產前診斷中羊水細胞培養與染色體核型分析的應用及對出生缺陷的預防價值

劉丹丹

【摘要】 目的：探究產前診斷中羊水細胞培養與染色體核型分析的應用及對出生缺陷的預防價值。方法：選取2017年12月-2019年12月于本院分娩的182例產婦的臨床資料進行回顧性分析。將91例行常規超聲產前診斷的產婦作為對照組，將91例使用羊水細胞培養與染色體核型分析進行產前診斷的產婦作為研究組。以實際情況為金標準，對比兩組產前診斷情況，分析出生缺陷者的臨床特征。結果：以實際情況為金標準，共62例發生出生缺陷。研究組的漏診、誤診率均低于對照組（P<0.05），且研究組的診斷準確率明顯高于對照組（P<0.05）;發生出生缺陷者的無創檢查異常率、夫妻一方染色體異常率、唐氏篩查異常率、高齡產婦及不良孕產史占比均高于未發生出生缺陷者（P<0.05）。結論：將羊水細胞培養與染色體核型分析應用于產前診斷中可以降低出生缺陷的誤診率和漏診率，進一步提高產前診斷準確率。分析異常染色體核型的檢出情況，可為臨床上優生優育提供重要依據，有效降低出生缺陷的發生率，值得推廣應用。

【關鍵詞】 產前診斷 羊水細胞培養 染色體核型分析 出生缺陷

Application of Amniotic Fluid Cell Culture and Chromosome Karyotype Analysis in Prenatal Diagnosis and Its Preventive Value to Birth Defects/LIU Dandan. //Medical Innovation of China， 2021， 18（14）： -155

[Abstract] Objective： To explore the application of amniotic fluid cell culture and chromosome karyotype analysis in prenatal diagnosis and the value of preventing birth defects. Method： The clinical data of 182 parturient women who delivered in our hospital from December 2017 to December 2019 were retrospectively analyzed. 91 parturient women underwent routine prenatal diagnosis by ultrasound were selected as the control group， and 91 parturient women underwent prenatal diagnosis by amniotic fluid cell culture and karyotype analysis were selected as the study group. The actual situation was used as the gold standard to compare the prenatal diagnosis of the two groups， the clinical characteristics of birth defects was analyzed. Result： According to the actual situation as the gold standard， there were 62 cases of birth defects. The rates of missed diagnosis and misdiagnosis in the study group were lower than those in the control group （P<0.05）， and the diagnostic accuracy in the study group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）. The abnormal rate of noninvasive examination， abnormal rate of chromosome of one spouse， abnormal rate of Downs screening， the proportion of advanced maternal age and adverse pregnancy history in the patients with birth defects were all higher than those without birth defects （P<0.05）. Conclusion： The application of amniotic fluid cell culture and chromosome karyotype analysis in prenatal diagnosis can reduce the rate of misdiagnosis and missed diagnosis of birth defects and further improve the accuracy of prenatal diagnosis. The analysis of abnormal chromosome karyotype detection can provide an important basis for prenatal and postnatal care in clinical practice， and effectively reduce the incidence of birth defects， which is worthy of popularization and application.

[Key words] Prenatal diagnosis Amniotic fluid cell culture Chromosome karyotype analysis Birth defects

First-authors address： Jiamusi Maternal and Child Health Hospital， Jiamusi 154002， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.14.036

現階段，降低新生兒出生缺陷的最主要方法是進行產前診斷。其中出生缺陷中以染色體病為重要因素[1]。現階段，對孕中期孕婦進行羊膜腔穿刺，其中最為普遍和安全的診斷方法是實施羊水細胞體外培養以及染色體核型分析[2]。自20世紀首次對羊水實施體外培養以及染色體核型分析開始，通過多年的持續發展，羊水細胞的體外培養、染色體核型分析得到完善[3]。隨著目前臨床上新生兒出生缺陷的數量增加，羊水細胞的體外培養、染色體核型分析在產前診斷中更具有價值性[4]。本文研究分析了產前診斷中羊水細胞培養與染色體核型分析的應用及預防出生缺陷的價值，其報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年12月-2019年12月于本院分娩的182例產婦的臨床資料進行回顧性分析。納入標準：均進行產前診斷并成功分娩;單胎妊娠;依從性高。排除標準：存在嚴重的心、肝等重要器官疾病者;存在意識障礙;臨床資料不完整;中途退出。將91例行常規超聲產前診斷的產婦作為對照組，將91例使用羊水細胞培養與染色體核型分析進行產前診斷的產婦作為研究組。本研究已經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 對照組 行常規產前超聲檢查。B超檢查可以檢查出胎兒身體結構上的畸形情況，還能查出內臟發育畸形，一般適宜于妊娠18～22周。孕中期則利用其影像檢查結果判斷胎兒結構是否出現異常。產前超聲檢查可發現羊水量異常（過多、過少）;胎兒宮內發育遲緩;胎兒水腫;頭面部畸形;神經管畸形;消化道畸形;泌尿系畸形等。

1.2 2 研究組 行羊水細胞培養與染色體核型分析。（1）羊膜腔穿刺術：以B超對胎盤的具體位置、羊水最佳穿刺點進行精確定位，對穿刺部位進行常規性的無菌消毒，隨后經腹壁實施羊膜腔穿刺術。利用20 mL注射器采集20 mL羊水，將注射器進行嚴格的密封，放置在無菌條件下短時間內送檢。（2）羊水細胞接種培養：借助無菌超的凈臺將所采集到的羊水注入15 mL無菌的離心管中，每管10 mL，利用1 500 r/min的離心儀器在常溫狀態下實施離心活動10 min，移去血漿上清液，保留約0.5 mL的上清液，加入5 mL的羊水全培養基，均勻混合后加入25 cm2的培養皿中培養，分兩線培養，其培養周期為6～7 d。（3）獲取細胞及進行制片：經過6～7 d的培養后，利用倒置顯微鏡觀察細胞的具體生長狀態，將新鮮培養液持續更新，每天對其進行觀察，2～3 d后，每個細胞島持續成長且達到70%～80%的細胞融合度，且存在不同數量的透亮細胞，其主要呈現圓形、類圓形的兩類形態，進一步獲取所使用的細胞。獲取前1 d或獲取當天應繼續保持培養液的更換，混入秋水仙素，最終將培養液的濃度維持在0.1 μg/mL，持續進行4～4.5 h，如鏡下觀察中存在許多“魚眼樣”的透明細胞，則表明細胞處于可以獲取狀態。將培養上清吸取到新的離心管中，融入濃度為0.25%的胰酶，在37 ℃的恒溫環境下消化約2 min，利用1 000 r/min的離心儀器實施10 min的離心操作，取出上清液，加入劑量為0.075 mol/L 的KCl低滲液，在37 ℃的恒溫環境下靜置12～13 min，利用配比為3︰1的甲醇/冰醋酸進行預固定、固定后，滴片且隨后常規G顯帶進行染色體分析。（4）核型分析。利用顯微鏡進行常規的計數，其內容包括：核型表現為分散良好時，其存在30個中期分裂象。異常核型出現時，其計數包括50個分裂象，如對所獲取細胞進行觀察時出現不低于2個數目的異常情況則應該對全部分裂象實施計數，通過染色體核型分析軟件有效獲取清晰的核型圖像，研究分析其中的3～5個核型。隨后依據具體計數情況出具報告，進而提供具有價值和參考性的遺傳咨詢意見。

1.3 觀察指標 （1）對比兩組產婦的產前診斷情況。胎兒出生后1個月檢查有無出生缺陷，以實際情況為金標準，對比兩組漏診、誤診和診斷準確情況。（2）分析發生出生缺陷者的臨床特征。比較有無出生缺陷者的無創檢查異常、夫妻一方染色體異常、高齡產婦（≥35歲）、唐氏篩查異常、不良孕產史以及其他異常情況。

1.4 統計學處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 對照組年齡22～45歲，平均（33.5±1.5）歲;孕周20～22周，平均（21.0±1.2）周;孕次：1～2次，平均（1.5±0.2）次。研究組年齡22～46歲，平均（34.0±1.6）歲;孕周20～22周，平均（21.0±1.2）周;孕次：1～3次，平均（2.0±0.1）次。兩組孕婦一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組產前診斷情況比較 以實際情況為金標準，共62例新生兒存在出生缺陷。研究組的漏診率、誤診率均低于對照組（P<0.05），且研究組的診斷準確率明顯高于對照組（P<0.05），見表1。

2.3 出生缺陷者的臨床特征分析 臨床實際情況顯示，發生出生缺陷62例，未發生出生缺陷120例。發生出生缺陷者的無創檢查異常率、夫妻一方染色體異常率、唐氏篩查異常率、高齡產婦及不良孕產史占比均高于未發生出生缺陷者（P<0.05），見表2。

3 討論

新生兒出生缺陷是新生兒在出生時存在機體外在、內在結構或功能發生異常的一種綜合征，其主要是由于遺傳、環境或兩者聯合等多種因素相互作用造成的，染色體異常是遺傳因素中最具代表性的現象[5]。經過不完全統計，我國國內一年超過10萬新生兒出現染色體異常情況，活產新生兒中存在約0.5%的染色體核型異常，其中0.12%～0.17%出現唐氏綜合征，約0.1%出現性染色體異常情況[6]。臨床表明高風險孕婦妊娠胎兒出現染色體核型異常的概率高于健康正常孕婦[7]。出生缺陷的種類較多，一方面對新生兒的生活質量產生極大的影響，同時為家庭、社會帶來極大的壓力[8]。出生缺陷能夠利用產前診斷及時發現，有效地降低出生缺陷的發生[9]。因此產前診斷對于減少出生缺陷具有極為關鍵的作用，在將羊水細胞培養與染色體核型分析應用于產前診斷中能夠盡早終止妊娠，減少對母體的傷害，促進其優生優育[10]。

隨著羊水細胞培養和獲取技術以及染色體核型分析技術的持續提高，產前診斷的診斷準確率隨之增加[11]。經研究結果顯示，研究組的漏診率、誤診率均低于對照組（P<0.05），且研究組的診斷準確率明顯高于對照組（P<0.05），說明在產前診斷中應用羊水細胞培養與染色體核型分析能夠明顯提高診斷準確性，有利于優生優育。主要是因為：（1）新生兒出生缺陷主要是由于環境和遺傳因素造成的，而大部分患兒均存在遺傳因素，遺傳因素的異常均體現在機體的染色體核型中，在產前診斷對其進行染色體核型分析能夠準確地診斷出因遺傳因素形成的缺陷[12-13]。（2）羊水細胞的最佳采集時間為20～22周，羊水在這一時期具有較強的活力，極易貼壁，處于生長旺盛狀態，能夠更加清晰的反映新生兒的實際情況，從而進一步提高產前診斷出生缺陷的準確率[14-15]。

本研究結果顯示，發生出生缺陷者的無創檢查異常率、夫妻一方染色體異常率、唐氏篩查異常率、高齡產婦及不良孕產史占比均高于未發生出生缺陷者（P<0.05），說明無創檢查異常、夫妻一方染色體異常、高齡產婦和唐氏篩查異常、不良孕產史及其他異常均屬于形成出生缺陷的影響因素，其中夫妻一方染色體異常與染色體病具有緊密的關系。應用羊水細胞培養與染色體核型分析進行產前診斷能夠提高染色體異常的檢出數量。分析和掌握羊膜腔穿刺指征，能夠提高胎兒染色體異常的檢出率，從而縮短產前診斷的時間，進一步提高產前診斷的準確率，為終止妊娠和治療提供具有針對性的指導，從而更好地落實優生優育的國策[16-20]。

綜上所述，將羊水細胞培養與染色體核型分析應用于產前診斷中可以減少胎兒畸形的誤診率和漏診率，進一步提高產前診斷準確率，同時分析異常染色體核型的檢出情況，有效降低出生缺陷的發生率，為臨床上優生優育提供重要依據，值得推廣應用。

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（收稿日期：2020-08-18） （本文編輯：田婧）