草莓炭疽病病原菌的分離及高效防治藥劑篩選

姜莉莉，孫瑞紅，宮慶濤，武海斌，武沖

（山東省果樹研究所，山東 泰安 271000）

草莓（Fragaria×ananassa Duchesne）屬薔薇科草莓屬宿根性草本植物［1］。其果實營養豐富、口感上佳，深受消費者喜愛，是我國重要的經濟作物。近年來隨著設施栽培草莓面積的不斷擴大，規模化生產地區草莓輪作、倒茬困難，病害發生日益嚴重［2］。草莓炭疽病是危害草莓、造成減產的主要病害［3］。炭疽病在草莓整個生育期內均可發生，在繁苗階段和定植初期發生最為普遍，主要危害草莓根部和匍匐莖，造成根部腐爛和整株萎蔫死亡［4］。

目前對草莓炭疽病的防治手段主要包括農業防治、生物防治和化學防治。農業防治措施主要為選育抗病品種，加強田間管理等［5］。生物防治主要在研究階段，尚未獲得產品登記［6］。作為鮮食水果，市場對草莓的口感品質要求較高，當前國內主栽草莓品種大都高感炭疽病［7］，化學防治仍是控制炭疽病的有效手段［8］。本研究選取了7種常用殺菌劑，評價其對草莓炭疽病菌的室內毒力，并選取高效藥劑進行盆栽防效試驗，以期為該病害的科學防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑

98%多菌靈原藥，山東濰坊潤豐化工股份有限公司；97%吡唑醚菌酯原藥，浙江宇龍生物科技股份有限公司；97%苯醚甲環唑原藥和98%肟菌酯原藥，山東省聯合農藥工業有限公司；98%嘧菌酯原藥，山東濰坊雙星農藥有限公司；98%咯菌腈原藥，河北興柏農業科技有限公司；97%咪鮮胺原藥，山東華陽農藥化工集團有限公司。多菌靈以3%的鹽酸溶液溶解，其余供試原藥均由丙酮溶解，配置成濃度為1×104mg·L－1的母液，于4℃保存備用。

450 g·L－1咪鮮胺水乳劑，浙江天豐生物科學有限公司；20%咯菌腈懸浮劑，青島凱源祥化工有限公司；250 g·L－1苯醚甲環唑乳油，江蘇禾本生化有限公司。

1.2 病原菌分離

草莓炭疽病株采自山東省果樹研究所金牛山試驗基地草莓大棚。采用病組織分離法［9］進行病原菌分離：將病健交界處（圖1）組織在75%乙醇溶液中浸泡30 s，以滅菌水沖洗3次；將處理好的病組織置于PDA培養基中央，25℃黑暗培養5 d；待菌落形成后挑取邊緣菌絲于新的PDA平板上進一步純化培養。以PDA斜面培養基4℃保存，備用。

圖1 炭疽病病健交界處

根據柯赫氏法則［10］，在‘章姬’草莓莖基部以手術刀切數條小口，將培養7 d的炭疽病菌菌落連同培養基回接至切口處，進行常規栽培管理，觀察接種植株的發病癥狀與田間癥狀是否一致。

1.3 室內毒力測定

采用菌絲生長速率法［11］進行殺菌劑室內毒力測定。在超凈工作臺上，以無菌水將7種供試藥劑母液進行梯度稀釋；取1 mL各濃度藥液于49 mL冷卻至50～60℃的PDA培養基中，充分混勻后倒板，每個濃度3次重復。咪鮮胺和咯菌腈濃度為0.05、0.10、0.20、0.40、1.00 mg·L－1，苯醚甲環唑的濃度為0.1、0.2、0.4、1.0、2.0 mg·L－1，多菌靈濃度為1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg·L－1，吡唑醚菌酯、嘧菌酯和肟菌酯的濃度為2.5、5.0、10.0、25.0、50.0 mg·L－1。

以直徑7 mm的打孔器在活化好的草莓炭疽病菌菌落邊緣打取菌餅，接種于上述含藥PDA平板上，以無菌水處理為對照。25℃黑暗培養，待對照菌落長至培養皿2／3處時，采用十字交叉法［12］測量菌落直徑，計算各藥劑處理對草莓炭疽病菌菌絲生長的抑制率，采用SPSS 18.0軟件計算各藥劑的EC50值，并以毒力最低藥劑的EC50值為基準值計算其它藥劑的相對毒力指數。

抑制率（%）＝（對照組菌落直徑－處理組菌落直徑）／（對照組菌落直徑－菌餅直徑）×100。

1.4 盆栽藥效試驗

根據《中國農藥信息網》公布的藥劑推薦劑量進行盆栽藥效試驗。從草莓炭疽病發病嚴重的地塊取土，裝入直徑15 cm的塑料花盆，移入三葉一心期‘章姬’草莓幼苗。試驗共設4個處理，分別為20%咯菌腈懸浮劑2 000倍液20 mL／株、450 g·L－1咪鮮胺水乳劑4 500倍液20 mL／株、250 g·L－1苯醚甲環唑乳油2 500倍液20 mL／株，以及清水對照。每個處理重復3次，每個重復10盆。

移栽后14 d調查草莓炭疽病的發病率和病情級數，并計算防治效果。病情分級標準［13］：0級，無任何癥狀；1級，點狀病斑，長度≤2.0 mm；3級，病斑長度介于2.1～5.0 mm；5級，病斑長度介于5.1～9.0 mm；7級，病斑長度介于9.1～15.0 mm；9級，植株萎蔫。

發病率（%）＝發病株數／總株數×100；

病情指數＝∑（病情級數×該級病害株數）／（最高病情級數×總株數）×100；

防治效果（%）＝（對照組病情指數－處理組病情指數）／對照組病情指數×100。

2 結果與分析

2.1 病原菌分離

如圖2所示，從草莓病株分離得到的病原菌在25℃黑暗條件下培養5 d，菌落厚實，有灰白色氣生絨毛；培養10 d后，菌落中央出現橘色黏質孢子堆，與張海英等［14］報道的草莓炭疽病菌特征一致。

圖2 草莓炭疽病菌菌落形態

病原菌回接至‘章姬’草莓健株7 d后，草莓莖基部變褐色，植株出現萎蔫（圖3），與田間初期發病癥狀一致。

圖3 草莓炭疽病菌回接后癥狀

2.2 不同濃度下7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的抑制率

由表1可知，咯菌腈對草莓炭疽病菌的抑制效果最佳，濃度為0.05～1.00 mg·L－1時的抑制率為37.73%～75.17%。咪鮮胺濃度為0.05～1.00 mg·L－1時的抑制率為29.10%～81.52%；苯醚甲環唑濃度為0.1～2.0 mg·L－1時，抑制率為33.63%～68.03%，抑菌活性均較高。多菌靈濃度為1.0～25.0 mg·L－1時，抑制率為29.12%～84.02%。吡唑醚菌酯、嘧菌酯和肟菌酯對草莓炭疽病菌的抑制作用較低，濃度為2.5～50.0 mg·L－1時，吡唑醚菌酯抑制率為36.18%～78.06%，嘧菌酯抑制率為29.85%～71.49%，肟菌酯抑制率為31.08%～69.99%。

表1 不同濃度下7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的抑制率

2.3 7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的毒力

由表2可知，供試7種殺菌劑中，咯菌腈對草莓炭疽病的室內毒力最高，EC50值為0.117 mg·L－1，相較于嘧菌酯的相對毒力指數高達104.66。咪鮮胺和苯醚甲環唑對草莓炭疽病的室內毒力也較高，EC50值分別為0.141mg·L－1和0.357mg·L－1，相對毒力指數分別為86.84和34.30。嘧菌酯對草莓炭疽病菌的室內毒力最低，EC50值為12.245mg·L－1。多菌靈、吡唑醚菌酯和肟菌酯的室內毒力也較低，EC50值分別為3.475、5.703、10.345 mg·L－1，相對毒力指數分別為3.52、2.15和1.18。

表2 7種殺菌劑對草莓炭疽病菌的室內毒力

2.4 3種殺菌劑對草莓炭疽病的盆栽防效

由表3可以看出，對照組的炭疽病發病率高達46.67%。通過灌根處理，20%咯菌腈懸浮劑2 000倍液對炭疽病的盆栽防效最高，為92.86%；450 g·L－1咪鮮胺水乳劑4 500倍液和250 g·L－1苯醚甲環唑乳油2 500倍液防效也較高，分別為91.68%和89.29%。

表3 3種殺菌劑對草莓炭疽病的盆栽防效

3 討論與結論

炭疽病菌屬復雜，致病力強，包括多個致病種，且同一菌株對不同殺菌劑的敏感性差異較大［15］。本研究通過室內毒力測定發現，分離得到的草莓炭疽病菌對咯菌腈敏感性最高，EC50值僅為0.117 mg·L－1，咪鮮胺和苯醚甲環唑的室內毒力也較高，EC50值分別為0.141 mg·L－1和0.357 mg·L－1。這與劉霞［16］、張俊有［17］等的結果一致。

咯菌腈屬苯吡咯類非內吸性殺菌劑，防病譜較廣。咪鮮胺屬咪唑類脫甲基抑制劑，高效、廣譜、滲透性強，通過抑制脫甲基酶的活性，使麥角甾醇合成受阻，導致真菌細胞膜不能正常形成，從而引起細胞死亡［18］。苯醚甲環唑屬于三唑類甾醇脫甲基抑制劑，具有較強的內吸性［19］，對多種病害具有較持久的保護和治療作用［20］。本試驗結果發現，通過灌根處理，20%咯菌腈懸浮劑2 000倍液對炭疽病的盆栽防效最高，達92.86%；450 g·L－1咪鮮胺水乳劑4 500倍液和250 g·L－1苯醚甲環唑乳油2 500倍液防效分別達91.68%和89.29%。由此可見，咯菌腈、咪鮮胺和苯醚甲環唑可以考慮用于防治草莓炭疽病，但其田間藥效結果尚有待進一步研究。