HPV感染的CIN和宮頸癌患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1和IgG2抗體表達的臨床意義

陳娟 宋化雨 程瑤瑤 謝佳

作者單位：1.四川省攀枝花市中西醫結合醫院婦產科，四川，攀枝花，617000

2.四川省攀枝花市中心醫院婦產科，四川，攀枝花，617000

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是導致宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neopla?sia，CIN）的主要因子［1］。CIN 是病毒性的癌癥前體，也是宮頸癌發展的必要條件［2］。機體免疫力很大程度上決定HPV 感染的可能性，T 細胞介導的細胞免疫應答在抗HPV 中發揮了重要的作用主要作用［3?4］。抗人乳頭瘤病毒樣顆粒（Human papilloma?virus virus?like particles，HPV VLPs）免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）的G1 和G2 抗體是評價HPV感染程度的特異性標志物，可以反映機體受HPV進攻時出現的免疫反應程度［5?6］。轉化生長因子?β1（transforming growth factor?β1，TGF?β1）與細胞增殖、分化密切相關［7］。本次研究以單純HPV 感染、CIN和宮頸癌患者為研究對象，對比分析血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體水平及陽性表達情況，探討其在宮頸病變發生發展中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2018年8月在本院接受治療的HPV 感染、CIN 和宮頸癌患者為研究對象。納入標準：①成年者；②TCT 結果異常、HPV?DNA陽性、EC 及宮頸活檢或術后病理明確診斷為單純HPV 感染、CIN 和宮頸癌；③無其他生殖系統疾病者。排除標準：①合并其他原發腫瘤、全身感染、免疫疾病等患者；②臨床資料不全者；③不愿參與本項研究者。根據標準共納入病例數150 例，其中HPV 感染者32 例，年齡平均（43.68±11.37）歲；CIN者68 例，年齡平均（45.63±13.02）歲，CINⅠ者30例，CINⅡ～Ⅲ者38 例；宮頸癌者50 例，年齡平均（45.66±12.98）歲；同時選取同期在本院接受診治的非HPV 感染的子宮肌瘤或宮頸炎者50 例作為對照組，年齡平均（45.69±13.11）歲。各組一般資料差異無統計學意義（P>0.05）。所有患者知情同意。本實驗經醫院倫理委員會批準同意。

1.2 檢測指標及方法

收集所有受試者外周靜脈血2 mL，靜置2 h 后，常規離心后分離獲得血清，置-80℃冰箱保存。在HPV?16VLPs 包被的96 孔酶標板上，每孔加入80 μL 樣品稀釋液；再加入20 μL 用前述方法檢測出的IgG 陽性的血清，用酶標儀測定在雙波長450/620 nm下各孔的吸光度A 值，根據試劑盒說明書進行操作最后得到血清HPV VLPs 的IgG1、IgG2 抗體水平。另取所有受試者外周靜脈血5 mL，將血液樣品離心3 000 r/min，20 分鐘分離血清并且儲存在-80℃冰箱中待測嚴格按TGF?β1 ELISA 試劑盒說明書操作。

1.3 判定標準

臨界值（C.O）=陰性對照孔A 值均值＋0.18，參見試劑盒。樣品A 值（S）/C.O<1 者為HPV 抗體陰性，樣品A 值（S）/C.O≥1 者為HPV 抗體陽性。

1.4 統計分析

采用SPSS 18.0 軟件進行數據分析。計數資料用n（%）表示，用χ2比較，計量資料用（）表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗，相關性采用Pearson 相關分析，采用Logistic回歸分析法分析影響宮頸癌患者TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體表達的相關因素。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體水平及陽性表達情況

HPV 感染、CINⅠ、CIN Ⅱ～Ⅲ、宮頸癌及對照組患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達率及吸光度A 值差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 各組血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體吸光度A 值及陽性表達的差異［n（%），（±s）］Table 1 The difference of absorbance A value and positive expression of serum TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies［n（%），（±s）］

表1 各組血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體吸光度A 值及陽性表達的差異［n（%），（±s）］Table 1 The difference of absorbance A value and positive expression of serum TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies［n（%），（±s）］

注：與對照組比較，aP<0.05；與HPV 感染比較，bP<0.05；與CINⅠ比較，cP<0.05；與CINⅡ～Ⅲ比較，dP<0.05。

組別對照組HPV 感染CINⅠCIN Ⅱ～Ⅲ宮頸癌χ2/F 值P 值HPV16VLPs?IgG1例數50 32 30 38 50 HPV16VLPs?IgG2 TGF?β1陽性表達4（8.0）8（25.0）a 8（26.7）a 16（42.1）a 42（84.0）abcd 67.466<0.001 A 值0.195±0.028 0.209±0.052 0.517±0.124ab 0.850±0.228ab 1.439±0.303abcd 345.629<0.001陽性表達4（8.0）8（25.0）a 9（30.0）a 16（42.1）a 40（80.0）abcd 59.600<0.001 A 值0.294±0.037 0.308±0.043 1.083±0.126ab 1.799±0.154abc 2.464±0.232abcd 1903.334<0.001陽性表達5（10.0）9（28.1）a 9（30.0）a 15（39.5）a 38（76.0）abcd 49.458<0.001 A 值1.578±0.074 0.568±0.051a 1.613±0.088b 1.761±0.099b 1.999±0.175abcd 855.473<0.001

2.2 血清TGF?β1 與HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體的相關性

CIN Ⅱ～Ⅲ及宮頸癌患者血清TGF?β1 與HPV16VLPs?IgG1和IgG2抗體吸光度A值均呈顯著正相關（CIN Ⅱ～Ⅲ：r=0.661，P<0.001；r=0.529，P=0.001。宮頸癌：r=0.850，P<0.001；r=0.738，P<0.001）。

2.3 血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

宮頸癌患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1和IgG2 抗體陽性表達者組織低、中分化，Ⅱ～Ⅲ期，有無淋巴結轉移所占比例明顯高于陰性表達者，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表2 血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達與宮頸癌臨床病理特征的關系［n（%）］Table 2 Correlation between positive expression of serum TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies and clinicopathological features of cervical cancer［n（%）］

2.4 宮頸癌血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達影響因素的Logistic 回歸分析

分別以宮頸癌血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達為因變量，以上述單因素分析中P<0.05 的指標為自變量，建立Logistic 回歸模型，結果顯示，組織分化程度、FIGO 分期是宮頸癌患者血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2陽性表達的獨立危險因素（P<0.05）。見表3。

表3 宮頸癌血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達影響因素的Logistic 回歸分析Table 4 Logistic regression analysis of the factors affecting the positive expression of TGF?β1，HPV16VLPS?IgG1 and IgG2 antibodies in serum of cervical cancer

3 討論

HPV 感染常在一年內自然清除，但有一部分難清除的HPV，尤其是HPV16 會導致CIN 甚至宮頸癌的發生［8?9］。HPV 感染能否清除或是持續感染主要取決于機體的免疫力，因此，可以將血清免疫因子水平作為感染HPV 后機體病變的評測指標。

目前已知Th2 細胞可通過分泌炎性因子激活IgG1，Th1 細胞通過分泌TGF?β1 促進其分化為IgG2［10?11］。Wang 等［12］研究發現，HPV 感染者血清IgG1 常顯著升高，且是最終進展為宮頸癌的獨立危險因素，其宮頸癌相對風險隨IgG1 水平的升高而逐漸增加。另有研究發現，大部分血清IgG 抗體（+），而HPV16?DNA（-）的正常女性，其血清抗體主要以IgG2 為主；而48%的HPV16?DNA（+）的CIN 及5%的HPV16?DNA（+）的宮頸癌女性，也能檢測出以IgG2 為主的抗體，提示HPV 感染后以HPV16VLPs?IgG2 抗體為主的免疫反應可能對HPV 感染清除及CIN 的逆轉具有重要預測價值［13?14］。而楊文靜等［15］的研究發現，CIN 和宮頸癌患者血清內TGF?β1 及其受體的濃度均明顯升高，TGF?β1 與癌細胞浸潤、淋巴結轉移和癌癥分期等密切相關，提示TGF?β1 高表達是宮頸癌的主要表現之一，并參與宮頸癌變的發生發展。

本研究結果發現，隨著宮頸病變級別的升高，血清TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達率及吸光度A 值也隨之升高，表明各指標血清學檢測陽性既代表現存HPV 感染，也可表示既往HPV 感染，是累積HPV 的指標而HPV16VLPs?IgG抗體表達可能通過對血清TGF?β1 表達的調控而促進宮頸病變的發生發展。另外，非HPV 感染子宮病變、HPV 感染、CINⅠ患者以IgG2 抗體表達為主，CIN Ⅱ～Ⅲ及宮頸癌患者則以IgG1 抗體表達為主，提示病毒清除與Th1 反應有關，而隨宮頸病變程度級別的升高逐漸向Th2 反應轉變。另外，本研究還發現，宮頸癌組織低、中分化程度以及FIGO 分期為Ⅱ～Ⅲ期是宮頸癌患者TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達的獨立危險因素。提示檢測TGF?β1、HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體陽性表達情況可能對評估宮頸癌病情及預后具有一定的參考價值。

本研究由于HPV 血清檢測存在時間差異，HPV 感染后很長時間內才能在血清中檢測到，許多新近感染HPV 的患者因尚未發生血清轉換而抗體檢測陰性，在接下來的研究中需要對HPV 相關指標作更加準確的分析，為HPV16VLPs?IgG1 和IgG2 抗體、TGF?β1 成為HPV 相關疾病的診斷、治療的有效指標提供依據。