細菌培養法與熒光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)對妊娠晚期B族鏈球菌篩查的應用價值比較

金嫻，樊春卉，譚萍，劉璇，陳芳

深圳市鹽田區人民醫院(深圳, 518081)

0 引言

B族鏈球菌（GBS）通常會定植在女性陰道內及腸道中，是誘發羊膜腔感染、早產及胎膜早破的高危因素[1]。另外，GBS能夠經產道進行垂直傳播，從而導致新生兒出現GBS感染，并存在誘發新生兒敗血癥、肺炎及腦膜炎的風險[2]。相關統計資料顯示[3]，孕婦感染GBS的發生率約為11%～32%，并且其中的39%～68%又會傳播給新生兒，圍生期的GBS感染會嚴重威脅母嬰生命安全。因此，對孕產期孕婦開展GBS感染篩查對于保證母嬰健康意義重大。以往多通過直接檢測孕婦陰道及肛門內分泌物完成GBS感染的篩查，但檢出率相對較低，與發達國家20%～30%的檢出率相比還有一定差距[4]。因此，亟待尋求一種更加高效、準確的檢測方案應用于此，本次研究旨在明確實施傳統常規檢測前進行標本增菌培養對GBS感染檢出率的影響，報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本次研究對象均為接受GBS感染篩查的妊娠晚期孕婦，共計300例，納入時間介于2019年3月—2019年9月，產婦孕期介于35周～37周之間；年齡介于22歲～41歲之間，平均年齡為（29.72±1.30）歲。納入標準：孕周經B超核實相符；一周內無性生活；兩周內無抗生素藥物治療史；不存在陰道流血癥狀；單活胎；孕婦對本研究知情同意；經本院倫理委員會批準。排除標準：取樣部位曾用藥、灌洗或使用過栓劑者；合并生殖道感染者；合并免疫系統疾病者；并發內外科疾病者。

1.2 方法

1.2.1 標本采集

分別采集所有納入對象陰道、直腸分泌物作為檢測標本，取材過程中首先擦去外陰分泌物，將2支拭子插入陰道下1/3部位，旋轉1周后完成陰道分泌物的采集。隨后將2支拭子于肛門插入，在肛門括約肌上2.5 cm處旋轉1周完成直腸分泌物的采集。最后將2支拭子放進無菌管送檢。

1.2.2 增菌培養

將其中采集的一份標本按照無菌操作方法置于選擇性肉湯培養基中進行增菌培養，接種羊血脂平板培養基，分區劃線，于5%～10%CO2恒溫培養箱（35 ℃）中培養18 h留存，再另取一部分增菌培養18 h后的標本以同樣條件繼續培養18 h留存，共獲得三份不同時間段（增菌前、增菌18 h及增菌36 h）標本。

1.2.3 細菌培養法檢測

取原始標本及增殖培養18 h、36 h增殖液分別接種血平板，于5%～10%CO2恒溫培養箱（35 ℃）中培養，挑取可疑菌落做涂片實施革蘭染色鏡檢，革蘭染色陽性，觸酶試驗陰性，CAMP試驗陽性為GBS，GBS菌落特征表現為透光、灰白色、光滑、濕潤、凸起，化膿鏈球菌、無乳鏈球菌分別作為陰性、陽性對照，而后經VITEK2全自動微生物鑒定系統檢測確認。

1.2.4 PCR法檢測

取原始標本加入1 mL生理鹽水振蕩混勻離心后去上清及及增殖培養18 h、36 h增殖液各1 mL離心后去上清，加入DNA提取液，100 ℃裂解10 min，12 000轉/min離心5 min，取上清5 μL作為模板進行PCR擴增。PCR體系中加入內參照系統將可能存在的假陰性結果排除，FQ-PCR法檢測陽性評價標準為CT指標＜38 Hu且熒光信號曲線呈S形。

1.3 觀察指標

對比細菌培養法與FQ-PCR法直接篩查及增菌培養18 h、36 h篩查GBS感染的檢出率。

1.4 統計學分析

以SPSS 22.0統計學軟件分析整理研究數據，通過百分數（%）的形式呈現GBS感染檢出率并行卡方檢驗，P＜0.05說明差異有統計學意義。

2 結果

兩種檢測方法在增菌18 h、36 h后的檢出率均顯著高于直接檢測（P＜0.05）；FQ-PCR法直接檢測的檢出率顯著高于細菌培養法（P＜0.05）；FQ-PCR法增菌18 h及36 h后的檢出率均高于細菌培養法，但組間差異無差異有統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 細菌培養法與PCR法檢測GBS感染的陽性率對比[n(%)]Tab. 1 Comparison of positive rates of GBS infection by bacterial culture and PCR

3 討論

妊娠期孕婦受陰道pH值變化、機體免疫能力降低、體內雌激素及孕激素水平升高等因素影響，往往會致使其陰道菌群出現失調情況，并最終為GBS感染及細菌增殖提供了便利條件［5-6］。相關研究指出［7］，分娩前4 h予以孕婦抗生素治療可大為降低新生兒感染GBS風險，因此，如何對孕產婦GBS感染情況加以快速確診具有異常重要的臨床意義。

本次研究結果顯示，細菌培養法直接檢測、增菌18 h及36 h后檢測GBS感染的檢出率分別為2.33%、9.33%、10.67%，FQ-PCR法各時段檢出率分別為9.00%、12.67%、14.00%，兩種檢測方法增菌后的檢出率均顯著提升（P＜0.05）；FQ-PCR法直接檢測的檢出率顯著高于細菌培養法（P＜0.05）；FQ-PCR法增菌18h及36h后的檢出率均高于細菌培養法，但組間差異無差異有統計學意義（P＞0.05）。提示PCR法各時段篩查GBS感染的陽性檢出率較之細菌培養法更高，且檢出率隨著增菌時間的延長明顯增加。通過分析可知，檢測過程中有多方面因素可能會對細菌培養法的準確性產生影響［8］。其一，其他種類的細菌生長有可能會對GBS繁殖產生抑制作用，致使GBS有效細菌量不足，而增加培養難度，并導致檢測結果出現假陰性［9］；其二，標本受環境溫度、保存條件等客觀因素的影響，存在GBS死亡情況，進而造成漏診［10］。而FQ-PCR法檢出率高于細菌培養法的原因在于熒光PCR技術可通過擴增獲取并增加特定的DNA片段，從而保證檢出率能夠有所提高［11］。同時擴增后還能夠將微量病原菌及死亡GBS檢測出來，因此其敏感度相對更高，從而提高檢出率，因此篩查效率會更高［12］。此外，本研究中應用先增菌再實施GBS篩查的方案，進一步優化常規檢測程序，將不同方案的積極作用充分優化組合，促使總體檢出率得到了提升。

綜上所述，在增菌基礎上應用細菌培養法或FQ-PCR法篩查GBS感染的陽性檢出率較之直接檢測均有所提高，且操作簡便，同時FQ-PCR法各時段的檢出率均高于細菌培養法，使感染孕婦可早期用藥治療，進一步保證母嬰安全，優化妊娠結局，值得推廣。