ApoE基因型多態性與血脂水平相關性研究及風險評估*

莫巧璇，黃聲淳，呂微風

佛山市中醫院檢驗醫學中心,廣東佛山 528000

載脂蛋白E(ApoE)是一種糖蛋白，包括299個氨基酸，存在3種異構體：ApoE2(基因型為E2/E2和E2/E3)、ApoE3(基因型為E3/E3和E2/E4)和ApoE4(基因型為E3/E4和E4/E4)。ApoE的3種蛋白異構體結構上的區別導致了蛋白功能的差異[1]。ApoE通過多種途徑參與機體的脂質代謝調節，是影響機體血脂水平的重要內在因素，在人體脂質代謝中發揮重要作用[2-3]，主要通過與低密度脂蛋白(LDL)受體、極低密度脂蛋白(VLDL)受體及LDL受體相關蛋白相互作用而發揮其功能，是脂類代謝和心血管疾病的決定因子。脂質代謝紊亂引起的多種脂質水平異常，是導致心腦血管損害等多種疾病的重要因素。近30年來，我國人群的血脂水平逐步升高，血脂異常患病率明顯增加[4]，成人血脂異常患者的知曉率和治療率雖有提高，但仍處于較低水平，血脂異常的防治工作亟待加強[5]。本研究通過研究不同年齡段ApoE基因型與血脂水平的相關性，分析不同基因型及不同年齡的體檢人群患動脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)的風險性，為血脂防控健康管理提供科學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年7月至2020年1月在本院健康體檢中心進行體檢健康的883名參與者作為研究對象。其中男488名，女395名，年齡20～91歲。在檢驗信息系統查閱883名參與者的ApoE基因分型及11項生化指標檢測結果，并做回顧性分析，包括基因型E2/E2、E2/E3、E2/E4、E3/E3、E3/E4、E4/E4的定性結果及11項生化指標葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、尿素(BUN)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、谷氨酰轉肽酶(GGT)、肌酐(CR)和尿酸(UA)的定量結果。883名參與者的血脂四項(TC、TG、HDL-C和LDL-C)平均水平分別為5.11、1.75、1.34、3.07 mmol/L，GLU、ALT、AST、GGT、BUN、CR、UA水平均在正常范圍內，肝、腎功能無明顯異常，無明顯糖尿病、痛風等代謝性疾病。各ApoE基因型組參與者的年齡相近，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2儀器與試劑 艾康NES-32核酸提取儀及配套全血DNA提取和純化試劑盒；美國Life公司ABI7500熒光擴增儀及友芝友公司人類SLCO1B1和ApoE基因檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)。

1.3方法

1.3.111項生化指標檢測 參與者空腹12 h，采集靜脈血3 mL于分離膠真空管，3 000 r/min離心10 min分離出血清，使用西門子ADVIA 2400全自動生化分析儀及配套試劑盒和校準品檢測11項生化指標GLU、TC、TG、HDL-C、LDL-C、BUN、ALT、AST、GGT、CR和UA水平，4 h內檢測完畢。

1.3.2ApoE基因型檢測 采集參與者EDTA抗凝靜脈血2 mL，使用艾康NES-32核酸提取儀及配套全血DNA提取和純化試劑盒進行DNA的提取和純化；采用人類SLCO1B1和ApoE基因檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)及美國Life公司ABI7500熒光擴增儀進行基因分型，通過兩種不同通道熒光信號來確定其基因多態性。

2 結 果

2.1ApoE基型分型及單倍體分布頻率 在883名參與者中，ApoE基因型E3/E3占47.6%、E2/E4占17.6%、E3/E4占11.3%、E2/E3占9.2%、E2/E2占7.4%、E4/E4占7.0%，其中E3/E3最為常見，E4/E4最為少見。ApoE異構體以E3為主，占65.2%，其次為E4，占18.3%，E2最少，占16.5%。見表1。

表1 ApoE基因型組別的臨床特征及生化指標

2.2ApoE基因型與血脂四項的相關性分析 不同ApoE基因型與TC、TG、HDL-C和LDL-C比較結果見圖1。ApoE各基因型中，E2/E2組TC及LDL-C水平最低，而E3/E3、E3/E4、E4/E4 TC及LDL-C水平與E2/E2、E2/E3、E2/E4組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，各基因型TG、HDL-C水平差異無統計學意義(P>0.05)。不同的年齡段ApoE基因型組及不同性別組中，TC、TG、HDL-C和LDL-C血脂四項生化指標定量結果見表2。在不同性別組中，男性的TG水平高于女性，而HDL-C則相反，差異均有統計學意義(P<0.01)，不同性別TC和LDL-C水平差異無統計學意義(P>0.05)；在50～<60歲年齡段的異構體E4組的TC和LDL-C水平最高，E3組次高，E2組最低；TC和LDL-C水平在各基因型的不同年齡段有著相似的變化趨勢，一般從20歲開始到60歲呈曲線升高，60歲后逐漸回落。

注：A為不同ApoE基因型TCH水平比較；B為不同ApoE基因型LDL-C水平比較；C為不同ApoE基因型TG水平比較；D為不同ApoE基因型HDL-C水平比較。

表2 性別間及不同年齡段ApoE基因型血脂四項水平比較

續表2 性別間及不同年齡段ApoE基因型血脂四項水平比較

3 討 論

脂類標志物是心血管疾病的風險標志物，能預測和評估人群患心血管疾病的風險，并指導血脂干預治療。臨床上血脂的檢測項目較多，基本項目為TC、TG、HDL-C和LDL-C[6]。流行病學資料表明，LDL-C或TC升高是ASCVD重要的危險因素，TG升高或HDL-C降低與ASCVD發病危險的升高也存在一定的關聯[7-9]，血清HDL-C具有抗炎、抗氧化和保護血管內皮的功能[10]，且水平與ASCVD發病危險呈負相關[11-12]。根據2013-2014年全國調查結果顯示，成人血清TC、TG、HDL-C和LDL-C平均值分別為4.70 mmol/L、1.14 mmol/L、1.35 mmol/L和2.88 mmol/L[13]。本文研究對象為2016-2020年佛山地區健康體檢的健康成人，其血清TC、TG、HDL-C和LDL-C的均值分別是5.11 mmol/L、1.75 mmol/L、1.34 mmol/L和3.07 mmol/L，2016-2020年TC、TG、LDL-C水平比2013-2014年全國調查結果均有增高，而HDL-C則有所下降。可能由于隨著佛山地區經濟的快速發展，市民生活水平日益提高，飲食偏向高脂、高熱量，這使心腦血管疾病的發生率大大增加。

ApoE基因定位于19號染色體上，有4個外顯子和3個內含子，主要有兩種單核苷酸多態性526C>T和388T>C，可以形成3種單倍型，分別是ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。不同ApoE基因型中，E2/E2、E2/E3、E2/E4組的TC和LDL-C比E3/E3、E3/E4、E4/E4組明顯降低，其中E2/E2組最低，說明不同的ApoE基因型與血脂水平存在因果關系，E2等位基因可能通過降低LDL-C降低血液中的TC水平，從而降低ASCVD的發病風險；而E4等位基因則因為有較高的TC和LDL-C水平，表明E4等位基因可能通過增加LDL-C的合成或降低其在外周血的代謝，從而影響血漿血脂水平，增加ASCVD的風險，說明在針對心血管疾病的防控指導中，E3/E4、E4/E4基因型人群可列為重點防控對象。

不同年齡段中ApoE各基因型的血脂四項變化趨勢結果較為一致，一般從20歲開始到60歲呈曲線升高，說明隨著年齡的增長，各基因型的ASCVD的風險均不斷上升，尤其是50～<60歲的發病風險最高。因此，特別強調隨著年齡的增長，應不斷增強血脂異常的防治管理，除了要降低血清LDL-C水平外，也要強調控制血清 TG 水平，以降低心血管疾病風險[9,14]。

TG、HDL-C水平與ApoE的基因型沒有明顯的相關性，但不同性別TG、HDL-C水平有明顯差異。男性相對于女性有著更高的TG及更低的HDL-C水平，男性患ASCVD的風險比女性更高，這與我國多個地區的結果文獻報道相似[14-16]。

綜上所述，研究ApoE基因型多態性在不同年齡段與血脂水平的相關性，有助于判斷不同基因型及不同年齡的人群患ASCVD的風險性，尤其是針對高風險人群，可提供科學的防控指導，并對實現個體化用藥和安全用藥等有重要意義。