p16、Ki?67檢測在宮頸上皮內瘤變診斷及宮頸癌篩查中的價值

陳煒 周寧 廖茜 彭君臣

作者單位：1.四川綿陽四○四醫院婦科，四川，綿陽621000

2.四川綿陽四○四醫院病理科，四川，綿陽621000

上皮內瘤樣病變（cervical intraepithelial neo?plasia，CIN）是一組與宮頸浸潤癌密切相關的癌前期病變的統稱，反映了宮頸癌發生中連續發展的過程［1?2］。大部分低級別CIN 可自然消退，但高級別具有癌變潛能。宮頸癌發病隱匿、疾病進展緩慢，早期無特異性臨床癥狀，為早期預防、診治帶來一定困難［3］。因此，在宮頸癌前病變階段檢出反映病變進展的標志物，對宮頸癌的早期防治具有重要意義［4］。細胞增殖失控是發生惡性病變的重要原因，抑制基因蛋白16（Suppressor gene protein 16，p16）為細胞周期蛋白激酶的抑制因子，p16?Cy?clinD1?CDK?Rb 組成的調控途徑與宮頸腫瘤的發生有關［5］。原癌基因細胞增殖核抗原（nuclcar?as?sociated antigen，Ki?67）是一種核蛋白，在維持細胞增殖活性中具有重要作用［6］。本組研究通過檢測p16、Ki?67 在CIN 及宮頸癌中的表達，探討其在診斷CIN 及宮頸癌篩查中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2017年4月至2020年4月活檢或手術切除的子宮頸組織標本共106 例。納入標準：①年齡大于25 歲以上女性；②臨床病歷資料完整；③已婚或有過性生活；④均符合CIN 及宮頸癌的診斷標準［7］，且病理結果經2 位或以上經驗豐富的病理科醫師確診。排除標準：①孕婦、產婦及哺乳期婦女；②合并其他惡性疾病者；③術前接受放療、化療者；④標本信息不全的標本。

最終共納入81 例，平均年齡為（45.87±13.52）歲。其中CIN 共54 例（Ⅰ級21 例，Ⅱ級18 例，Ⅲ級15 例），宮頸癌13 例（組織學分級：Ⅰ級6 例，Ⅱ級5 例，Ⅲ級2 例），正常宮頸黏膜上皮14 例。

1.2 方法

采用S?P 免疫組化染色，標本均用甲醛溶液浸泡，常規脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，4.0 μm 厚度連續切片。然后根據S?P 免疫組化染色法對p16、Ki?67 進行檢測。主要試劑：鼠抗人p16 單克隆抗體、鼠抗人Ki?67 單克隆抗體，上述抗體及SP 法超敏試劑盒均由福州邁新生物技術開發公司生產。檢測過程嚴格按照說明進行。一抗陰性對照使用PBS（磷酸鹽緩沖液）進行代替。

染色結果判斷［8］：p16、Ki?67 陽性存在于細胞核或細胞漿內，以棕黃色顆粒為主。結果根據陽性細胞百分比、染色強度綜合判定。陽性細胞百分比：無陽性細胞0 分，陽性細胞<10% 1 分，陽性細胞10%～50%2 分，陽性細胞50%～75%3 分，陽性細胞≥75% 4 分。染色強度判定：無色0 分，淡黃色1 分，棕黃色2 分，棕褐色3 分。通過上述兩項評分的乘積來綜合判定結果：0～3 分為陰性（-），4～5 分為弱陽性（+），6～7 分為中度陽性（++），8～12 分為強陽性（+++）。

1.3 觀察指標

比較CIN、宮頸癌、正常宮頸黏膜上皮p16、Ki?67 免疫組化結果；分析p16、Ki?67 及兩者聯合檢測鑒別診斷CIN、宮頸癌、正常宮頸黏膜上皮的敏感性、特異性及準確性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行統計分析；計數資料采用n（%）表示，行χ2檢驗；不同組織p16、Ki?67 表達采用秩和檢驗；以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CIN、宮頸癌、正常宮頸黏膜上皮中p16、Ki?67 表達情況

在不同組織類型中，p16、Ki?67 陽性表達率（P<0.05）。CIN 中，p16、Ki?67 陽性表達率隨CIN等級增加而上升（P<0.05）。見表1。

表1 CIN、宮頸癌、正常宮頸黏膜上皮中p16、Ki?67 表達情況［n（%）］Table 1 expression of p16、Ki?67 in CIN，cervical cancer and normal cervical epithelium［n（%）］

2.2 p16、Ki?67 及兩者聯合檢測鑒別診斷CIN、宮頸癌的價值

p16 鑒別診斷CIN、宮頸癌的敏感性與Ki?67 比較差異無統計學意義（P>0.05），但p16+Ki?67 聯合診斷的敏感性高于單獨的p16、Ki?67 檢測，差異有統計學意義（χ2=6.500、4.887，P=0.011、0.027）。三種檢測方法的特異性數據比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

表2 p16、Ki?67 檢測鑒別診斷CIN、宮頸癌的價值［n（%）］Table 2 the value of p16，Ki?67 in differential diagnosis of CIN and cervical cancer［n（%）］

2.3 3 種檢測方法效果評價

采用ROC 曲線分析p16、Ki?67 及兩者聯合檢測對CIN、宮頸癌鑒別診斷價值，各指標曲線下面積分別為0.751、0.675 及0.769，其中以聯合檢測的預測價值最佳。見圖1。

圖1 3 種檢測方法的ROC 曲線Figure 1 ROC curve of 3 detection methods

3 討論

宮頸癌又稱為子宮頸癌，系指發生在宮頸陰道部或移行帶的鱗狀上皮細胞及宮頸管內膜的柱狀上皮細胞交界處的惡性腫瘤。相關研究顯示，宮頸癌主要是由高危型HPV 導致宮頸鱗狀上皮發生異型增生引起，由CIN 等癌前病變長期發展形成，但并非所有的CIN 都會發展為癌，且CIN 發展為癌的過程較長［9。因此，正確預測CIN 的發展，對宮頸癌早期防治和預防CIN 患者過度治療具有重要意義。

p16 是在人染色體9p21 中發現的一個直接參與細胞周期調控的抑癌基因。對于正常細胞的HPV 一過性感染，檢測不到p16 表達；而在HPV 轉化性感染后，可使抑癌基因失活，致癌基因E6和E7過表達，細胞無限制增殖，引起p16 的過度表達，并被免疫組化檢測到［10］。Ciesielska 等［11］報道指出，CIN 和宮頸癌中網膜母細胞基因的失活會導致p16 表達升高。本組研究結果提示p16 高表達參與宮頸上皮內瘤變到癌的演進過程，故連續監測p16 表達可有效反映宮頸黏膜病變進展情況。

Ki?67 的表達出現于除G0和G1早期之外的細胞周期中，細胞有絲分裂后其蛋白含量迅速減少，是全面反映細胞群增殖活性的可靠指標［12］。高度增生的細胞多與癌前病變組織及惡性組織相關，增生常被認為是生長紊亂的早期指標［13］。Ki?67 是目前已知的增殖抗原中最具增殖能力代表性，且應用廣泛的細胞增殖標記之一［14］。本組研究中，Ki?67陽性表達率隨宮頸病變嚴重程度加重而增高，提示在宮頸癌發生發展過程中，細胞增殖活性也逐漸增強。因此Ki?67 可作為預測CIN 和宮頸癌發生、發展過程中的重要標記物。

Ovestad I 等［15］研究發現，增加p16 免疫組化染色結合HE 切片，可提高高級別CIN 的診斷準確性、敏感性。病理學專家在診斷高級別CIN 中，發現p16 染色表現的重復性極好，可明顯改善宮頸組織病理的常規診斷［16］。本組研究結果發現p16+Ki?67聯合診斷的敏感性高于單獨的p16、Ki?67 檢測。由此可見單一的p16 用于診斷宮頸病變誤診率較小，但存在一定漏診率，因此認為p16 染色不適用于早期發現宮頸病變。而單一的Ki?67 在診斷宮頸病變上漏診率較小，但誤診率高，而聯合兩種標記物能有效提高診斷的可靠性。

綜上所述，p16、Ki?67 陽性表達率隨宮頸病變嚴重程度加重而增高，兩者聯合檢測可有效區分不同等級CIN 及宮頸癌，可作為宮頸癌前病變進展的一個敏感標志物，能準確識別高級別CIN 病變并及時治療，阻斷宮頸癌變進程，為臨床早期預防、診治宮頸癌前病變及宮頸癌提供了可靠的理論依據。