超聲輔助萃取六味地黃丸中沒(méi)食子酸工藝優(yōu)化

周大學(xué) 駱小方 任邦春 潘峰

摘要 采用超聲輔助萃取法從六味地黃丸中提取沒(méi)食子酸，考察溶劑比例（甲醇∶0.1%乙酸）、超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率對(duì)六味地黃丸中沒(méi)食子酸提取率的影響，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)研究六味地黃丸中沒(méi)食子酸超聲輔助萃取法的最佳工藝條件。結(jié)果表明，六味地黃丸中沒(méi)食子酸的最佳工藝條件為溶劑比例（甲醇∶0.1%乙酸）2∶8、超聲溫度40 ℃、超聲時(shí)間30 min、超聲功率180 W。沒(méi)食子酸在1.6～19.2 μg/mL線性關(guān)系良好（R2=0.999），平均加標(biāo)回收率為99.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.5%（n=3）。超聲輔助萃取法與浸漬提取法相比，提取沒(méi)食子酸含量增加了17.14%～23.62%。

關(guān)鍵詞 超聲輔助萃取;六味地黃丸;沒(méi)食子酸;工藝優(yōu)化;高效液相色譜

中圖分類號(hào) R-284? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2021）12-0190-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.12.049

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Optimization of Ultrasonic Assisted Extraction Process of Gallic Acid from Liuwei Dihuang Pills

ZHOU Da xue1，LUO Xiao fang2，REN Bang chun3 et al （1.Biomedical Analysis Center，Army Medical University，Chongqing Key Laboratory of Cytology，Chongqing 400038;2.Chongqing Academy of Metrology and Quality Inspection，Chongqing 401121;3.The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400010）

Abstract Ultrasound assisted extraction method was used to extract gallic acid from Liuwei Dihuang Pills，and the effects of solvent ratio （methanol∶0.1% acetic acid），ultrasonic temperature，ultrasonic time and ultrasonic power on the extraction rate of gallic acid in Liuwei Dihuang Pills were investigated.The optimal technological conditions of gallic acid in Liuwei Dihuang Pills were studied by single factor experiment and orthogonal experiment.The results showed that the optimal process conditions for the ultrasonic assisted extraction of gallic acid in Liuwei Dihuang Pills were as follows：solvent ratio 2∶8，ultrasonic temperature 40 ℃，ultrasonic time 30 min and the ultrasonic power 180 W.Gallic acid had a good linear relationship in the range of 1.6-19.2 μg/mL （R2=0.999），the average recovery rate was 99.3%，and the relative standard deviation （RSD） was 2.5% （n=3）.Compared with the impregnation method，the content of gallic acid extracted by ultrasonic assisted extraction increased by 17.14%-23.62%.

Key words Ultrasonic assisted extraction method;Liuwei Dihuang Pills;Gallic acid;Process optimization;HPLC

六味地黃丸由北宋名醫(yī)錢乙所創(chuàng)，主要成分為熟地黃、山藥、山茱萸、杜丹皮、茯苓、澤瀉6味中藥，主要用于陰液虧損引發(fā)的各種病癥，如頭暈耳鳴、腰膝酸軟、盜汗遺精、骨蒸潮熱和消渴（糖尿病）等。沒(méi)食子酸為山茱萸中的有機(jī)酸，具有抗菌、抗病毒和抑制淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的作用[1]，還可以通過(guò)抑制內(nèi)皮NO的生成誘導(dǎo)血管內(nèi)皮依賴性收縮和松弛[2]。

沒(méi)食子酸的提取方法主要有索氏提取法[3]、回流法[4]、超聲法[5]、離子萃取法[6]、浸漬法[7]、酸水解法[8]、堿水解法[9]、發(fā)酵法[10]、酶法[11]等。其中，索氏提取法、回流法、浸漬法時(shí)間較長(zhǎng);離子萃取法溫度較高，對(duì)產(chǎn)物活性不好;酸水解法、堿水解法、發(fā)酵法、酶法工序復(fù)雜，不利于操作。因此研究超聲輔助萃取法，通過(guò)超聲波增大分子運(yùn)動(dòng)速度和穿透力，促進(jìn)提取物溶解，加速提取進(jìn)程。筆者通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)研究溶劑比例、超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率對(duì)沒(méi)食子酸提取量的影響，以期研究六味地黃丸中沒(méi)食子酸提取的最佳條件。

1 材料與方法

1.1 儀器 Waters e2695高效液相色譜儀（美國(guó)，Waters公司）;KQ-250E型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）;MSU電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 試劑 甲醇為色譜純（美國(guó)Fisher公司），其余試劑均為分析純;超純水由Millipore純水儀（美國(guó)Millipore公司）制備;沒(méi)食子酸（C7H6O5）對(duì)照品（中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上海化學(xué)試劑公司）;六味地黃丸樣品（太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠有限公司）。

1.3? 溶液制備

1.3.1 對(duì)照品溶液制備。精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品10.0 mg，置于25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容至刻度，搖勻，得到400 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，用移液槍分別吸取此標(biāo)準(zhǔn)液0.1、0.3、0.6、0.9、1.2 mL，置于25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，得到濃度為1.6、4.8、9.6、14.4、19.2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.3.2 樣品溶液制備。準(zhǔn)確稱取樣品1.0 g于100 mL具塞三角瓶中，加入溶劑50 mL（流動(dòng)相），在溫度40 ℃、超聲功率180 W的條件下超聲30 min，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，即得樣品待測(cè)液。

1.4 色譜條件

色譜柱為SunFire C18（4.6 mm×150 mm，3.5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1%乙酸溶液（2∶8，V/V），流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為273 nm，理論塔板數(shù)以沒(méi)食子酸計(jì)算，不低于4 000。

1.5 單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)

以單因素試驗(yàn)優(yōu)化沒(méi)食子酸的提取條件，并根據(jù)L9（34）正交試驗(yàn)（表1）和極差分析考察溶劑比例（甲醇∶0.1%乙酸）、超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率對(duì)沒(méi)食子酸提取量的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取同一批樣品1.0 g，分別研究溶劑比例（甲醇∶0.1%乙酸）、超聲溫度、超聲時(shí)間和超聲功率對(duì)六味地黃丸中沒(méi)食子酸提取量的影響，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，根據(jù)L9（34）正交試驗(yàn)考察溶劑比例（A）、超聲溫度（B）、超聲時(shí)間（C）、超聲功率（D）這4個(gè)因素對(duì)沒(méi)食子酸提取量的影響，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可以看出，影響沒(méi)食子酸提取效果大小的主次因素為A>B>C>D，正交試驗(yàn)確定的最優(yōu)組合條件為A1B2C3D3，即溶劑比例（甲醇∶0.1%乙酸）2∶8、超聲溫度40 ℃、超聲時(shí)間30 min、超聲功率180 W。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系。精密吸取對(duì)照品溶液，在波長(zhǎng)273 nm處

測(cè)定峰面積。以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程為Y=59 751X+31 715（R2=0.999），結(jié)果表明沒(méi)食子酸濃度在1.6～19.2 μg/mL呈良好的線性關(guān)系（圖1）。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱取同一批樣品1.0 g，共5份，按“1.3.2”的方法處理樣品，按“1.4”色譜條件測(cè)定沒(méi)食子酸的含量，結(jié)果分別為0.973 6、1.012 9、0.985 2、1.038 6、0.995 7 mg/g，RSD為2.5%，說(shuō)明該方法重復(fù)性好。

2.3.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)。精密稱取已知含量的同一批樣品1.0 g，共3份，分別加入0.2 mg沒(méi)食子酸對(duì)照品，按“1.3.2”的方法處理樣品，按“1.4”色譜條件測(cè)定。由表4可知，沒(méi)食子酸回收率為94.5%～104.1%，回收率較高，可用于六味地黃丸中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定。

2.4 六味地黃丸中沒(méi)食子酸含量測(cè)定

從表5可以看出，不同廠家六味地黃丸中沒(méi)食子酸含量不同，超聲輔助萃取3個(gè)廠家藥品中的沒(méi)食子酸含量為0.938 4～1.082 7 mg/g，與浸漬提取法相比，超聲輔助萃取法提取的沒(méi)食子酸含量高出17.14%～23.62%。

3 結(jié)論

采用超聲輔助萃取法提取六味地黃丸中的沒(méi)食子酸，通

過(guò)單因素試驗(yàn)，分別研究溶劑比例（甲醇∶0.1%乙酸）、超聲溫度、

超聲時(shí)間和超聲功率對(duì)沒(méi)食子酸提取量的影響，根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)L9（34）的正交試驗(yàn)。分析正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)，確定影響沒(méi)食子酸提取量的因素順序?yàn)槿軇┍壤?超聲溫度>超聲時(shí)間>超聲功率，最優(yōu)組合為A1B2C3D3，即溶劑比例（甲醇∶0.1%乙酸）2∶8、超聲溫度40 ℃、超聲時(shí)間30 min、超聲功率180 W。超聲輔助萃取法與浸漬提取法相比，六味地黃丸中沒(méi)食子酸提取量增加了17.14%～23.62%。

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