%。Ki-67陽性細胞呈淡黃至棕黃色（圖1）。

圖1 Ki-67在PTMC組織中的陽性表達（免疫組化染色，×40）

2.2 124例PTMC患者癌灶組織中Ki-67的表達情況 性別、年齡、腫瘤直徑的PTMC患者的癌灶中Ki-67陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；有包膜侵犯、有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTMC患者癌灶中Ki-67陽性表達率明顯高于無包膜侵犯、無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 124例PTMC患者癌灶組織中Ki-67的表達情況

3 討 論

在病理診斷上，免疫組織化學技術(shù)與傳統(tǒng)的HE染色技術(shù)相比較而言，在形態(tài)學的診斷上具有簡便性、直觀性等不可比擬的優(yōu)勢，還具有一定的特異性。采用免疫組織化學技術(shù)在臨床上明顯提高了PTMC的病理診斷的效率和準確率，更有助于疾病的鑒別診斷。而Ki-67特異性的定位于細胞核內(nèi)，是細胞復制過程中所必需的一種蛋白質(zhì)，其作用主要與核糖體RNA的轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)，它是出現(xiàn)在除細胞靜止期以外的其他各期（包括G1、S、G和M期）的細胞復制、增殖。只有當細胞處于活躍的復制、增殖的細胞周期階段時，細胞核才能被Ki-67單克隆抗體染色，而處于靜止期的則不會被染色。因此，病理診斷中可以把Ki-67作為一個細胞復制、增殖的重要標志物。

黃婷等[3]的研究表明，Ki-67在前列腺惡性腫瘤手術(shù)或活檢標本中有明顯的表達，對病理診斷及預后判定有一定指導意義。劉志文等[4]的研究中指出，Ki-67表達高低與晚期宮頸癌新輔助化療的效果密切相關(guān)，對于Ki-67高表達的晚期宮頸癌患者可明顯從新輔助化療中獲益，而對于低表達者，相對從新輔助化療獲益少，則應選擇獲益較多的手術(shù)或者放療，因而Ki-67的表達情況能指導晚期宮頸癌患者治療方案的制訂。在多發(fā)性骨髓瘤患者研究中，史青林等[5]報道Ki-67高表達患者對不同的治療方案效果均較差、生存期短。朱振成等[6]的研究證實Ki-67在膽囊癌組織中有明顯的高表達，而在正常的組織中基本不表達，田霧等[7]的研究則進一步指出Ki-67的表達情況與預測患者膽囊癌的發(fā)生率，判斷膽囊癌的生存率、5年生存時間密切相關(guān)。劉明劍和李文娟[8]的研究也表明Ki-67高表達的結(jié)腸癌患者容易出現(xiàn)復發(fā)、轉(zhuǎn)移，預后相對較差。袁喜先等[9]證實Ki-67在分化程度差的結(jié)腸癌中表達較高，且高表達的患者中常存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及周圍組織侵犯。何小平等[10]的研究還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)ROC曲線分析，Ki-67在預測食管惡性腫瘤的發(fā)生有一定的意義。可見Ki-67表達的高低與前列腺癌、宮頸癌、血液腫瘤及食管胃腸道惡性腫瘤等的分化程度、浸潤、復發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，已被廣泛應用于惡性腫瘤的分期、治療方案的制訂以及遠期預后評價。

Ki-67的表達情況在乳腺癌的研究及臨床應用中最為深入，而近年St.Gallen乳腺癌會議中各國專家已經(jīng)明確推薦將Ki-67應用于乳腺癌分型、治療方案的制訂及預后的判斷中，將Ki-67＞14%者定義為高表達，相對復發(fā)風險高、預后較差。大量的國內(nèi)外研究也已經(jīng)證實，Ki-67可作為乳腺癌新輔助化療后評估治療效果的指標之一，有助于臨床診療方案的制訂[11]。

本研究結(jié)果顯示，PTMC患者中有包膜侵犯者Ki-67陽性率為87.10%，高于無包膜侵犯患者的67.74%，有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTMC 患者Ki-67陽性率為85.45%，高于無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的62.32%，表明在PTMC患者中Ki-67的表達高低與腫瘤分化程度、增殖速度有關(guān)，在病理診斷過程中適當?shù)脑黾覭i-67指標檢測可以增加診斷的準確度、特異率和客觀性。Ki-67高表達，一定程度上反映PTMC患者的腫瘤細胞分化程度差、增殖快，可能具有較強的侵襲能力，更容易出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預后差，更容易出現(xiàn)復發(fā)、轉(zhuǎn)移。Ki-67的表達情況為患者術(shù)后內(nèi)分泌治療方案的制訂提供一定的參考價值，Ki-67高表達的患者，術(shù)后監(jiān)測促甲狀腺素水平應控制于相對更低水平并適當延長內(nèi)分泌抑制治療周期，術(shù)后復查時更應關(guān)注是否出現(xiàn)局部復發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移[12]。

綜上所述，Ki-67在PTMC的診斷中起著重要的作用，與PTMC包膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為臨床預后判定、術(shù)后治療的重要參考指標之一。由于本次研究為單中心、回顧性研究分析，存在樣本量不足、分層不夠細致等缺陷，可能需要進一步增加樣本數(shù)量以明確結(jié)論，尚待更多臨床資料進行進一步的研究。