VEGF、BCRP蛋白及血清LDH與晚期NSCLC一線化療預后的關系

孔佑虔 王小玉 宋愛英 唐寅★

作者單位：1.黑龍江中醫藥大學，黑龍江，哈爾濱150040

2.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院腫瘤科，黑龍江，哈爾濱150040

現臨床上對于晚期非小細胞癌（non?small cell lung cancer，NSCLC）患者的治療以一線化療為主，但經臨床長期應用發現，該治療方案中位生存時間較短［1］。及時明確影響晚期NSCLC 患者一線化療的原因進而采取治療措施具有重要意義［2］。乳酸脫氫酶（1actate dehydrogenase，LDH）是一種酵解酶，廣泛存在于機體的各種組織中，在惡性實體瘤中LDH 水平明顯增高［3］。血管內皮生長因子（vasclar endothelial growth factor，VEGF）系腫瘤生長、侵襲及轉移相關主要調控因子之一，其表達水平與腫瘤組織及淋巴結轉移密切相關［4］。乳腺癌耐藥蛋白（Breast cancer resistance protein，BCRP）是新近發現的ABC 亞家族成員之一，有報道顯示其在急性白血病、乳腺癌耐藥中有一定作用，但在NSCLC 中的作用報道甚少［5］。本文就VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 與晚期NSCLC 一線化療預后的關系進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集115 例晚期NSCLC 患者腫瘤組織及腫瘤旁的正常粘膜組織（距腫瘤組織5 cm 處），分別作為癌組織組（n=115）、癌旁正常組織組，各115 例。納入標準：①所有患者符合美國國家癌癥綜合網NSCLC 治療指南2008年版［6］，且經病理檢查證實；②未接受化療、放療等輔助治療；③本研究患者臨床資料均完整；④無其它惡性疾病。排除標準：①合并肝、腎、心臟臟器嚴重疾病者；②合并嚴重神經功能、認知功能障礙者；③依從性差者。其中男59 例，女56 例，平均年齡（60.31±6.65）歲。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，受試家屬均簽署知情同意書。

1.2 一線化療方案

GP 方案：吉西他濱100 mg/m2，TP 方案：多西他賽175 mg/m2，NP 方案：長春瑞濱25～30 ng/m2，均聯合卡鉑［按AUC=5 ng·mL?1·min?1的劑量估算，第1 天用藥］；分別于第1、8 天各給藥1 次，21天為1 個周期。所有患者至少化療2 個周期。

1.3 檢測方法

抽取患者清晨空腹靜脈血5 mL，離心（3 000 r/min，10 min）分離血清于EP 管中，置于-80℃冰柜中待檢。采用全自動生分析儀（日立公司7600?10）檢測血清LDH 水平，操作嚴格按照說明書進行。

VEGF、BCRP：采集所有研究對象腫瘤組織及腫瘤旁的正常粘膜組織，采用免疫組化法進行檢測。VEGF 單克隆抗體試劑盒購于北京中山生物技術有限公司；BCRP 單克隆抗體購于Chemical 公司。免疫組化采用鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化酶連接法（streptavidin?perosidase，SP）法，SP 試劑盒購自北京中山生物科技有限公司。各步驟均嚴格按照試劑盒說明書進行操作。染色結果判定標準［7］：以細胞核中出現棕黃色顆粒為VEGF、BCRP陽性染色細胞。每張切片隨機選取10 個高倍視野，按照陽性細胞的染色數量和顯色強度分級評分，取其平均值。細胞染色數量的評分按照陽性細胞計數占同類細胞的百分比，計算該病例的細胞陽性率。本研究從患者治療開始采用電話、微信等方式隨訪，隨訪2年，截止于2020年6月。

1.4 統計學分析

采用SPSS 22.0 軟件進行分析，計數資料以n（%）表示，χ2檢驗，計量資料以（）描述，t檢驗；采用多元Logistic 回歸分析影響晚期NSCLC 患者預后生存的危險因素，采用ROC 分析血清LDH、VEGF 及BCRP 蛋白對晚期NSCLC 患者一線化療預后生存的預測價值；以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF、BCRP、LDH 表達情況比較

癌組織組VEGF、BCRP 陽性表達率及血清LDH 水平顯著高于癌旁正常組織組，差異均具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組VEGF、BCRP、LDH 表達情況比較［n（%），（±s）］Table 1 The expression of VEGF，BCRP and LDH were compared between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 兩組VEGF、BCRP、LDH 表達情況比較［n（%），（±s）］Table 1 The expression of VEGF，BCRP and LDH were compared between 2 groups［n（%），（±s）］

組別癌組織組癌旁正常組織組t/χ2值P 值n 115 115 VEGF陽性99（86.08）19（16.52）111.380<0.001陰性16（13.91）96（83.47）BCRP陽性101（87.82）21（18.26）111.718<0.001陰性14（12.17）94（81.73）LDH（U/L）239.11±65.52 169.42±26.15 10.593<0.001

2.2 預后情況

經隨訪顯示，患者2年生存率為31.30%（36/115）。

2.3 影響晚期NSCLC 患者一線化療預后生存的單因素

患者年齡、性別非影響患者預后生存的相關危險因素（P>0.05），臨床分期、分化程度、病理類型、淋巴轉移、LDH、VEGF 及BCRP 蛋白表達為影響患者預后生存的相關危險因素（P<0.05）。見表2。

表2 影響晚期NSCLC 患者一線化療預后生存的單因素Table 2 univariate analysis of prognostic factors in patients with advanced NSCLC after first?line chemotherapy

2.4 影響晚期NSCLC 患者一線化療預后生存的多因素分析

組織中低分化、TNM 分期：Ⅲ+Ⅳ期、淋巴轉移、血清LDH 異常升高、VEGF 及BCRP 蛋白陽性表達為影響晚期NSCLC 患者一線化療預后生存的獨立危險因素（P<0.05）。見表3。

表3 影響晚期NSCLC 患者一線化療預后生存的多因素Table 3 multivariate analysis of prognostic factors in patients with advanced NSCLC after first?line chemotherapy

2.5 VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 對晚期NSCLC 患者一線化療預后生存的預測價值

LDH、VEGF 及BCRP 及三者聯合曲線下面積分別為0.882、0.683、0.650、0.892，各指標曲線下面積以聯合檢測最大。見表4、圖1。

表4 VEGF、BCRP 蛋白及血清LDH 對晚期NSCLC患者一線化療預后生存的預測價值Table 4 Prognostic value of VEGF，BCRP protein and serum LDH in patients with advanced NSCLC after first?line chemotherapy

圖1 ROC 分析Figure 1 ROC analysis

3 討論

一線化療是近年來肺癌治療的領域突破，使NSCLC 的治療方法有了長足的進展，但部分患者治療效果仍不理想，影響預后。因此，尋求有效治療靶點對改善晚期NSCLC 患者一線化療預后有重要意義［8］。

BCRP 是ABC 轉運蛋白超家族成員之一，目前，臨床認為其可通過自身形成二聚體參與腫瘤進展而發揮作用［9］。相關研究證實BCRP 細胞株對依托泊甙、多柔比星等多種化療藥耐藥，且與急性白血病、小細胞肺癌、乳腺癌等多種腫瘤對化療的敏感性有關［9］。本研究結果說明BCRP 是影響晚期癌癥患者無進展生存期及總生存期的重要預后因素［10］。

VEGF 是目前認為作用最強、特異性最高的血管生成調控因子，可特異作用于血管內皮細胞，促進其增殖及新生血管形成，增加血管通透性。相關研究發現，低分化肺癌VEGF 陽性表達率明顯高于高分化肺癌，認為VEGF 的表達水平與腫瘤組織血管生成程度有關，并和腫瘤的惡性程度顯著相關［11］。同時，Tanaka 等［12］研究顯示，VEGF 可促使腫瘤血管生成使腫瘤體積增加，腫瘤細胞通過靜脈淋巴管吻合處從血液循環中進入淋巴管，與腫瘤淋巴結轉移的概率隨血液循環中腫瘤細胞的增加而增高，VEGF 對淋巴結轉移具有間接促進作用。類似的，Hirabae 等［13］研究顯示，VEGF 表達與肺癌淋巴結轉移有密切關系，可通過轉導VEGF 反義核苷酸降低VEGF 表達，使肺癌淋巴結轉移降低。本研究顯示，VEGF 陽性與晚期NSCLC 患者一線化療預后生存密切相關，說明VEGF 表達水平對臨床治療及預后具有重要指導意義。

LDH 屬氫轉移酶，可催化乳酸氧化成丙酮酸，與細胞代謝、缺氧、無氧酵解、活性狀態和惡性轉化等密切相關。研究發現，腫瘤細胞壞死后，體內代謝轉換率加快，細胞膜通透性改變，使組織酶入血，導致血清LDH 活性增加［14］。進展期胰腺癌患者予以治療后顯示，完全緩解后血清LDH 水平明顯降低，提示腫瘤代謝降低，細胞膜通透性恢復［15］。本研究結果說明血清LDH 升高對反映腫瘤負荷情況具有重要作用。ROC 曲線分析，結果顯示VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 聯合檢測下面積最大，特異、敏感度高。進一步提示聯合檢測對晚期NSCLC患者一線化療預后具有重要意義，臨床可通過聯合檢測多項指標提高對晚期NSCLC 患者一線化療預后的評估價值。

綜上所述，VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 與晚期NSCLC 患者一線化療預后密切相關，臨床可根據該水平變化制定個體化治療方案，對延長患者生存期具有重要作用。