實時熒光核酸恒溫擴增技術在婦女生殖道病原體感染診斷中的應用價值

劉 江 王小翠

齊齊哈爾市第一醫院,黑龍江 齊齊哈爾 161005

沙眼衣原體、解脲脲原體在婦女生殖道病原體感染中較為常見，極易導致泌尿生殖系統炎癥[1]。實時熒光核酸恒溫擴增技術(SAT)源自RNA恒溫擴增技術(TMA)，是較為新型的一種核酸檢測技術，可同時對尿液、拭子進行檢測，非侵入性操作，具有較高的特異性、靈敏性，臨床應用價值高[2]。本研究選取197例疑似婦女生殖道病原體感染患者，探討實時熒光核酸恒溫擴增技術的臨床應用效果。如下所示。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年10月-2019年10月197例疑似婦女生殖道病原體感染患者，年齡25-48歲，平均年齡(32.56±3.26)歲?；颊呔霈F尿頻、瘙癢、白帶增多等癥狀。

1.2方法 樣本均為婦女宮頸拭子，采用專用無菌拭子置入陰道中取宮頸樣本，且在取樣后及時送檢。

解脲支原體采用培養法、SAT進行檢測，在進行培養法進行檢測時，將宮頸拭子及時接種到培養基，放置到35攝氏度、5%CO2培養箱內進行培養，持續48h。

沙眼衣原體采取免疫層析膠體金檢測法、SAT進行檢測，膠體金檢測樣本按照試劑說明書進行操作。

解脲支原體、沙眼衣原體在采用SAT進行檢測，采取熒光ABI7500型PCR儀予以檢測，根據試劑盒、儀器操作說明書完成操作,擴增條件42℃1min,實施40個循環,熒光素通道FAM,dt值≤35可認為是陽性。

1.3統計學方法

數據均經SPSS20.0處理分析，計數資料經X2檢驗，計量資料經t檢驗，若P<0.05說明差異有統計學意義。

2 結 果

2.1沙眼衣原體檢測結 免疫層析膠體金檢測沙眼衣原體陽性率為3.55%(7/197)，SAT檢測陽性率為5.08%(10/197)，無明顯統計學差異(x2=0.553，P=0.457)。見表1。

表1 沙眼衣原體檢測結果(n)

2.2解脲脲原體檢測結果 培養法陽性率為54.31%(107/197)，SAT檢測陽性率為51.27%(101/197)，無明顯統計學差異(x2=0.367，P=0.545)。見表2。

表2 解脲脲原體檢測結果(n)

3 討 論

婦女生殖道病原體感染中，CT、UU導致的感染幾率較高，而且極有可能導致患者出現女性不孕、早產、胎兒宮內死亡等，是較為常見的嚴重公共衛生問題[3]。CT、UU導致的生殖道感染往往經性接觸傳播，通常屬于隱匿性感染，無特殊表現，因此臨床診斷時極易漏診。對患者進行臨床檢測時，常規方法主要為涂片、培養、免疫學等，往往需要較長時間，而且有的方法特異性較差，導致臨床診斷治療受到極為不良的影響。因此需選取更為適宜的方法進行臨床診斷[4]。

經研究可知，免疫層析膠體金檢測沙眼衣原體陽性率與SAT陽性率無明顯統計學差異；培養法陽性率與SAT陽性率無明顯統計學差異。由此可知，將免疫層析膠體金、培養法作為臨床診斷的金標準，采取SAT進行檢測，兩者在陽性率方面無明顯對比差異。

SAT是核酸恒溫擴增技術與實時熒光檢測技術進行結合的核酸檢測技術。

SAT是將RNA作為起始模板，經M-MLV反轉錄酶形成1個雙鏈DNA拷貝，通過T7-RNA多聚酶由此DNA拷貝形成多個RNA拷貝，且每個RNA拷貝由反轉錄起進入到下個擴增循環帶，由熒光標記探針和RNA拷貝進行特異性結合，可形成熒光。此熒光信號能夠通過熒光PCR儀進行實時捕獲，可對擴增產物的形成進行直觀反映[5]。與傳統DNA方法相比較，其靈敏度、特異性較高，而且反應較為穩定，可有效擴增，反應時間較短，而且操作較為簡單，不必進行溫度循環、于恒溫器、水浴鍋內可予以核酸提取，而且由于RNA容易降解，所以不會導致嚴重低污染。解脲脲原體經SAT檢測呈現陽性，通過培養法檢測顯示陰性，通常認為是采集拭子內病原菌含量較少，培養靈敏性較低，也有可能是處于感染早期，導致病原體DNA量少，但RNA量較多，通過SAT可能夠對RNA進行檢測，因此可顯示為陽性[6]。對CT、UU進行SAT檢測顯示陰性，培養法顯示陽性，極有可能是因標本未合理保存導致RNA丟失造成的。

總之，SAT檢測在婦女生殖道病原體沙眼衣原體、解脲支原體感染診斷中具有明顯效果，而且操作簡單，可進行推廣使用。