白鮮皮抑制酪氨酸酶作用研究及其美白面膜制備*

楊 宇，宋孟霜，陳 婕，王姝萱，劉 暢，李欣然，陳曉霞

(遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧 大連 116600)

隨著人民生活水平的提高，越來越多的女性朋友關注皮膚保養。面膜作為女性朋友必備的基礎護膚品市場應用前景廣闊，尤其是美白面膜。純中藥面膜因其藥效顯著、作用溫和、副作用小等優點，贏得了廣大女性消費者的青睞[1]。然而市場上中藥美白面膜種類并不多，有待開發。白鮮皮為蕓香科白鮮屬植物白鮮的干燥根皮, 味苦, 性寒,具有清熱解毒、祛風止癢等功效[2]。其藥理作用包括抗菌、抗炎、抗過敏、止血、殺蟲、抗腫瘤以及神經保護[3]。其主要化學成分有黃酮類、檸檬苦素類、生物堿類等[4]?！侗静菥V目》記載白鮮皮具有潤膚白面功效，《備急千金藥方》記載白鮮皮可治黑面不凈。酪氨酸酶能催化左旋多巴生成酪氨酸，進一步催化酪氨酸生成黑色素的作用[5]，現代研究中也發現高濃度白鮮皮石油醚提取物具有抑制酪氨酸酶作用[6]，表明白鮮皮具有美白功效。本實驗對不同濃度的白鮮皮水提物及醇提物抑制酪氨酸酶作用進行研究，并且制備了美白功效好，無不良反應的純中藥美白面膜。

1 實 驗

1.1 材料和設備

白鮮皮(產地遼寧)購自毫州市中藥材市場，經遼寧中醫藥大學鑒定教研室王添敏教授鑒定為蕓香科白鮮屬多年生草本植物白鮮的根皮。酪氨酸酶，Sigma 公司；L-酪氨酸，Sigma 公司；磷酸二氫鉀；氫氧化鈉；磷酸；磷酸氫二鈉；濃鹽酸；賽比克；卡波姆；冰片；維生素 E ；二甲基硅油均為市售分析純，購與大連辰玉試劑公司。

T500 型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠； SHZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵,鞏義市予華儀器責任有限公司；DZKW-S-4 電熱恒溫水浴鍋,蘇州江東精密儀器有限公司； RE52旋轉蒸發儀,上海亞榮生化儀器廠； U3010紫外-可見分光光度計，日本日立公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 白鮮皮提取物的制備

取白鮮皮10.00 g，精密稱定，置250 mL的錐形瓶中，精密加水或75%乙醇100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸回流提取1 h，共提取三次。合并三次提取液后進行真空抽濾,減壓濃縮干燥得白鮮皮水提物及醇提物，水提物以PBS溶解分別配置成含生藥濃度為1，2，4，8，16 mg/mL溶液；醇提物以適量的DMSO溶解后，以PBS溶解分別配置成含生藥濃度為1，2，4，8，16 mg/mL溶液。

1.2.2 酪氨酸酶的抑制活性測定[7]

分別配制 pH=6.8 的 PBS(磷酸鹽緩沖液)、1.0 mg/mL 的 L-酪氨酸溶液和70 μg/mL的酪氨酸酶溶液。按照以下配比加樣。

測試樣1：2.0 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液+0.5 mL L-酪氨酸溶液；測試樣 2：2.5 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液；

測試樣 3：0.5 mL 樣品溶液+1.5 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液+0.5 mL L-酪氨酸溶液；

測試樣 4：0.5 mL 樣品溶液+2.0 mL PBS+0.5 mL 酪氨酸酶溶液。

將各測試樣混勻，將每個樣品的 1～4 種測試樣混勻，置 37 ℃水浴中 30 min，立即取出在 475 nm 處測吸光度(A1～A4)。按下式計算酪氨酸酶抑制率：

1.2.3 美白面膜制備

取賽比克和卡波姆各1 g溶于 100 mL蒸餾水中，制成 A液，另取 50 mL蒸餾水，加入 0.5 g 冰片、少量維生素 E、15 g 二甲基硅油和120 mg 白鮮皮醇提物，攪拌溶解成 B，將 A 和 B 同時加入燒杯中，并水浴加熱 20 min，溫度保持在 37 ℃，混勻制得面膜。

1.2.4 面膜的性能測定

1.2.4.1 pH測定

取5.0 g 面膜試樣放入燒杯中，加入 50 mL新煮沸防冷的去離子水，邊加熱邊攪拌至 37 ℃，冷卻到室溫后，用酸度計進行測定。

1.2.4.2 高、低溫實驗

將面膜試樣兩份置于密閉容器中，將一份置于-20 ℃的冰箱中，另一份入 37 ℃的恒溫保溫箱中， 24 h 后取出恢復到室溫后觀察外形。

1.2.4.3 黏度的測定

取足量的面膜試樣于燒杯中，在 25 ℃的恒溫狀態下，選擇合適的轉子與轉速測定黏度。

1.2.4.4 離心力測定

將面膜試樣置入試管中，至于離心機中，在3000 r/min，離心10 min，觀察其是否分層。

1.2.4.5 感官性能評價

隨機選擇20名自愿者，男女各10名，先在手背上涂抹面膜制品，大約3到8 cm2，待20 min后揭下觀察皮膚現象，待確定無刺激性反應后將面膜均勻涂抹在臉部三角區，待20 min后揭下觀察皮膚現象并對面膜制品進行評價。

2 結果與討論

2.1 白鮮皮提取物對絡氨酸酶活性抑制作用

以 L-酪氨酸為底物, 研究不同濃度白鮮皮水提物及醇提物對酪氨酸酶活性抑制作用, 結果如圖 1 所示。結果表明白鮮皮水提物及醇提物去對L-酪氨酸的酶促氧化進程均表現出抑制作用, 且呈現濃度依賴性抑制。其中各濃度醇提物較水提物對酪氨酸酶的抑制作用更為顯著,在實驗濃度范圍內, 16 mg/mL白鮮皮醇提物對酪氨酸酶的抑制率高達 76%，因此有望開發成美白產品。

圖1 白鮮皮提取物對酪氨酸酶活性抑制作用

2.2 美白面膜性能評價結果

本實驗制備的美白面膜性能評價指標見表2，可見制備的面膜外觀顯透明色，呈弱酸性，清涼無刺激感，粘稠度適中，易于貼敷。常溫下面膜的pH 值穩定符合《中華人民共和國輕工行業標準》規定。

表1 理化檢測指標、感官及穩定性實驗結果

2.3 感官性能評價結果

20 名自愿者使用面膜進行后無不適感，并對面膜進行了評分，如表3。

表2 面膜成品的感官性能評價表

3 結 論

酪氨酸酶是皮膚黑色素生物合成的關鍵酶[8],不僅決定黑色素合成的速率,還是黑色素細胞分化成熟的特征性標志[9]，臨床上可以通過抑制酪氨酸酶活性來美白皮膚、治療雀班、褐斑、黑斑病等黑色素過度沉淀的疾病。由實驗結果可知，同濃度的白鮮皮醇提取物較水提物對酪氨酸酶抑制率高，且兩種提取物的抑制作用均存在計量依賴性，濃度越高，抑制作用越強。醇提物在濃度為16 mg/mL時，其抑制率可高達76%。查閱文獻，白鮮皮主要活性成分黃柏酮、梣酮和白鮮堿均在醇提物中，由此白鮮皮抑制酪氨酸酶的主要成分可能是其主要活性成分，有待進一步研究。以白鮮皮醇提物為美白活性成分，制備了pH值符合《中華人民共和國輕工行業標準》規定，外觀

顯透明色，清涼無刺激感，粘稠度適中，易于貼敷，受到受試者好評的美白面膜，渴望開發成產品，創造更大的經濟空間。