CDK8、CXCL13及REGγ在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義

哈斯圖雅 釵麗干 崔山丹 夏書(shū)琴★

作者單位：1.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古，呼和浩特010017

2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院病理科，內(nèi)蒙古，呼和浩特010017

子宮內(nèi)膜癌（Endometrial Carcinoma，EC）為女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，近年來(lái)發(fā)病率和病死率均有上升趨勢(shì)，對(duì)女性生命健康造成嚴(yán)重威脅［1］。尋找EC 早期診斷及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子標(biāo)志物尤其重要［2］。既往研究發(fā)現(xiàn)，EC 增殖、轉(zhuǎn)移及擴(kuò)散與周期蛋白依賴性蛋白激酶（cyclin?dependent protein kinases，CDKs）表達(dá)情況密切相關(guān)，CDKs在細(xì)胞增殖與分化中具有調(diào)控作用［3］。趨化因子13（Chemokine CXC ligand13，CXCL13）是CXC 類趨化因子家族的一員，在多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［4］。蛋白酶體激活因子11S 調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物γ 亞單位（11S regulator complex gam?ma subunit，REGγ）則是一種定位于細(xì)胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)，與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控存在密切聯(lián)系［5］?；诖?，本研究通過(guò)檢查EC 患者CDK8、CXCL13 及REGγ的水平，旨在探討上述因子水平在EC 中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2015年6月至2019年6月的90 例EC 患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合子宮內(nèi)膜癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］；②臨床資料無(wú)缺損或丟失；③入組時(shí)未接受任何治療，包括藥物、放療及化療等；④主要臟器功能正常，無(wú)嚴(yán)重心、肝腎功能障礙；⑤年齡30～80 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有其他惡性腫瘤患者；②癌癥轉(zhuǎn)移；③近期使用抗焦慮、抑郁等藥物者；④存在認(rèn)知功能障礙者。平均年齡（48.56±6.77）歲；病程平均（3.79±2.58）年；臨床分期：Ⅰ期50 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期21 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例；分化程度：高分化65 例，中低分化25 例。收集同期接受健康體檢的志愿者78 例納入對(duì)照組，平均年齡（47.89±5.46）歲，兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 試劑

鼠抗人CDK8、CXCL13 及REGγ 單克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物工程有限公司；SP 免疫組織化學(xué)系列工作液試劑盒、DAB 顯色劑購(gòu)自河北博海生物有限公司。

1.2.2 染色方法

所有標(biāo)本手術(shù)切除后立即用10%甲醛固定，組織切片后脫蠟、水化。根據(jù)鏈霉素抗生物素蛋白?過(guò)氧化物酶（Streptomycin avidin peroxi?dase，S?P）免疫組化染色法對(duì)CDK8、CXCL13 及REGγ 水平進(jìn)行檢測(cè)，具體方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明執(zhí)行。每批切片染色均以PBS 代替一抗作陰性對(duì)照，CDK8、CXCL13 及REGγ 用已知陽(yáng)性表達(dá)的組織切片作陽(yáng)性對(duì)照。一抗稀釋比例均為1∶100。

1.2.3 結(jié)果判斷［7］

CDK8 呈細(xì)胞膜著色，CXCL13 呈細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜著色，REGγ 呈細(xì)胞核著色，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比、染色強(qiáng)度判定。無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞0 分，陽(yáng)性細(xì)胞<10% 1 分，陽(yáng)性細(xì)胞10%～50% 2 分，陽(yáng)性細(xì)胞>50%3 分。染色強(qiáng)度判定：無(wú)色0 分，淡黃色1 分，棕黃色2 分，棕褐色3 分?？偡e分：上述2 項(xiàng)評(píng)分的乘積。陽(yáng)性：總積分≥3 分。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較對(duì)照組與研究組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達(dá)情況。②分析CDK8、CXCL13 及REGγ 表達(dá)與EC 臨床病理特征的關(guān)系。③對(duì)患者進(jìn)行1年電話隨訪，分析其預(yù)后生存與死亡情況，并影響EC 患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。④分析CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達(dá)對(duì)EC 患者預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)；采用多元Logistic 回歸分析影響EC 患者預(yù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；采用ROC 曲線分析CDK8、CXCL13 及REGγ 對(duì)EC 患者預(yù)后死亡的預(yù)測(cè)價(jià)值；以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達(dá)比較

研究組CDK8、CXCL13 及REGγ 陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達(dá)比較［n（%）］Table 1 Comparison of Cdk8，CXCL13 and reg γ protein expression between 2 groups［n（%）］

2.2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達(dá)與EC 臨床病理特征的關(guān)系

CDK8、CXCL13 的陽(yáng)性表達(dá)者在年齡、腫瘤直徑比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），CDK8、CXCL13 的陽(yáng)性表達(dá)者在分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型、肌層浸潤(rùn)深度及臨床分期比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。REGγ 的陽(yáng)性表達(dá)者年齡、腫瘤直徑、分化程度及臨床分期比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），REGγ 的陽(yáng)性表達(dá)者在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型及肌層浸潤(rùn)深度比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表達(dá)與EC 臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 the relationship between the expression of Cdk8，CXCL13 and reg γ and the clinicopathological features of EC［n（%）］

2.3 影響EC 患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素分析

術(shù)后對(duì)患者進(jìn)行1年隨訪，其中死亡17 例，死亡率為18.89%。多元Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，腫瘤分化程度中低、臨床分期Ⅲ、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CDK8、CXCL13 及REGγ 陽(yáng)性表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表3 影響EC 患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素分析Table 3 Analysis of risk factors influencing the prognosis of EC patients

2.4 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EC 患者預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值

ROC 結(jié)果示，CDK8、CXCL13 及REGγ 聯(lián)合檢測(cè)AUC 為0.769，較單獨(dú)檢測(cè)高。見(jiàn)表4、圖1。

表4 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EC患者預(yù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值Table 4 the prognostic value of Cdk8，CXCL13 and reg γ single and combined detection in EC patients

圖1 CDK8、CXCL13 及REGγ 單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)曲線分析Figure 1 Analysis of single and combined detection curves of Cdk8，CXCL13 and reg γ

3 討論

EC 是臨床婦科最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。其發(fā)病率已有超過(guò)宮頸癌的趨勢(shì)［8］。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是由各種信號(hào)傳導(dǎo)、趨化因子、轉(zhuǎn)錄因子等途徑共同實(shí)現(xiàn)，因此，尋找識(shí)別EC 發(fā)展相關(guān)的新型因子及預(yù)測(cè)預(yù)后的標(biāo)志物是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)［9］。

CDK8 是細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶（Cell cycle dependent protein kinase，CDK）家族中的一員，目前CDK8 基因發(fā)揮致癌作用的機(jī)制尚未十分明確［10］。但國(guó)外已有較多研究表明，CDK8 表達(dá)異常在惡性黑素瘤、結(jié)直腸癌、胃癌的發(fā)生中起到重要作用［11］。而鮮有關(guān)于CDK8 表達(dá)與官頸癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的相關(guān)研究。本組研究結(jié)果與Remy 等［12］研究結(jié)果報(bào)道相符。進(jìn)一步多元Logistic 回歸分析影響EC 患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素發(fā)現(xiàn)，CDK8 陽(yáng)性表達(dá)亦是影響EC 患者死亡的危險(xiǎn)因素，因此可推斷CDK8 也可作為評(píng)估EC 患者預(yù)后的指標(biāo)之一。

CXCL13 是自于趨化因子家族的細(xì)胞因子，可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，最終誘發(fā)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Bhatti 等［13］研究表明，CXCL13 在惡性腫瘤，如肝癌、胃癌中均呈高表達(dá)，其表達(dá)率與患者術(shù)后生存率密切相關(guān)。Shea等［14］研究發(fā)現(xiàn)，CXCL13 抑制劑可通過(guò)作用于CX?CR5/ERK 信號(hào)通路來(lái)減弱腫瘤組織的生長(zhǎng)。多元Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，CXCL13 陽(yáng)性表達(dá)是影響EC 患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素?？梢?jiàn)CXCL13 表達(dá)在EC 的惡性進(jìn)展過(guò)程中具有重要作用，其高表達(dá)提示預(yù)后不良，這可能與與CXCLl3 促進(jìn)腫瘤新生血管的生成及腫瘤細(xì)胞的增殖活化、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

REGγ 是一種定位于細(xì)胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，該因子在乳腺癌、直腸癌等惡性腫瘤中呈高表達(dá)，被認(rèn)為是一種潛在的癌癥標(biāo)簽［15］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組比較，EC 患者REGγ 陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，且與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型及肌層浸潤(rùn)深度有關(guān)，推測(cè)REGγ 對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的晚期評(píng)估和預(yù)后監(jiān)測(cè)可能起到輔助作用。進(jìn)一步ROC 曲線分析提示聯(lián)合檢測(cè)上訴指標(biāo)可作為預(yù)測(cè)患者預(yù)后生存的有效手段。但是，EC發(fā)展過(guò)程是一個(gè)有多級(jí)因子作用的復(fù)雜過(guò)程，由于本研究納入樣本量較少，有可能造成統(tǒng)計(jì)學(xué)上有所偏差，因此尚需要大樣本量研究證實(shí)。

綜上所述，CDK8、CXCL13 及REGγ 在EC 中陽(yáng)性表達(dá)率高，推測(cè)CDK8、CXCL13 及REGγ 參與了EC 組織增生、分化及發(fā)展過(guò)程，臨床上可通過(guò)檢測(cè)三者表達(dá)情況對(duì)患者病情進(jìn)展及預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。